COVID-19の唾液運搬を減らすマウスウォッシュの有効性

プロジェクトの目的:

目的 1: リアルタイム逆転写酵素定量的 PCR (ポリメラーゼ連鎖反応) を使用して、ウイルス負荷を定量化することで、口腔微生物叢を減少させることが知られているうがい薬の使用前後の個人の COVID-19 の唾液保菌を調べること。

研究戦略:

A. 募集とベースライン データ:

これは、横断的インターベンション 4 アーム研究です。 オハイオ州立大学医療センターで COVID-19 の治療を受けている 18 歳から 80 歳までの 60 人の被験者が募集されます。 サンプルサイズの見積もりの​​基礎となるデータはなく、調査員はオハイオ州の人口の代表的なサンプルを取得しようとして、この数に到達しました. 潜在的な被験者が参加に関心がある場合、研究コーディネーターは候補者から連絡先情報を収集し、同意書がこれらの個人に提示されます。 被験者には、読み、質問するための十分な時間が与えられます。これらのフォームに署名すると、民族性、教育、収入、年齢、性別、人種、病状 (妊娠を含む)、および歯科歴に関する情報を含む詳細な履歴が引き出されます。 被験者は 5 ml のコレクション チューブに唾液を自己採取します。その後、3 つのうがい薬 (クロルヘキシジン、ポビドン ヨード、過酸化水素、またはコントロール (生理食塩水)) のいずれかを 30 秒間使用し、それらをコレクション チューブに吐き出します。 治験責任医師は、製剤バイアスを減らすために、それぞれクロルヘキシジン、過酸化水素、およびベタジンの市販製剤であるペリデックス、過酸化水素、およびベタジンを使用します。 調査官は、この提案の付録として製品ラベルを添付しました。 正確なうがい薬は、乱数発生器を使用して偶然に決定されます。 調査官は、Microsoft Excel を使用して次の無作為化スケジュールを作成しました。 最初に同意書に署名した患者が患者 1 となり、2 番目の患者が患者 2 となるなど)。 上記のランダム化スケジュールに基づいて、患者1および2には生理食塩水が投与され、3にはクロルヘキシジンなどが投与されます。 次に被験者は、すすぎの 15 分後と 30 分後に別々の採取チューブに唾液を採取します。

B. サンプルの収集 唾液は、以前の研究者によって説明された方法論を使用して収集されます。 手短に言えば、被験者は口の中で3分間唾液を採取し、その後3分間チューブに垂らし続けるように求められます. このメソッドは、研究者が刺激されていない唾液を収集できるようにします。 唾液は、RNA (リボ核酸) 安定剤を含むキット (Oragen RNA キット) を使用して収集されます。

C. 計測・計測

全 RNA は、mirVana miRNA (Messenger Ribonucleic Acid) 分離キット (Applied Biosystems) を使用して唾液から分離されます。 微生物細胞を溶解し、酸-フェノール:クロロホルムおよびエタノール沈殿によってRNAを抽出し、ヌクレアーゼを含まない水で溶出します。 研究者は十分に検証されたプライマーを使用して、唾液からの COVID-19 スパイクタンパク質 mRNA (メッセンジャーリボ核酸) のコピー数を定量化します。 COVID-19 の絶対定量化のために、研究者は適切な市販のキットを使用してワンステップ RT-PCR (逆転写酵素) アッセイを使用します。 このステップでは、研究者はmRNAをcDNA（相補的デオキシリボ核酸）に変換し、ターゲットプライマーを使用してcDNAを定量化し、ct（サイクル閾値）値のサンプルを標準曲線と比較してCOVID-19のコピー数を計算します。 絶対定量化のための標準曲線を作成するために、標的遺伝子を PCR で増幅します。 PCR産物は、適切なベクターにクローニングされます。 次に、プラスミドを抽出し、連続希釈し、標準曲線を作成するための qPCR (定量的ポリメラーゼ連鎖反応) のテンプレートとして使用します。

D. 内部妥当性 被験者は自発的な参加を通じて無作為に募集されます。 これにより、プレゼンテーションの偏りが解消されます。

E. データ分析

記述統計は、COVID-19 の唾液保菌の推定値として提供されます。 ウイルスの唾液保菌の頻度は、総サンプル集団のパーセントとして表されます。 マウスウォッシュ使用後の COVID-19 の減少は倍率変化として表され、パラメトリック テストを使用して 3 つのマウスウォッシュ グループ間で比較されます。