BRAFV600E 等位基因的百分比和甲状腺癌的结果 (ABOUT)

背景 甲状腺乳头状癌 (PTC) 通常表现出良好的预后，5 年生存率超过 95%。 即使当 PTC 转移到区域淋巴结时（经常发生），它通常也具有良好的预后。 然而，有些患者具有攻击性背景或具有表现出攻击性发育行为的特定临床病理学特征。 一些临床病理学特征，即病理学亚型、年龄、远处和淋巴结转移、甲状腺外扩展和切除的完整性可用于预测预后，并已被用于分期系统，如 AMES、MACIS 和 AJCC TNM 分类。

只有当应用于某些基因突变（如 TERT 启动子和 p53 突变）时，遗传背景才是强有力的预后决定因素。 PTC 中最常见的致癌基因 BRAFV600E 的预后价值较弱。 它与更大的扩展、淋巴结转移和晚期 (III/IV) 相关。 它与 PTC 结果的相关性一直是许多并不总是一致的研究的对象。 需要一项大型多中心研究来明确证明 BRAFV600E 与癌症复发和死亡率之间的关联。 PTC 携带 BRAFV600E 的风险仍然很低（复发风险比 2.66），不建议在低危甲状腺癌患者的临床管理中寻找这种突变。

不同的研究小组提供了 PTC 异质性的证据，该异质性由肿瘤细胞与野生型和 BRAFV600E 的混合物组成 (5, 6)。 在 168 PTC 中证明了肿瘤内 BRAFV600E 阳性细胞百分比的重要性。 BRAFV600E/BRAF 野生型比率的分析是通过焦磷酸测序进行的，较高的比率与患者年龄、肿瘤体积、淋巴结转移和最坏的疾病结果呈正相关。 BRAFV600E/BRAF 野生型比率≥ 30% 的肿瘤患者显示肿瘤复发的比值风险为 5.1，而如果不考虑等位基因比率，BRAFV600E 阳性肿瘤仅为 1.75。 定性分析 BRAFV600E 阳性与阴性 PTC 可以解释具有不同 BRAFV600E 等位基因比例的不同队列患者与临床病理学特征和结果的不一致相关性，最终定性分析 BRAF 突变状态可以降低其临床意义和实用性的强度。

虽然许多证据支持 PTC 中肿瘤内异质性的存在，但其扩展性、生物学意义和临床实用性受到质疑，必须进一步研究。

数字微滴 PCR (ddPCR) 是最近开发的一种分析方法，适用于 DNA 混合物中目标 DNA 的绝对定量。 这是确定 BRAFV600E/BRAF 野生型等位基因比例的最准确方法。

研究目的

1. 确定亚克隆 BRAFV600E PTC 的频率，并确定异质性肿瘤中 BRAFV600E/BRAF 野生型等位基因比率的均值和中值；
2. 确定BRAFV600E等位基因百分比与临床病理特征的关系；
3. 确定 BRAFV600E 等位基因百分比与 PTC 患者结果之间的关系（主要终点）

学习规划

• 大量 PTC 福尔马林固定、石蜡包埋 (FFPE) 组织的临床随访时间 > 3 年将通过 ddPCR 进行分析，以确定 BRAFV600E 等位基因的百分比。
• PTC 样本的纯度和肿瘤细胞/污染细胞的比率将通过以下方式评估：a) 通过 rt-PCR 分析一组对淋巴网状细胞和基质细胞具有特异性的 RNA 的表达； b) 相邻组织切片的显微镜检查。
• 将进行统计分析以搜索 BRAFV600E 等位基因百分比与 a) 病理学特征、TNM、分期之间的相关性； b) 复发和存活