A BRAFV600E allélok százalékos aránya és kimenetele pajzsmirigykarcinómában (ABOUT)

Háttér A papilláris pajzsmirigy karcinóma (PTC) általában kiváló prognózist mutat, 5 éves túlélése több mint 95%. Még akkor is, ha a PTC áttétet ad a regionális nyirokcsomókba, ami gyakran előfordul, általában kiváló prognózissal rendelkezik. Vannak azonban olyan betegek, akik agresszív háttérrel vagy sajátos klinikopatológiai jellemzőkkel jelentkeznek, akik agresszív fejlődési magatartást mutatnak. Számos klinikopatológiai jellemző, nevezetesen a patológia altípusa, az életkor, a távoli és nyirokcsomó-metasztázisok, a pajzsmirigy-n kívüli kiterjedés és a reszekció teljessége felhasználható a prognózis előrejelzésére, és olyan stádiumrendszerekben is alkalmazhatók, mint az AMES, MACIS és AJCC TNM osztályozás.

A genetikai háttér csak akkor erős prognosztikai meghatározó, ha bizonyos génmutációkra alkalmazzák, mint például a TERT promoter és a p53 mutációk. A PTC-ben leggyakoribb onkogén, a BRAFV600E prognosztikai értéke gyenge. Korrelál a nagyobb kiterjedéssel, a nyirokcsomó-metasztázisokkal és az előrehaladott stádiummal (III/IV). A PTC kimenetelével való összefüggése számos, nem mindig egybehangzó tanulmány tárgya volt. Nagy, többközpontú vizsgálatra volt szükség ahhoz, hogy egyértelműen bemutassuk a BRAFV600E és a rák kiújulásának és halálozásának összefüggését. A BRAFV600E-t hordozó PTC kockázata továbbra is gyenge (a kiújulás kockázati aránya 2,66), és ennek a mutációnak a keresése nem javasolt alacsony kockázatú pajzsmirigyrákos betegek klinikai kezelésében.

Különböző kutatócsoportok bizonyítékot szolgáltattak a PTC heterogenitására, amely tumorsejtek vad típusú és BRAFV600E keverékéből áll (5, 6). A BRAFV600E pozitív sejtek százalékos arányának fontosságát a daganaton belül 168 PTC-ben mutatták ki. A BRAFV600E/BRAFwild típusú arány elemzését piroszekvenálással végeztük, és a magasabb arány pozitív korrelációt mutatott a páciens életkorával, a daganat térfogatával, a nyirokcsomó-metasztázisokkal és a betegség legrosszabb kimenetelével. Azoknál a betegeknél, akiknél a BRAFV600E/BRAFwild-type arány ≥ 30%, a daganat kiújulásának esélye 5,1 volt, míg a BRAFV600E pozitív daganatokban ez csak 1,75 volt, ha az allélarányt nem vették figyelembe. A BRAFV600E pozitív versus negatív PTC kvalitatív analízis magyarázatot adhat a klinikopatológiai jellemzőkkel és kimenetelekkel való ellentmondásos összefüggésekre a BRAFV600E allélok eltérő arányú betegcsoportjaiban, és végső soron a BRAF mutációs státusz kvalitatív elemzése csökkentheti annak klinikai jelentőségét és hasznosságát.

Míg a PTC intratumor heterogenitásának meglétét számos bizonyíték támasztja alá, kiterjedése, biológiai jelentősége és klinikai hasznossága megkérdőjelezhető, és további vizsgálatokat igényel.

A Digital-Droplet PCR (ddPCR) egy nemrégiben kifejlesztett analitikai módszer, amely alkalmas a DNS-keverékben lévő cél DNS abszolút mennyiségi meghatározására. Ez a legpontosabb módszer a BRAFV600E/BRAFwild típusú allélarány meghatározására.

A KUTATÁS CÉLJA

1. Határozza meg, milyen gyakoriak a szubklonális-BRAFV600E PTC-k, és határozzák meg a BRAFV600E/BRAFvad típusú allélok átlagos és medián arányát heterogén tumorokban;
2. Határozza meg a kapcsolatot a BRAFV600E allélok százalékos aránya és a klinikopatológiai jellemzők között;
3. Határozza meg a kapcsolatot a BRAFV600E allélok százalékos aránya és a PTC-s betegek kimenetele között (elsődleges végpont)

DIZÁJNT TANULNI

• A PTC formalinnal fixált, paraffinba ágyazott (FFPE) szövetek nagy sorozatát, több mint 3 éves klinikai követéssel ddPCR-rel elemzik a BRAFV600E allélok százalékos arányának meghatározása érdekében.
• A PTC-minták tisztaságát és a neoplasztikus sejt/szennyező sejtek arányát a) a limforetikuláris sejtekre és stromasejtekre specifikus RNS-panel expressziójának rt-PCR-analízisével kell értékelni; b) a szomszédos szövetmetszetek mikroszkópos áttekintése.
• Statisztikai elemzést végeznek a BRAFV600E allélok százalékos aránya és a) patológiai jellemzők, TNM, stádiumozás közötti összefüggések keresésére; b) kiújulás és túlélés