Odsetek alleli BRAFV600E i wyniki w raku tarczycy (ABOUT)

Tło Rak brodawkowaty tarczycy (PTC) ogólnie wykazuje doskonałe rokowanie z 5-letnim przeżyciem powyżej 95%. Nawet jeśli PTC daje przerzuty do regionalnych węzłów chłonnych, co jest częstym zjawiskiem, ma na ogół doskonałe rokowanie. Jednak niektórzy pacjenci zgłaszający się z agresywnym pochodzeniem lub ze specyficznymi cechami kliniczno-patologicznymi wykazują agresywne zachowania rozwojowe. Kilka cech kliniczno-patologicznych, a mianowicie podtyp patologii, wiek, przerzuty do węzłów chłonnych i odległych, rozszerzenie pozatarczyc i kompletność resekcji, może być wykorzystanych do przewidywania rokowania i zostało przyjętych w systemach stopniowania, takich jak klasyfikacje AMES, MACIS i AJCC TNM.

Tło genetyczne jest silnym wyznacznikiem prognostycznym tylko wtedy, gdy stosuje się je do niektórych mutacji genów, takich jak promotor TERT i mutacje p53. Wartość prognostyczna BRAFV600E, najczęściej występującego onkogenu w PTC, jest słaba. Koreluje z większym rozszerzeniem, przerzutami do węzłów chłonnych i zaawansowanym stadium (III/IV). Jego korelacja z wynikami PTC była przedmiotem wielu nie zawsze zgodnych badań. Konieczne było przeprowadzenie dużego, wieloośrodkowego badania, aby jednoznacznie wykazać związek między BRAFV600E a nawrotami raka i śmiertelnością. Ryzyko nosicielstwa BRAFV600E w PTC pozostaje niewielkie (współczynnik ryzyka nawrotu 2,66) i poszukiwanie tej mutacji nie jest zalecane w postępowaniu klinicznym u pacjentów z rakiem tarczycy niskiego ryzyka.

Różne grupy badawcze dostarczyły dowodów na heterogeniczność PTC, które składają się z mieszaniny komórek nowotworowych z komórkami typu dzikiego i BRAFV600E (5, 6). Znaczenie odsetka komórek BRAFV600E dodatnich w guzie wykazano w 168 PTC. Analiza stosunku BRAFV600E/BRAFdziki została przeprowadzona metodą pirosekwencjonowania i wyższy stosunek dodatnio skorelowany z wiekiem pacjenta, objętością guza, przerzutami do węzłów chłonnych i najgorszym przebiegiem choroby. Pacjenci z nowotworami ze stosunkiem genów BRAFV600E/BRAFdzikim ≥ 30% wykazywali prawdopodobieństwo nawrotu nowotworu wynoszące 5,1, podczas gdy w guzach BRAFV600E-dodatnich wynosiło ono tylko 1,75, jeśli nie brano pod uwagę stosunku alleli. Analiza jakościowa BRAFV600E dodatnia i ujemna PTC może wyjaśnić niezgodność korelacji z cechami kliniczno-patologicznymi i wynikami w różnych kohortach pacjentów z różnym stosunkiem alleli BRAFV600E, a ostatecznie analiza jakościowa statusu mutacji BRAF może zmniejszyć siłę jej znaczenia klinicznego i użyteczności.

Chociaż istnienie heterogenności wewnątrz guza w PTC jest poparte wieloma dowodami, jej zasięg, znaczenie biologiczne i użyteczność kliniczna są kwestionowane i wymagają dalszych badań.

Digital-droplet PCR (ddPCR) to niedawno opracowana metoda analityczna, odpowiednia do bezwzględnego oznaczania ilościowego docelowego DNA w mieszaninie DNA. Jest to najdokładniejsza metoda określenia stosunku alleli typu BRAFV600E/BRAFwild.

CEL BADAŃ

1. Określenie częstotliwości subklonalnego BRAFV600E PTC oraz określenie średniego i mediany stosunku alleli BRAFV600E/BRAFwild w nowotworach heterogennych;
2. określić zależność między odsetkiem alleli BRAFV600E a cechami kliniczno-patologicznymi;
3. Określić zależność między odsetkiem alleli BRAFV600E a wynikiem u pacjentów z PTC (pierwszorzędowy punkt końcowy)

PROJEKT BADANIA

• Duża seria tkanek PTC utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie (FFPE) z obserwacją kliniczną > 3 lat zostanie przeanalizowana metodą ddPCR w celu określenia odsetka alleli BRAFV600E.
• Czystość próbek PTC i stosunek komórki nowotworowe/komórki zanieczyszczające zostaną ocenione przez a) analizę metodą rt-PCR ekspresji panelu RNA swoistego dla komórek limforetikularnych i komórek zrębowych; b) przegląd mikroskopowy sąsiednich skrawków tkanek.
• Przeprowadzona zostanie analiza statystyczna w celu wyszukania korelacji między odsetkiem alleli BRAFV600E a a) cechami patologii, TNM, stopniem zaawansowania; b) nawrót i przeżycie