Prozentsatz der BRAFV600E-Allele und Ergebnis bei Schilddrüsenkarzinom (ABOUT)

HINTERGRUND Das papilläre Schilddrüsenkarzinom (PTC) hat im Allgemeinen eine hervorragende Prognose mit einer 5-Jahres-Überlebensrate von über 95 %. Auch wenn PTC in die regionalen Lymphknoten metastasiert, was häufig vorkommt, hat es im Allgemeinen eine ausgezeichnete Prognose. Es gibt jedoch einige Patienten mit einem aggressiven Hintergrund oder mit spezifischen klinisch-pathologischen Merkmalen, die ein aggressives Entwicklungsverhalten zeigen. Mehrere klinisch-pathologische Merkmale, nämlich pathologischer Subtyp, Alter, Fern- und Lymphknotenmetastasen, extrathyroidale Ausdehnung und Vollständigkeit der Resektion, können zur Vorhersage der Prognose verwendet werden und wurden in Staging-Systeme wie die AMES-, MACIS- und AJCC-TNM-Klassifikationen übernommen.

Der genetische Hintergrund ist nur dann eine starke prognostische Determinante, wenn er auf einige Genmutationen wie TERT-Promotor- und p53-Mutationen angewendet wird. Der prognostische Wert von BRAFV600E, dem häufigsten Onkogen bei PTC, ist schwach. Es korreliert mit größerer Streckung, Lymphknotenmetastasierung und fortgeschrittenem Stadium (III/IV). Seine Korrelation mit dem Outcome bei PTC war Gegenstand vieler nicht immer übereinstimmender Studien. Eine große multizentrische Studie war notwendig, um den Zusammenhang zwischen BRAFV600E und dem Wiederauftreten und der Sterblichkeit von Krebs eindeutig nachzuweisen. Das Risiko, dass PTC BRAFV600E enthält, bleibt gering (Rezidiv-Hazard-Ratio 2,66) und die Suche nach dieser Mutation wird im klinischen Management von Niedrigrisikopatienten mit Schilddrüsenkrebs nicht empfohlen.

Verschiedene Forschungsgruppen lieferten Hinweise auf die Heterogenität von PTC, die aus einer Mischung von Tumorzellen mit Wildtyp und BRAFV600E bestehen (5, 6). Die Bedeutung des Prozentsatzes BRAFV600E-positiver Zellen innerhalb des Tumors wurde in 168 PTC nachgewiesen. Die Analyse des BRAFV600E/BRAF-Wildtyp-Verhältnisses wurde durch Pyrosequenzierung durchgeführt und ein höheres Verhältnis korrelierte positiv mit Patientenalter, Tumorvolumen, Lymphknotenmetastasen und mit dem schlechtesten Krankheitsverlauf. Patienten mit Tumoren mit einem BRAFV600E/BRAF-Wildtyp-Verhältnis ≥ 30 % zeigten ein Odds-Risiko für ein Tumorrezidiv von 5,1, während es bei BRAFV600E-positiven Tumoren nur 1,75 betrug, wenn das Allelverhältnis nicht berücksichtigt wurde. Die qualitative Analyse BRAFV600E positiver versus negativer PTC kann die diskordanten Korrelationen mit klinisch-pathologischen Merkmalen und Ergebnissen in verschiedenen Kohorten von Patienten mit unterschiedlichem Verhältnis von BRAFV600E-Allelen erklären, und letztendlich kann die qualitative Analyse des BRAF-Mutationsstatus die Stärke seiner klinischen Bedeutung und Nützlichkeit verringern.

Während die Existenz einer intratumoralen Heterogenität bei PTC durch viele Beweise gestützt wird, wird ihre Ausdehnung, biologische Signifikanz und klinische Nützlichkeit in Frage gestellt und muss weiter untersucht werden.

Die Digital-Droplet-PCR (ddPCR) ist eine kürzlich entwickelte Analysemethode, die sich zur absoluten Quantifizierung von Ziel-DNA in einem DNA-Gemisch eignet. Es ist die genaueste Methode zur Bestimmung des BRAFV600E/BRAF-Wildtyp-Allelverhältnisses.

ZIEL DER FORSCHUNG

1. Bestimmen Sie, wie häufig subklonale BRAFV600E-PTC sind, und bestimmen Sie das mittlere und mittlere BRAFV600E/BRAF-Wildtyp-Allelverhältnis in heterogenen Tumoren;
2. Bestimmen Sie die Beziehung zwischen dem Prozentsatz der BRAFV600E-Allele und klinisch-pathologischen Merkmalen;
3. Bestimmung der Beziehung zwischen dem Prozentsatz der BRAFV600E-Allele und dem Ergebnis bei PTC-Patienten (primärer Endpunkt)

STUDIENDESIGN

• Eine große Serie von Formalin-fixierten, Paraffin-eingebetteten (FFPE) PTC-Geweben mit einer klinischen Nachbeobachtung von > 3 Jahren wird mittels ddPCR analysiert, um den Prozentsatz der BRAFV600E-Allele zu bestimmen.
• Die Reinheit von PTC-Proben und das Verhältnis von neoplastischen Zellen/kontaminierenden Zellen wird bewertet durch a) Analyse der Expression eines Panels von RNA, die für lymphoretikuläre Zellen und Stromazellen spezifisch ist, durch rt-PCR; b) mikroskopische Überprüfung benachbarter Gewebeschnitte.
• Es wird eine statistische Analyse durchgeführt, um Korrelationen zwischen dem Prozentsatz der BRAFV600E-Allele und a) pathologischen Merkmalen, TNM, Staging; b) Rezidiv und Überleben