Eficácia do enxaguatório bucal na redução do transporte salivar de COVID-19

Objetivos do projeto:

Objetivo 1: Examinar o transporte salivar de COVID-19 em indivíduos antes e depois do uso de enxaguatórios bucais conhecidos por reduzir a microbiota oral, usando PCR quantitativo da transcriptase reversa (reação em cadeia da polimerase) em tempo real para quantificar a carga viral.

ESTRATÉGIA DE PESQUISA:

A. Dados de recrutamento e linha de base:

Este é um estudo intervencional transversal de 4 braços. 60 indivíduos entre 18 e 80 anos de idade serão recrutados entre aqueles que estão sendo tratados para COVID-19 no Ohio State University Medical Center. Não há dados para basear as estimativas do tamanho da amostra, e os investigadores chegaram a esse número em um esforço para obter uma amostra representativa da população de Ohio. Se o potencial sujeito estiver interessado em participar, o coordenador do estudo coletará as informações de contato do candidato e o formulário de consentimento será apresentado a esses indivíduos. Os participantes terão tempo suficiente para ler e fazer perguntas e, uma vez assinados esses formulários, um histórico detalhado incluindo informações sobre etnia, educação, renda, idade, sexo, raça, estado de saúde (incluindo gravidez) e histórico dentário será obtido. Os indivíduos coletarão a saliva em um tubo de coleta de 5 ml, após o que serão solicitados a usar um dos 3 enxaguatórios bucais (clorexidina, iodopovidona, peróxido de hidrogênio ou controle (salina) por trinta segundos e cuspi-los nos tubos de coleta. Os investigadores usarão Peridex, Peróxido de Hidrogênio e Betadine, que são formulações comercialmente disponíveis de clorexidina, peróxido de hidrogênio e betadine, respectivamente, para reduzir o viés da formulação. Os investigadores anexaram os rótulos dos produtos como apêndices a esta proposta. O enxaguatório bucal exato será decidido por acaso usando um gerador de números aleatórios. Os investigadores geraram o seguinte cronograma de randomização usando o Microsoft Excel: Cada sujeito receberá um número à medida que for recrutado (por exemplo, primeiro paciente a assinar o consentimento será o paciente 1, e o segundo será o paciente 2 e assim sucessivamente). Os pacientes 1 e 2 receberão solução salina e 3 receberão clorexidina etc. com base no cronograma de randomização acima. Os indivíduos coletarão saliva em tubos de coleta separados 15 e 30 minutos após o enxágue.

B. Coleta de amostras A saliva será coletada usando uma metodologia descrita por investigadores anteriores. Resumidamente, os indivíduos serão solicitados a coletar saliva na boca por 3 minutos e, em seguida, babar continuamente em um tubo por 3 minutos. Este método permitirá aos investigadores coletar saliva não estimulada. A saliva será coletada com kits contendo estabilizador de RNA (Ácido Ribonucleico) (kit Oragen RNA).

C. Medição / Instrumentação

O RNA total será isolado da saliva utilizando o kit de isolamento mirVana miRNA (Messenger Ribonucleic Acid) (Applied Biosystems). As células microbianas serão lisadas e o RNA será extraído por precipitação Ácido-Fenol:Clorofórmio e etanol e eluído em água livre de nuclease. Os investigadores usarão primers bem validados para quantificar o número de cópias do mRNA da proteína spike COVID-19 (ácido ribonucleico mensageiro) da saliva. Para uma quantificação absoluta de COVID-19, os investigadores usarão um ensaio de RT-PCR (Transcriptase Reversa) de uma etapa usando um kit apropriado disponível comercialmente. Nesta etapa, os investigadores converterão mRNA em cDNA (ácido desoxirribonucleico complementar) e, em seguida, quantificarão o cDNA usando iniciadores direcionados e, em seguida, os números de cópias do COVID-19 serão calculados comparando as amostras de valores ct (limiar do ciclo) com a curva padrão. A fim de gerar curvas padrão para quantificação absoluta, os genes alvo serão amplificados com PCR. Os produtos de PCR serão clonados em vetor adequado. Em seguida, os plasmídeos serão extraídos, diluídos em série e utilizados como moldes em qPCR (reação em cadeia da polimerase quantitativa) para geração de curvas padrão.

D. Validade Interna Os participantes serão recrutados aleatoriamente por meio de participação voluntária. Isso eliminará o viés de apresentação.

E. Análise de dados

Estatísticas descritivas serão fornecidas como estimativas de transporte salivar de COVID-19. A frequência de transporte salivar do vírus será expressa como uma porcentagem da população total da amostra. A redução no COVID-19 após o uso de enxaguatório bucal será expressa como mudança de dobra e comparada entre os três grupos de enxaguatório bucal usando testes paramétricos.