Percentuale di alleli BRAFV600E ed esito nel carcinoma tiroideo (ABOUT)

BACKGROUND Il carcinoma papillare della tiroide (PTC) mostra generalmente una prognosi eccellente con una sopravvivenza a 5 anni superiore al 95%. Anche quando il PTC metastatizza ai linfonodi regionali, un evento frequente, ha generalmente una prognosi eccellente. Tuttavia, ci sono alcuni pazienti che presentano un background aggressivo o con caratteristiche clinicopatologiche specifiche che mostrano un comportamento evolutivo aggressivo. Diverse caratteristiche clinicopatologiche, vale a dire il sottotipo patologico, l'età, le metastasi distanti e linfonodali, l'estensione extratiroidea e la completezza della resezione possono essere utilizzate per prevedere la prognosi e sono state adottate nei sistemi di stadiazione come le classificazioni AMES, MACIS e AJCC TNM.

Il background genetico è un potente determinante prognostico solo quando applicato ad alcune mutazioni geniche come il promotore TERT e le mutazioni p53. Il valore prognostico di BRAFV600E, l'oncogene più frequente nel PTC, è debole. Correla con una maggiore estensione, metastasi linfonodali e stadio avanzato (III/IV). La sua correlazione con l'esito in PTC è stata oggetto di molti studi non sempre concordanti. È stato necessario un ampio studio multicentrico per dimostrare inequivocabilmente l'associazione tra BRAFV600E e recidiva e mortalità del cancro. Il rischio di PTC che ospita BRAFV600E rimane debole (rapporto di rischio di recidiva 2,66) e la ricerca di questa mutazione non è raccomandata nella gestione clinica di pazienti a basso rischio con carcinoma tiroideo.

Diversi gruppi di ricerca hanno fornito prove sull'eterogeneità del PTC che consiste in una miscela di cellule tumorali con wild-type e BRAFV600E (5, 6). L'importanza della percentuale di cellule BRAFV600E positive all'interno del tumore è stata dimostrata in 168 PTC. L'analisi del rapporto BRAFV600E/BRAFwild-type è stata eseguita mediante pirosequenziamento e un rapporto più elevato è stato correlato positivamente con l'età del paziente, il volume del tumore, le metastasi linfonodali e con l'esito peggiore della malattia. I pazienti con tumori con rapporto BRAFV600E/BRAFwild-type ≥ 30% hanno mostrato un rischio di probabilità di recidiva del tumore di 5,1, mentre era solo 1,75 nei tumori BRAFV600E positivi se il rapporto allelico non è stato considerato. L'analisi qualitativa BRAFV600E positivo contro PTC negativo può spiegare le correlazioni discordanti con le caratteristiche clinicopatologiche e l'esito in diverse coorti di pazienti con diverso rapporto di alleli BRAFV600E, e in definitiva l'analisi qualitativa dello stato mutazionale BRAF può ridurre la forza del suo significato clinico e utilità.

Mentre l'esistenza dell'eterogeneità intratumorale nel PTC è supportata da molte prove, la sua estensione, il significato biologico e l'utilità clinica sono messi in discussione e devono essere ulteriormente studiati.

Digital-droplet PCR (ddPCR) è un metodo analitico recentemente sviluppato, adatto per la quantificazione assoluta del DNA bersaglio in una miscela di DNA. È il metodo più accurato per determinare il rapporto allelico di tipo BRAFV600E/BRAFwild.

SCOPO DELLA RICERCA

1. Determinare quanto sono frequenti i PTC subclonali-BRAFV600E e determinare il rapporto allelico medio e mediano BRAFV600E/BRAFwild-type nei tumori eterogenei;
2. Determinare la relazione tra la percentuale di alleli BRAFV600E e le caratteristiche clinicopatologiche;
3. Determinare la relazione tra la percentuale di alleli BRAFV600E e l'esito nei pazienti con PTC (endpoint primario)

PROGETTAZIONE DI STUDIO

• Un'ampia serie di tessuti PTC fissati in formalina e inclusi in paraffina (FFPE) con un follow-up clinico > 3 anni saranno analizzati mediante ddPCR per determinare la percentuale di alleli BRAFV600E.
• La purezza dei campioni di PTC e il rapporto cellule neoplastiche/cellule contaminanti saranno valutati mediante a) analisi mediante rt-PCR dell'espressione di un pannello di RNA specifico per cellule linforeticolari e cellule stromali; b) revisione microscopica delle sezioni di tessuto adiacenti.
• Verranno eseguite analisi statistiche per ricercare correlazioni tra la percentuale di alleli BRAFV600E e a) caratteristiche patologiche, TNM, stadiazione; b) recidiva e sopravvivenza