Skuteczność płynów do płukania jamy ustnej w ograniczaniu transportu śliny przez COVID-19

Cele projektu:

Cel 1: Zbadanie przenoszenia COVID-19 w ślinie u osób przed i po użyciu płynów do płukania jamy ustnej, o których wiadomo, że zmniejszają mikroflorę jamy ustnej, przy użyciu ilościowej reakcji PCR z odwrotną transkryptazą w czasie rzeczywistym (reakcja łańcuchowa polimerazy) w celu ilościowego określenia miana wirusa.

STRATEGIA BADAŃ:

A. Rekrutacja i dane bazowe:

Jest to przekrojowe badanie interwencyjne z 4 ramionami. 60 osób w wieku od 18 do 80 lat zostanie zrekrutowanych spośród osób leczonych z powodu COVID-19 w Ohio State University Medical Center. Nie ma danych, na których można by oprzeć szacunki wielkości próby, a badacze wylądowali na tej liczbie, starając się uzyskać reprezentatywną próbkę populacji Ohio. W przypadku zainteresowania udziałem potencjalnego uczestnika, koordynator badania zbierze dane kontaktowe kandydata i przedstawi tym osobom formularz zgody. Badani będą mieli wystarczająco dużo czasu na przeczytanie i zadawanie pytań, a po podpisaniu tych formularzy zostanie uzyskana szczegółowa historia, w tym informacje o pochodzeniu etnicznym, wykształceniu, dochodach, wieku, płci, rasie, stanie zdrowia (w tym ciąży) i historii dentystycznej. Badani samodzielnie pobiorą ślinę do 5 ml probówki, po czym zostaną poproszeni o użycie jednego z 3 płynów do płukania jamy ustnej (chlorheksydyna, jodopowidon, nadtlenek wodoru lub kontrola (sól fizjologiczna) przez trzydzieści sekund i wyplucie ich do probówek. Badacze użyją Peridexu, nadtlenku wodoru i betadyny, które są dostępnymi w handlu preparatami odpowiednio chlorheksydyny, nadtlenku wodoru i betadyny, aby zmniejszyć stronniczość preparatu. Śledczy załączyli etykiety produktów jako załączniki do niniejszego wniosku. Dokładny płyn do płukania ust zostanie wybrany losowo przy użyciu generatora liczb losowych. Badacze wygenerowali następujący harmonogram randomizacji za pomocą programu Microsoft Excel: Każdemu badanemu zostanie przydzielony numer podczas rekrutacji (np. pierwszy pacjent, który podpisze zgodę, będzie pacjentem 1, a drugi pacjentem 2 i tak dalej). Pacjenci 1 i 2 otrzymają sól fizjologiczną, a 3 chlorheksydynę itp. w oparciu o powyższy schemat randomizacji. Następnie badani będą zbierać ślinę do oddzielnych probówek po 15 i 30 minutach od spłukania.

B. Pobieranie próbek Ślina zostanie pobrana przy użyciu metodologii opisanej przez poprzednich badaczy. W skrócie, badani zostaną poproszeni o zbieranie śliny w ustach przez 3 minuty, a następnie ciągłe ślinienie się do probówki przez 3 minuty. Ta metoda pozwoli badaczom na pobranie niestymulowanej śliny. Ślina zostanie pobrana przy użyciu zestawów zawierających stabilizator RNA (kwasu rybonukleinowego) (zestaw Oragen RNA).

C. Pomiar / oprzyrządowanie

Całkowity RNA zostanie wyizolowany ze śliny za pomocą zestawu do izolacji miRNA miRNA (Messenger Ribonucleic Acid) (Applied Biosystems). Komórki drobnoustrojów zostaną poddane lizie, a RNA zostanie wyekstrahowane przez wytrącanie kwasem-fenolem: chloroformem i etanolem oraz wymyte wodą wolną od nukleaz. Badacze użyją dobrze zwalidowanych starterów do ilościowego określenia liczby kopii mRNA białka szczytowego COVID-19 (kwasu rybonukleinowego posłańca) ze śliny. W celu bezwzględnego oznaczenia ilościowego COVID-19 badacze zastosują jednoetapowy test RT-PCR (odwrotna transkryptaza) przy użyciu odpowiedniego dostępnego na rynku zestawu. Na tym etapie badacze przekonwertują mRNA na cDNA (komplementarny kwas dezoksyrybonukleinowy), a następnie określą ilościowo cDNA za pomocą ukierunkowanych starterów, a następnie obliczą liczbę kopii COVID-19, porównując próbki wartości ct (progowych cyklu) z krzywą standardową. W celu wygenerowania krzywych wzorcowych do bezwzględnej oceny ilościowej docelowe geny zostaną zamplifikowane metodą PCR. Produkty PCR zostaną sklonowane do odpowiedniego wektora. Następnie plazmidy zostaną wyekstrahowane, rozcieńczone seryjnie i użyte jako matryce w qPCR (ilościowa reakcja łańcuchowa polimerazy) do wygenerowania krzywych standardowych.

D. Ważność wewnętrzna Uczestnicy będą rekrutowani losowo poprzez dobrowolny udział. To wyeliminuje stronniczość prezentacji.

E. Analiza danych

Statystyki opisowe zostaną dostarczone jako szacunki dotyczące nosicielstwa COVID-19 w ślinie. Częstość przenoszenia wirusa w ślinie zostanie wyrażona jako procent całkowitej populacji próbki. Redukcja COVID-19 po zastosowaniu płynu do płukania jamy ustnej zostanie wyrażona jako krotność zmiany i porównana między trzema grupami płynów do płukania jamy ustnej za pomocą testów parametrycznych.