Porcentaje de alelos BRAFV600E y resultado en carcinoma de tiroides (ABOUT)

ANTECEDENTES El carcinoma papilar de tiroides (CTP) generalmente muestra un pronóstico excelente con una supervivencia a 5 años de más del 95%. Incluso cuando el CPT hace metástasis a los ganglios linfáticos regionales, un hecho frecuente, por lo general tiene un pronóstico excelente. Sin embargo, hay algunos pacientes que se presentan con antecedentes agresivos o con características clinicopatológicas específicas que exhiben un comportamiento de desarrollo agresivo. Varias características clinicopatológicas, a saber, el subtipo patológico, la edad, las metástasis a distancia y en los ganglios linfáticos, la extensión extratiroidea y la resección completa se pueden utilizar para predecir el pronóstico y se han adoptado en sistemas de estadificación como las clasificaciones AMES, MACIS y AJCC TNM.

El trasfondo genético es un determinante pronóstico poderoso solo cuando se aplica a algunas mutaciones genéticas como el promotor TERT y las mutaciones p53. El valor pronóstico de BRAFV600E, el oncogén más frecuente en PTC, es débil. Se correlaciona con mayor extensión, metástasis ganglionares y estadio avanzado (III/IV). Su correlación con el desenlace en CPT ha sido objeto de muchos estudios no siempre concordantes. Fue necesario un gran estudio multicéntrico para demostrar inequívocamente la asociación entre BRAFV600E y la recurrencia y mortalidad del cáncer. El riesgo de PTC que alberga BRAFV600E sigue siendo bajo (índice de riesgo de recurrencia 2,66) y no se recomienda la búsqueda de esta mutación en el manejo clínico de pacientes con cáncer de tiroides de bajo riesgo.

Diferentes grupos de investigación proporcionaron evidencia sobre la heterogeneidad de los PTC que consisten en una mezcla de células tumorales con BRAFV600E y de tipo salvaje (5, 6). La importancia del porcentaje de células BRAFV600E positivas dentro del tumor se demostró en 168 PTC. El análisis de la relación BRAFV600E/BRAF de tipo salvaje se realizó mediante pirosecuenciación y una relación más alta se correlacionó positivamente con la edad del paciente, el volumen del tumor, la metástasis en los ganglios linfáticos y con el peor resultado de la enfermedad. Los pacientes con tumores con BRAFV600E/BRAFwild-type ratio ≥ 30 % mostraron una probabilidad de recurrencia tumoral de 5,1, mientras que en los tumores positivos para BRAFV600E fue de solo 1,75 si no se consideraba la relación de alelos. El análisis cualitativo BRAFV600E positivo versus PTC negativo puede explicar las correlaciones discordantes con las características clinicopatológicas y el resultado en diferentes cohortes de pacientes con diferentes proporciones de alelos BRAFV600E y, en última instancia, el análisis cualitativo del estado mutacional BRAF puede reducir la fuerza de su importancia clínica y utilidad.

Si bien la existencia de heterogeneidad intratumoral en el CPT está respaldada por muchas evidencias, su extensión, importancia biológica y utilidad clínica se cuestionan y deben investigarse más a fondo.

La PCR de gotitas digitales (ddPCR) es un método analítico desarrollado recientemente, adecuado para la cuantificación absoluta del ADN diana en una mezcla de ADN. Es el método más preciso para determinar la proporción de alelos de tipo salvaje BRAFV600E/BRAF.

OBJETIVO DE LA INVESTIGACIÓN

1. Determinar qué tan frecuentes son los PTC subclonales-BRAFV600E y determinar la proporción de alelos de tipo salvaje BRAFV600E/BRAF medio y mediano en tumores heterogéneos;
2. Determinar la relación entre el porcentaje de alelos BRAFV600E y las características clinicopatológicas;
3. Determinar la relación entre el porcentaje de alelos BRAFV600E y el resultado en pacientes con PTC (variable principal)

DISEÑO DEL ESTUDIO

• Se analizará una gran serie de tejidos PTC fijados en formalina e incluidos en parafina (FFPE) con un seguimiento clínico > 3 años mediante ddPCR para determinar el porcentaje de alelos BRAFV600E.
• La pureza de las muestras de PTC y la relación célula neoplásica/célula contaminante se evaluarán mediante a) análisis por rt-PCR de la expresión de un panel de RNA específico para células linforreticulares y estromales; b) revisión microscópica de secciones de tejido adyacentes.
• Se realizarán análisis estadísticos para buscar correlaciones entre el porcentaje de alelos BRAFV600E y a) características patológicas, TNM, estadificación; b) recurrencia y supervivencia