Porcentagem de alelos BRAFV600E e resultado em carcinoma de tireoide (ABOUT)

ANTECEDENTES O carcinoma papilar da tiróide (PTC) apresenta geralmente um excelente prognóstico com uma sobrevivência de 5 anos superior a 95%. Mesmo quando o PTC metastatiza para os linfonodos regionais, uma ocorrência frequente, geralmente tem excelente prognóstico. No entanto, existem alguns pacientes que apresentam antecedentes agressivos ou com características clínico-patológicas específicas que exibem um comportamento desenvolvimental agressivo. Várias características clínico-patológicas, como subtipo patológico, idade, metástases distantes e linfonodais, extensão extratireoidiana e integridade da ressecção, podem ser usadas para prever o prognóstico e foram adotadas em sistemas de estadiamento, como as classificações AMES, MACIS e AJCC TNM.

O background genético é um poderoso determinante prognóstico apenas quando aplicado a algumas mutações gênicas, como o promotor TERT e mutações p53. O valor prognóstico do BRAFV600E, o oncogene mais frequente no PTC, é fraco. Correlaciona-se com maior extensão, metástase linfonodal e estágio avançado (III/IV). Sua correlação com o desfecho no PTC tem sido objeto de muitos estudos nem sempre concordantes. Um grande estudo multicêntrico foi necessário para demonstrar inequivocamente a associação entre BRAFV600E e recorrência e mortalidade por câncer. O risco de PTC abrigar BRAFV600E permanece fraco (rácio de risco de recorrência 2,66) e a pesquisa dessa mutação não é recomendada no manejo clínico de pacientes de baixo risco com câncer de tireoide.

Diferentes grupos de pesquisa forneceram evidências sobre a heterogeneidade do PTC que consiste em uma mistura de células tumorais com tipo selvagem e BRAFV600E (5, 6). A importância da porcentagem de células BRAFV600E positivas dentro do tumor foi demonstrada em 168 PTC. A análise da razão BRAFV600E/BRAFwild-type foi realizada por pirosequenciamento e a razão mais alta se correlacionou positivamente com a idade do paciente, volume tumoral, metástase linfonodal e com pior evolução da doença. Pacientes com tumores com relação BRAFV600E/BRAFwild-type ≥ 30% apresentaram chance de recorrência tumoral de 5,1, enquanto nos tumores positivos para BRAFV600E era de apenas 1,75 se a relação alélica não fosse considerada. A análise qualitativa BRAFV600E positivo versus PTC negativo pode explicar as correlações discordantes com características clinicopatológicas e resultados em diferentes coortes de pacientes com diferentes proporções de alelos BRAFV600E e, finalmente, a análise qualitativa do estado mutacional BRAF pode reduzir a força de sua significância clínica e utilidade.

Embora a existência de heterogeneidade intratumoral no PTC seja apoiada por muitas evidências, sua extensão, significância biológica e utilidade clínica são questionadas e devem ser mais investigadas.

Digital-droplet PCR (ddPCR) é um método analítico desenvolvido recentemente, adequado para a quantificação absoluta de DNA alvo em uma mistura de DNA. É o método mais preciso para determinar a proporção dos alelos tipo BRAFV600E/BRAFwild.

OBJETIVO DA PESQUISA

1. Determinar a frequência dos PTC subclonais-BRAFV600E e determinar a razão média e mediana dos alelos BRAFV600E/BRAF tipo selvagem em tumores heterogêneos;
2. Determinar a relação entre a porcentagem dos alelos BRAFV600E e as características clínico-patológicas;
3. Determinar a relação entre a porcentagem de alelos BRAFV600E e o resultado em pacientes com PTC (endpoint primário)

DESIGN DE ESTUDO

• Uma grande série de tecidos PTC fixados em formalina e embebidos em parafina (FFPE) com acompanhamento clínico > 3 anos serão analisados ​​por ddPCR para determinar a porcentagem de alelos BRAFV600E.
• A pureza das amostras de PTC e a relação célula neoplásica/células contaminantes serão avaliadas por a) análise por rt-PCR da expressão de um painel de RNA específico para células linforreticulares e células estromais; b) revisão microscópica de cortes de tecidos adjacentes.
• A análise estatística será realizada para buscar correlações entre a porcentagem dos alelos BRAFV600E e a) características patológicas, TNM, estadiamento; b) recorrência e sobrevida