Sikkerhed og effektivitet af en ikke-replikerende ChAdOx1 vektorvaccine AZD1222 (COVISHIELD), til forebyggelse af COVID-19 hos patienter med levercirrhosis

• Undersøgelsespopulation: Gruppe 1: Levercirrhose Gruppe 2: Kontrolgruppe (sunde kontroller)
• Undersøgelsesdesign: Et enkelt center, pilotundersøgelse, adaptivt klinisk forsøg
• Studieperiode: 1 år, Tilmeldingsperiode: Mar 2021 til Aug 2021
• Prøvestørrelse med begrundelse:

Undersøgelsen udføres som en pilotundersøgelse. De første 100 deltagere vil blive tilmeldt i begge grupper. Der vil dog blive foretaget en foreløbig analyse efter tilmelding af 50 deltagere i hver gruppe. Undersøgelsen udføres som et adaptivt klinisk forsøg.

• Intervention:

  2 IM-doser (0,5 ml) af AZD1222(Covishield) på dag 0 og efter 6-8 ugers første dosis (dag 42-56 dage). Denne tidsplan vil blive fulgt for de første 100 deltagere, hvorefter vaccinationsplanen i henhold til de gældende regeringsprotokoller skal følges som en del af Adaptive Clinical Trial.

• Overvågning og vurdering:

SARS CoV2 serum IgG-niveauer og neutraliserende antistoftitre:

Blodprøverne ved baseline (før første dosis), dag 28 (4 uger/28 dage efter første dosis og lige før anden dosis), 8 uger (eller 4 uger efter anden dosis), 16 uger (eller 12 uger efter anden dosis) , 28 uger (eller 24 uger efter anden dosis), 40 uger (eller 36 uger efter anden dosis) og 52 uger (eller 48 uger efter anden dosis) Efter vaccination vil blive screenet for anti-SARS-CoV-2 IgG af kommercielt tilgængelig kemiluminescerende immunoassays (CLIA) SARS-CoV-2 IgG (Ortho Clinical Diagnostics, Raritan, NJ, USA) på VITROS ECi/ECiQ/3600 automatiseret instrument. Resultater vil blive udtrykt som reaktive med Serum/cut-off-forhold ≥ 1 og ikke-reaktive med < 1 S/Co-forhold.

Alle reaktive prøver vil blive behandlet yderligere for at måle den neutraliserende antistoftiter ved hjælp af en surrogatvirusneutraliseringstest ELISA-baseret kommerciel analyse (sVNT) (GenScript cPass™ SARS-CoV-2 Neutralization Antibody Detection Kit) for at lede efter neutraliserende antistofrespons på spikeproteinet af virussen.

Real Time PCR for SARS CoV-2 infektion:

En diagnose af SARSCoV-2 infektion vil blive bekræftet ved udførelse af realtids revers transkriptase polymerase kædereaktion (RT-PCR) på den kombinerede nasopharyngeal og oral podning opsamlet i viralt transportmedium og ved påvisning af mindst 2 specifikke genmål for SARS. CoV-2-virus (E- og RdRP-gener).

Primær IFN-y ELISPOT assay. Blodprøverne ved baseline (før første dosis), dag 28 (4 uger/28 dage efter første dosis og lige før anden dosis), 8 uger (eller 4 uger efter anden dosis), 16 uger (eller 12 uger efter anden dosis) , 28 uger (eller 24 uger efter anden dosis), 40 uger (eller 36 uger efter anden dosis) og 52 uger (eller 48 uger efter anden dosis) vil blive indsamlet. Primært vil cellulære responser blive vurderet ved hjælp af et ex-vivo interferon-y enzym-linked immunospot (ELISpot) assay for at optælle antigen-specifikke T-celler. Kort fortalt vil PBMC'er blive isoleret fra fuldblod ved tæthedsgradientcentrifugering, straks kryokonserveret i 90% føtalt bovint serum og 10% dimethylsulfoxid og overført til flydende nitrogen til opbevaring.

