Procento alel BRAFV600E a výsledek u karcinomu štítné žlázy (ABOUT)

DOSAVADNÍ STAV TECHNIKY Papilární karcinom štítné žlázy (PTC) obecně vykazuje vynikající prognózu s 5letým přežitím nad 95 %. I když PTC metastázuje do regionálních lymfatických uzlin, což je častý výskyt, má obecně vynikající prognózu. Existují však někteří pacienti s agresivním pozadím nebo se specifickými klinicko-patologickými rysy, kteří vykazují agresivní vývojové chování. K predikci prognózy lze použít několik klinickopatologických znaků, jmenovitě podtyp patologie, věk, vzdálené metastázy a metastázy do lymfatických uzlin, rozšíření mimo štítnou žlázu a úplnost resekce a byly přijaty v systémech stagingu, jako jsou klasifikace AMES, MACIS a AJCC TNM.

Genetické pozadí je silným prognostickým determinantem pouze při aplikaci na některé genové mutace, jako je promotor TERT a mutace p53. Prognostická hodnota BRAFV600E, nejčastějšího onkogenu v PTC, je slabá. Koreluje s větším rozšířením, metastázami do lymfatických uzlin a pokročilým stadiem (III/IV). Jeho korelace s výsledkem v PTC byla předmětem mnoha ne vždy souhlasných studií. K jednoznačnému prokázání souvislosti mezi BRAFV600E a recidivou rakoviny a mortalitou byla nezbytná velká multicentrická studie. Riziko PTC přechovávajícího BRAFV600E zůstává nízké (poměr rizika recidivy 2,66) a hledání této mutace se nedoporučuje v klinické léčbě pacientů s nízkým rizikem s karcinomem štítné žlázy.

Různé výzkumné skupiny poskytly důkazy o heterogenitě PTC, které se skládají ze směsi nádorových buněk s divokým typem a BRAFV600E (5, 6). Důležitost procenta BRAFV600E pozitivních buněk v nádoru byla prokázána u 168 PTC. Analýza poměru BRAFV600E/BRAFwild typu byla provedena pyrosekvenováním a vyšší poměr pozitivně koreloval s věkem pacienta, objemem nádoru, metastázami do lymfatických uzlin as nejhorším výsledkem onemocnění. Pacienti s nádory s poměrem BRAFV600E/BRAFwild typu ≥ 30 % vykazovali pravděpodobnost recidivy nádoru 5,1, zatímco u BRAFV600E pozitivních nádorů to bylo pouze 1,75, pokud nebyl zohledněn poměr alel. Kvalitativní analýza BRAFV600E pozitivní versus negativní PTC může vysvětlit nesouhlasné korelace s klinicko-patologickými rysy a výsledky u různých kohort pacientů s různým poměrem alel BRAFV600E a v konečném důsledku může kvalitativní analýza BRAF mutačního stavu snížit sílu jeho klinické významnosti a užitečnosti.

Zatímco existence intratumorové heterogenity u PTC je podporována mnoha důkazy, její rozšíření, biologická významnost a klinická užitečnost jsou zpochybňovány a musí být dále zkoumány.

Digital-droplet PCR (ddPCR) je nedávno vyvinutá analytická metoda vhodná pro absolutní kvantifikaci cílové DNA ve směsi DNA. Je to nejpřesnější metoda pro stanovení poměru alel BRAFV600E/BRAFwild typu.

CÍL VÝZKUMU

1. Určete, jak časté jsou subklonální BRAFV600E PTC a určete průměrný a střední poměr alel BRAFV600E/BRAFwild typu u heterogenních nádorů;
2. Určete vztah mezi procentem alel BRAFV600E a klinicko-patologickými znaky;
3. Určete vztah mezi procentem alel BRAFV600E a výsledkem u pacientů s PTC (primární cíl)

STUDOVAT DESIGN

• Velká série PTC tkání fixovaných ve formalínu, zalitých v parafínu (FFPE) s klinickým sledováním > 3 roky bude analyzována pomocí ddPCR ke stanovení procenta alel BRAFV600E.
• Čistota vzorků PTC a poměr neoplastická buňka/kontaminující buňky budou hodnoceny a) analýzou exprese panelu RNA specifické pro lymforetikulární buňky a stromální buňky pomocí rt-PCR; b) mikroskopický přehled řezů sousedních tkání.
• Bude provedena statistická analýza za účelem hledání korelací mezi procentem alel BRAFV600E a a) patologickými znaky, TNM, staging; b) opakování a přežití