Эффективность жидкости для полоскания рта в снижении слюноносительства COVID-19

Цели проекта:

Цель 1: изучить носительство COVID-19 в слюне у людей до и после использования жидкостей для полоскания рта, которые, как известно, уменьшают микробиоту полости рта, с использованием количественной ПЦР с обратной транскриптазой (полимеразная цепная реакция) в реальном времени для количественного определения вирусной нагрузки.

СТРАТЕГИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ:

A. Набор и исходные данные:

Это перекрестное интервенционное исследование с 4 группами. 60 человек в возрасте от 18 до 80 лет будут набраны из числа тех, кто проходит лечение от COVID-19 в Медицинском центре Университета штата Огайо. Нет данных, на которых можно было бы основывать оценки размера выборки, и исследователи остановились на этом числе, пытаясь получить репрезентативную выборку населения Огайо. Если потенциальный субъект заинтересован в участии, координатор исследования соберет контактную информацию от кандидата, и форма согласия будет представлена ​​этим лицам. Субъектам будет предоставлено достаточно времени, чтобы прочитать и задать вопросы, и после подписания этих форм будет получен подробный анамнез, включая информацию об этнической принадлежности, образовании, доходе, возрасте, поле, расе, медицинском статусе (включая беременность) и стоматологическом анамнезе. Субъекты самостоятельно собирают слюну в пробирку для сбора 5 мл, после чего их просят использовать одно из 3 ополаскивателей для рта (хлоргексидин, повидон-йод, перекись водорода или контрольный раствор (физиологический раствор) в течение тридцати секунд и выплевывать их в пробирки для сбора. Исследователи будут использовать Peridex, перекись водорода и бетадин, которые являются коммерчески доступными препаратами хлоргексидина, перекиси водорода и бетадина соответственно, чтобы уменьшить погрешность в отношении состава. Следователи приложили этикетки продуктов в качестве приложений к этому предложению. Точная жидкость для полоскания рта будет определена случайным образом с помощью генератора случайных чисел. Исследователи создали следующий график рандомизации с использованием Microsoft Excel: каждому субъекту будет присвоен номер по мере его набора (например, первый пациент, подписавший согласие, будет пациентом 1, вторым будет пациент 2 и так далее). Пациенты 1 и 2 будут получать физиологический раствор, а 3 будут получать хлоргексидин и т. д. на основании приведенного выше графика рандомизации. Затем субъекты будут собирать слюну в отдельные пробирки через 15 и 30 минут после промывания.

B. Сбор проб Слюна будет собираться с использованием методологии, описанной предыдущими исследователями. Вкратце, субъектов просят собирать слюну во рту в течение 3 минут, а затем непрерывно пускать слюни в пробирку в течение 3 минут. Этот метод позволит исследователям собирать нестимулированную слюну. Слюна будет собираться с использованием наборов, содержащих стабилизатор РНК (рибонуклеиновой кислоты) (набор Oragen RNA).

C. Измерение/приборы

Общая РНК будет выделена из слюны с использованием набора для выделения mirVana miRNA (Messenger Ribonucleic Acid) (Applied Biosystems). Микробные клетки будут лизироваться, а РНК будет экстрагирована путем осаждения кислотой-фенолом:хлороформом и этанолом и элюирована в воде, не содержащей нуклеаз. Исследователи будут использовать хорошо проверенные праймеры для количественного определения количества копий мРНК шиповидного белка COVID-19 (рибонуклеиновая кислота-мессенджер) из слюны. Для абсолютного количественного определения COVID-19 исследователи будут использовать одноэтапный анализ ОТ-ПЦР (обратная транскриптаза) с использованием соответствующего имеющегося в продаже набора. На этом этапе исследователи преобразуют мРНК в кДНК (комплементарную дезоксирибонуклеиновую кислоту), а затем определяют количество кДНК с помощью целевых праймеров, а затем количество копий COVID-19 будет рассчитано путем сравнения образцов значений ct (порог цикла) со стандартной кривой. Чтобы получить стандартные кривые для абсолютного количественного определения, целевые гены будут амплифицировать с помощью ПЦР. Продукты ПЦР будут клонированы в подходящий вектор. Затем плазмиды будут экстрагированы, серийно разведены и использованы в качестве матриц в КПЦР (количественная полимеразная цепная реакция) для построения стандартных кривых.

D. Субъекты внутренней валидности будут набраны случайным образом посредством добровольного участия. Это устранит предвзятость презентации.

Е. Анализ данных

Описательные статистические данные будут представлены как оценки слюноносительства COVID-19. Частота слюнного носительства вируса будет выражена в процентах от общей выборки. Снижение заболеваемости COVID-19 после использования жидкости для полоскания рта будет выражаться в виде кратного изменения и сравниваться между тремя группами жидкости для полоскания рта с использованием параметрических тестов.