Eficacia del enjuague bucal para reducir el transporte salival de COVID-19

Objetivos del proyecto:

Objetivo 1: Examinar el transporte salival de COVID-19 en individuos antes y después del uso de enjuagues bucales conocidos por reducir la microbiota oral, utilizando PCR cuantitativa de transcriptasa inversa en tiempo real (reacción en cadena de la polimerasa) para cuantificar la carga viral.

ESTRATEGIA DE INVESTIGACIÓN:

A. Reclutamiento y datos de referencia:

Este es un estudio transversal de intervención de 4 brazos. Se reclutarán 60 sujetos entre 18 y 80 años de edad de aquellos que están siendo tratados por COVID-19 en el Centro Médico de la Universidad Estatal de Ohio. No hay datos sobre los cuales basar las estimaciones del tamaño de la muestra, y los investigadores han llegado a este número en un esfuerzo por obtener una muestra representativa de la población de Ohio. Si el sujeto potencial está interesado en participar, el coordinador del estudio recopilará la información de contacto del candidato y se les presentará el formulario de consentimiento a estas personas. Los sujetos tendrán suficiente tiempo para leer y hacer preguntas, y una vez que firmen estos formularios, se obtendrá un historial detallado que incluye información sobre etnicidad, educación, ingresos, edad, sexo, raza, estado médico (incluido el embarazo) e historial dental. Los sujetos recolectarán saliva por sí mismos en un tubo de recolección de 5 ml, luego de lo cual se les pedirá que usen uno de 3 enjuagues bucales (clorhexidina, povidona yodada, peróxido de hidrógeno o control (solución salina) durante treinta segundos y los escupan en los tubos de recolección. Los investigadores utilizarán Peridex, peróxido de hidrógeno y betadina, que son formulaciones comerciales de clorhexidina, peróxido de hidrógeno y betadina, respectivamente, para reducir el sesgo de formulación. Los investigadores adjuntaron las etiquetas de los productos como apéndices a esta propuesta. El enjuague bucal exacto se decidirá al azar utilizando un generador de números aleatorios. Los investigadores generaron el siguiente programa de aleatorización utilizando Microsoft Excel: a cada sujeto se le asignará un número a medida que se reclutan (p. ej., el primer paciente en firmar el consentimiento será el paciente 1, el segundo el paciente 2 y así sucesivamente). Los pacientes 1 y 2 recibirán solución salina y el 3 recibirá clorhexidina, etc. según el programa de aleatorización anterior. Luego, los sujetos recolectarán saliva en tubos de recolección separados 15 y 30 minutos después del enjuague.

B. Recolección de muestras La saliva se recolectará utilizando una metodología descrita por investigadores anteriores. Brevemente, se les pedirá a los sujetos que recolecten saliva en la boca durante 3 minutos y luego babeen continuamente en un tubo durante 3 minutos. Este método permitirá a los investigadores recolectar saliva no estimulada. La saliva se recogerá utilizando kits que contienen estabilizador de ARN (ácido ribonucleico) (kit de ARN de Oragen).

C. Medición / Instrumentación

El ARN total se aislará de la saliva utilizando el kit de aislamiento de miARN (ácido ribonucleico mensajero) mirVana (Applied Biosystems). Las células microbianas se lisarán y el ARN se extraerá mediante ácido-fenol: cloroformo y precipitación con etanol y se eluirá en agua libre de nucleasas. Los investigadores utilizarán cebadores bien validados para cuantificar el número de copias del ARNm de la proteína de punta de COVID-19 (ácido ribonucleico mensajero) de la saliva. Para una cuantificación absoluta de COVID-19, los investigadores utilizarán un ensayo de RT-PCR (transcriptasa inversa) de un paso mediante el uso de un kit adecuado disponible en el mercado. En este paso, los investigadores convertirán el ARNm en ADNc (ácido desoxirribonucleico complementario) y luego cuantificarán el ADNc mediante el uso de cebadores específicos y luego se calculará el número de copias del COVID-19 comparando las muestras de valores de ct (umbral de ciclo) con la curva estándar. Para generar curvas estándar para la cuantificación absoluta, los genes objetivo se amplificarán con PCR. Los productos de la PCR se clonarán en un vector adecuado. Luego, los plásmidos se extraerán, se diluirán en serie y se usarán como plantillas en qPCR (reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa) para generar curvas estándar.

D. Validez interna Los sujetos serán reclutados aleatoriamente mediante participación voluntaria. Esto eliminará el sesgo de presentación.

E. Análisis de datos

Se proporcionarán estadísticas descriptivas como estimaciones del transporte salival de COVID-19. La frecuencia de transporte salival del virus se expresará como un porcentaje de la población total de la muestra. La reducción de COVID-19 después del uso de enjuague bucal se expresará como cambio de pliegue y se comparará entre los tres grupos de enjuague bucal mediante pruebas paramétricas.