IFN-γ ELISPOT-assays vil blive udført under anvendelse af kryokonserverede PBMC. Kort fortalt vil ufraktioneret PBMC blive optøet, resuspenderet i en koncentration på 1 × 106 celler/ml i DMEM-medium og udpladet med 100 μl/brønd (1 × 105 celler/brønd) i 96-brønds, nitrocellulose-backed plader ( Millipore Corp, Bedford, MA) tidligere coatet med en PBS-opløsning af anti-IFN-γ monoklonalt antistof (1-D1K, 5 μg/ml; Mabtech Technologies, Nacka, Sverige). Sammen med negativ kontrol som, vil forskellige cellestimuli (PMA; phytohæmagglutinin 1 μg/ml og Ionomycin) blive brugt som positive kontroller., Pladerne inkuberes derefter ved 37°C i 40 timer, og vil derefter blive høstet og aflæst i ELISPOT-læser. Et vaccine-induceret respons vil blive defineret som en ≥3 gange stigning i forhold til baseline-responset på det individuelle epitoppeptid.

T-cellers funktionalitet:

Blodprøverne ved baseline (før første dosis), dag 28 (4 uger/28 dage efter første dosis og lige før anden dosis), 8 uger (eller 4 uger efter anden dosis), 16 uger (eller 12 uger efter anden dosis) , 28 uger (eller 24 uger efter anden dosis), 40 uger (eller 36 uger efter anden dosis) og 52 uger (eller 48 uger efter anden dosis) Immunresponsmålinger vil blive vurderet ved brug af perifere mononukleære blodceller (PBMC) opnået overhovedet tidspunkter.

For at undersøge CD4- og CD8-T-cellefunktionaliteten vil PBMC'er blive dyrket i en plade med 96 brønde i RPMI-medier indeholdende 10% FBS, med eller uden PMA / Ionomycin (positiv kontrol) (PMA 2 ng/mL; ionomycin 1 μg/mL; Merck, Darmstadt, Tyskland) og 10 µg/ml LPS (Merck, Darmstadt, Tyskland) ved 37°C, 5% CO2 i 6-7 timer. Efter 1 times inkubation tilsættes 1 μg/mL brefeldin A (BD Pharmingen, USA) til alle brøndene. Efter inkubation vil celler blive overfladefarvet i 25-30 minutter med anti-CD3FITC, anti-CD8BV421 og anti-CD4 PE/cyanin5.5 (Cy5) efterfulgt af 10 minutters permeabilisering med 100 µL permeabiliserende opløsning (BD Biosciences, USA) og vil blive vasket to gange med 500 µL 1x cytoperm. Efter vask vil celler blive farvet til intracellulær ekspression af IL-2, IFN-y og IL-17 med anti-IL2 APC, anti-IFN-y PE, anti-IL-17 PE-Cy7 (BD Biosciences og Pharmingen, USA ) og vil blive inkuberet i 25-30 minutter efterfulgt af vask med PBS og fiksering af cellerne i 0,1 % PFA før anskaffelse på et BD Verse flowcytometer. Data vil blive analyseret ved hjælp af FlowJo software version 10.

Skift af monocyt fænotype og funktionalitet:

Blodprøverne ved baseline (før første dosis), dag 28 (4 uger/28 dage efter første dosis og lige før anden dosis), 8 uger (eller 4 uger efter anden dosis), 16 uger (eller 12 uger efter anden dosis) , 28 uger (eller 24 uger efter anden dosis), 40 uger (eller 36 uger efter anden dosis) og 52 uger (eller 48 uger efter anden dosis) Vaccine vil inducere en stigning i proinflammatorisk cytokinproduktion, som er afhængig af trænet immunitet i medfødte immunceller. Vi vil karakterisere fænotypen og funktionaliteten af ​​monocytter før vaccination og efter vaccination ved hjælp af flowcytometrisk analyse.

De, der er fuldt immuniserede og stadig udvikler klinisk Covid 19-infektion, vil blive grupperet sammen, og immunologisk profil vil blive undersøgt.