Effekten av munnvann for å redusere spytttransport av COVID-19

Prosjektets mål:

Mål 1: Å undersøke spytttransporten av COVID-19 hos individer før og etter bruk av munnvann som er kjent for å redusere oral mikrobiota, ved å bruke kvantitativ PCR (Polymerase Chain Reaction) i sanntid for å kvantifisere viral belastning.

FORSKNINGSSTRATEGI:

A. Rekrutterings- og basisdata:

Dette er en tverrsnittsintervensjonell 4-armsstudie. 60 forsøkspersoner mellom 18-80 år vil bli rekruttert fra de som blir behandlet for COVID-19 ved Ohio State University Medical Center. Det er ingen data å basere estimater for utvalgsstørrelse på, og etterforskere har landet på dette tallet i et forsøk på å få et representativt utvalg av Ohios befolkning. Hvis det potensielle emnet er interessert i å delta, vil studiekoordinatoren samle inn kontaktinformasjon fra kandidaten og samtykkeskjemaet vil bli presentert for disse personene. Forsøkspersoner vil få tilstrekkelig tid til å lese og stille spørsmål, og når de har signert disse skjemaene, vil en detaljert historikk, inkludert informasjon om etnisitet, utdanning, inntekt, alder, kjønn, rase, medisinsk status (inkludert graviditet) og tannhistorie bli fremkalt. Forsøkspersonene vil selv samle spytt i et 5 ml oppsamlingsrør, hvoretter de vil bli bedt om å bruke en av 3 munnskyllevann (klorheksidin, povidonjod, hydrogenperoksid eller kontroll(saltvann) i tretti sekunder og spytte dem i oppsamlingsrør. Etterforskerne vil bruke Peridex, Hydrogen Peroxide og Betadine, som er kommersielt tilgjengelige formuleringer av henholdsvis klorhexidin, hydrogenperoxide og betadine, for å redusere formuleringsskjevhet. Etterforskerne har lagt ved produktetikettene som vedlegg til dette forslaget. Den eksakte munnvannet avgjøres tilfeldig ved hjelp av en tilfeldig tallgenerator. Etterforskere har generert følgende randomiseringsplan ved bruk av Microsoft excel: Hvert emne vil bli tildelt et nummer etter hvert som de rekrutteres (f.eks. den første pasienten som signerer samtykket vil være pasient 1, og den andre vil være pasient 2 og så videre). Pasient 1 og 2 vil motta saltvann og 3 vil motta klorheksidin etc. basert på randomiseringsplanen ovenfor. Forsøkspersonene vil deretter samle spytt i separate oppsamlingsrør 15 og 30 minutter etter skylling.

B. Prøveinnsamling Spytt vil bli samlet ved hjelp av en metodikk beskrevet av tidligere etterforskere. Kort fortalt vil forsøkspersonene bli bedt om å samle spytt i munnen i 3 minutter og deretter sikle kontinuerlig i et rør i 3 minutter. Denne metoden vil tillate etterforskere å samle ustimulert spytt. Spytt vil bli samlet ved hjelp av sett som inneholder RNA (Ribonukleinsyre) stabilisator (Oragen RNA kit).

C. Måling / Instrumentering

Totalt RNA vil bli isolert fra spytt ved hjelp av mirVana miRNA (Messenger Ribonucleic Acid) isolasjonssett (Applied Biosystems). Mikrobielle celler vil bli lysert og RNA vil bli ekstrahert ved syre-fenol:kloroform og etanolutfelling og eluert i nukleasefritt vann. Etterforskere vil bruke godt validerte primere for å kvantifisere kopiantall av COVID-19 spike protein mRNA (Messenger Ribonucleic Acid) fra spyttet. For en absolutt kvantifisering av COVID-19, vil etterforskerne bruke ett-trinns RT-PCR (Reverse Transcriptase)-analyse ved å bruke et passende kommersielt tilgjengelig sett. I dette trinnet vil etterforskere konvertere mRNA til cDNA (komplementær deoksyribonukleinsyre) og deretter kvantifisere cDNA ved å bruke målrettede primere og deretter vil kopitall av COVID-19 beregnes ved å sammenligne ct (syklusterskel)-verdiprøver mot standardkurve. For å generere standardkurver for absolutt kvantifisering, vil målgener bli amplifisert med PCR. PCR-produktene vil bli klonet inn i egnet vektor. Deretter vil plasmider ekstraheres, seriefortynnes og brukes som maler i qPCR (kvantitativ polymerasekjedereaksjon) for å generere standardkurver.

D. Intern gyldighet Emner vil bli rekruttert tilfeldig gjennom frivillig deltakelse. Dette vil eliminere presentasjonsskjevhet.

E. Dataanalyse

Beskrivende statistikk vil bli gitt som estimater for spytttransport av COVID-19. Frekvensen av spytttransport av viruset vil uttrykkes som en prosent av den totale prøvepopulasjonen. Reduksjon i COVID-19 etter bruk av munnvann vil bli uttrykt som foldendring og sammenlignet mellom de tre munnvannsgruppene ved bruk av parametriske tester.