Procentdel af BRAFV600E-alleler og udfald i skjoldbruskkirtelcarcinom (ABOUT)

BAGGRUND Papillært thyreoideacarcinom (PTC) viser generelt en fremragende prognose med en 5-års overlevelse på over 95%. Selv når PTC metastaserer til de regionale lymfeknuder, en hyppig forekomst, har den generelt en fremragende prognose. Der er dog nogle patienter, som præsenterer med en aggressiv baggrund eller med specifikke klinikopatologiske træk, som udviser aggressiv udviklingsadfærd. Adskillige klinisk-patologiske træk, nemlig patologisk subtype, alder, fjern- og lymfeknudemetastaser, ekstrathyroid-forlængelse og fuldstændighed af resektion kan bruges til at forudsige prognose og er blevet anvendt i stadiesystemer såsom AMES-, MACIS- og AJCC TNM-klassifikationerne.

Den genetiske baggrund er kun en kraftig prognostisk determinant, når den anvendes på nogle genmutationer, såsom TERT-promotor og p53-mutationer. Den prognostiske værdi af BRAFV600E, det hyppigste onkogen i PTC, er svag. Det korrelerer med større forlængelse, lymfeknudemetastase og fremskreden stadium (III/IV). Dens korrelation med udfaldet i PTC har været genstand for mange ikke altid overensstemmende undersøgelser. En stor multicenterundersøgelse var nødvendig for utvetydigt at påvise sammenhængen mellem BRAFV600E og kræfttilbagefald og -dødelighed. Risikoen for PTC, der huser BRAFV600E, er fortsat svag (recidiv hazard ratio 2,66), og søgningen efter denne mutation anbefales ikke til klinisk behandling af lavrisikopatienter med skjoldbruskkirtelkræft.

Forskellige forskningsgrupper leverede bevis på heterogeniteten af ​​PTC, der består af en blanding af tumorceller med vildtype og BRAFV600E (5, 6). Betydningen af ​​procentdelen af ​​BRAFV600E-positive celler i tumoren blev påvist i 168 PTC. Analysen af ​​BRAFV600E/BRAF-vildtype-forholdet blev udført ved pyrosequencing og højere ratio var positivt korreleret med patientens alder, tumorvolumen, lymfeknudemetastaser og med det værste sygdomsudfald. Patienter med tumorer med BRAFV600E/BRAF-vildtypeforhold ≥ 30 % udviste en oddsrisiko for tumortilbagefald på 5,1, hvorimod den kun var 1,75 i BRAFV600E-positive tumorer, hvis allelforholdet ikke blev taget i betragtning. Den kvalitative analyse BRAFV600E positiv versus negativ PTC kan forklare de uoverensstemmende sammenhænge med klinikopatologiske træk og udfald i forskellige kohorter af patienter med forskellig ratio af BRAFV600E alleler, og i sidste ende kan den kvalitative analyse BRAF mutationsstatus reducere styrken af ​​dens kliniske betydning og anvendelighed.

Mens eksistensen af ​​intratumorheterogenitet i PTC understøttes af mange beviser, stilles der spørgsmålstegn ved dens udvidelse, biologiske betydning og kliniske anvendelighed og skal undersøges yderligere.

Digital-dråbe PCR (ddPCR) er en analytisk metode, der for nylig er udviklet, velegnet til absolut kvantificering af mål-DNA i en DNA-blanding. Det er den mest nøjagtige metode til at bestemme BRAFV600E/BRAFvildtype allelforholdet.

FORSKNINGENS MÅL

1. Bestem, hvor hyppige subklonale BRAFV600E PTC er, og for at bestemme middel- og median BRAFV600E/BRAF-vildtype allelforhold i heterogene tumorer;
2. Bestem forholdet mellem procentdelen af ​​BRAFV600E-alleller og klinisk-patologiske træk;
3. Bestem forholdet mellem procentdelen af ​​BRAFV600E-alleller og resultatet hos PTC-patienter (primært endepunkt)

STUDERE DESIGN

• En stor serie af PTC formalin-fikserede, paraffin-indlejrede (FFPE) væv med en klinisk opfølgning > 3 år vil blive analyseret ved ddPCR for at bestemme procentdelen af ​​BRAFV600E alleler.
• Renheden af ​​PTC-prøver og forholdet neoplastiske celler/kontaminerende celler vil blive vurderet ved a) analyse ved rt-PCR af ekspression af et panel af RNA, der er specifikt for lymforetikulære celler og stromaceller; b) mikroskopisk gennemgang af tilstødende vævssnit.
• Statistisk analyse vil blive udført for at søge korrelationer mellem procentdel af BRAFV600E-alleller og a) patologiske træk, TNM, stadieinddeling; b) tilbagefald og overlevelse