Percentage BRAFV600E-allelen en resultaat bij schildkliercarcinoom (ABOUT)

ACHTERGROND Papillair schildkliercarcinoom (PTC) heeft over het algemeen een uitstekende prognose met een 5-jaarsoverleving van meer dan 95%. Zelfs wanneer PTC uitzaait naar de regionale lymfeklieren, wat vaak voorkomt, heeft het over het algemeen een uitstekende prognose. Er zijn echter enkele patiënten met een agressieve achtergrond of met specifieke klinisch-pathologische kenmerken die agressief ontwikkelingsgedrag vertonen. Verschillende klinisch-pathologische kenmerken, namelijk subtype pathologie, leeftijd, metastasen op afstand en lymfeklieren, extrathyroïde extensie en volledigheid van resectie kunnen worden gebruikt om de prognose te voorspellen en zijn overgenomen in stadiëringssystemen zoals de AMES-, MACIS- en AJCC TNM-classificaties.

De genetische achtergrond is alleen een krachtige prognostische determinant wanneer deze wordt toegepast op sommige genmutaties zoals de TERT-promoter en p53-mutaties. De prognostische waarde van BRAFV600E, het meest voorkomende oncogen bij PTC, is zwak. Het correleert met grotere extensie, lymfekliermetastasen en gevorderd stadium (III/IV). De correlatie ervan met de uitkomst in PTC is het onderwerp geweest van veel niet altijd concordante onderzoeken. Er was een groot onderzoek in meerdere centra nodig om het verband tussen BRAFV600E en terugkeer van kanker en mortaliteit ondubbelzinnig aan te tonen. Het risico van PTC met BRAFV600E blijft laag (recidiefrisicoratio 2,66) en het zoeken naar deze mutatie wordt niet aanbevolen bij de klinische behandeling van patiënten met een laag risico met schildklierkanker.

Verschillende onderzoeksgroepen hebben bewijs geleverd over de heterogeniteit van PTC die bestaat uit een mengsel van tumorcellen met wildtype en BRAFV600E (5, 6). Het belang van het percentage BRAFV600E-positieve cellen in de tumor werd aangetoond in 168 PTC. De analyse van de BRAFV600E/BRAFwildtype-ratio werd uitgevoerd door middel van pyrosequencing en een hogere ratio was positief gecorreleerd met de leeftijd van de patiënt, het tumorvolume, lymfekliermetastasen en met het slechtste resultaat van de ziekte. Patiënten met tumoren met een BRAFV600E/BRAFwildtype-ratio ≥ 30% vertoonden een odds-risico op tumorrecidief van 5,1, terwijl het slechts 1,75 was bij BRAFV600E-positieve tumoren als de allelratio niet in aanmerking werd genomen. De kwalitatieve analyse BRAFV600E positieve versus negatieve PTC kan de tegenstrijdige correlaties met klinisch-pathologische kenmerken en uitkomst verklaren in verschillende cohorten van patiënten met verschillende verhoudingen van BRAFV600E-allelen, en uiteindelijk kan de kwalitatieve analyse BRAF-mutatiestatus de sterkte van de klinische betekenis en het nut ervan verminderen.

Hoewel het bestaan ​​van intratumorheterogeniteit bij PTC door veel bewijzen wordt ondersteund, wordt de uitbreiding, biologische betekenis en klinische bruikbaarheid ervan in twijfel getrokken en moet verder worden onderzocht.

Digital-droplet PCR (ddPCR) is een recent ontwikkelde analytische methode die geschikt is voor absolute kwantificering van doel-DNA in een DNA-mengsel. Het is de meest nauwkeurige methode om de BRAFV600E/BRAFwild-type allelverhouding te bepalen.

DOEL VAN HET ONDERZOEK

1. Bepaal hoe vaak subklonaal-BRAFV600E PTC voorkomt en bepaal de gemiddelde en mediane BRAFV600E/BRAFwild-type allelverhouding in heterogene tumoren;
2. Bepaal de relatie tussen het percentage BRAFV600E-allelen en klinisch-pathologische kenmerken;
3. Bepaal de relatie tussen het percentage BRAFV600E-allelen en de uitkomst bij PTC-patiënten (primair eindpunt)

STUDIE ONTWERP

• Een grote reeks PTC-formaline-gefixeerde, in paraffine ingebedde (FFPE) weefsels met een klinische follow-up > 3 jaar zal worden geanalyseerd door middel van ddPCR om het percentage BRAFV600E-allelen te bepalen.
• De zuiverheid van PTC-monsters en de verhouding neoplastische cel/besmette cellen zullen worden beoordeeld door a) analyse door middel van rt-PCR van expressie van een panel van RNA specifiek voor lymforeticulaire cellen en stromale cellen; b) microscopisch onderzoek van aangrenzende weefselcoupes.
• Statistische analyse zal worden uitgevoerd om correlaties te zoeken tussen het percentage BRAFV600E-allelen en a) pathologische kenmerken, TNM, stadiëring; b) herhaling en overleving