Innocuité et efficacité d'un vaccin vecteur ChAdOx1 non réplicatif AZD1222 (COVISHIELD), pour la prévention de la COVID-19 chez les patients atteints de cirrhose du foie

• Population étudiée : Groupe 1 : Cirrhose du foie Groupe 2 : Groupe témoin (témoins sains)
• Conception de l'étude : un centre unique, une étude pilote, un essai clinique adaptatif
• Période d'étude : 1 an, période d'inscription : mars 2021 à août 2021
• Taille de l'échantillon avec justification :

L'étude est menée en tant qu'étude pilote. Les 100 premiers participants seront inscrits dans les deux groupes. Cependant, une analyse préliminaire sera effectuée après l'inscription de 50 participants dans chaque groupe. L'étude est menée en tant qu'essai clinique adaptatif.

• Intervention:

  2 doses IM (0,5 ml) d'AZD1222 (Covishield) au jour 0 et après 6 à 8 semaines de la première dose (jour 42 à 56 jours). Ce calendrier sera suivi pour les 100 premiers participants, après quoi le calendrier de vaccination conformément aux protocoles gouvernementaux en vigueur sera suivi dans le cadre de l'essai clinique adaptatif.

• Suivi et évaluation :

Niveaux d'IgG sériques SARS CoV2 et titres d'anticorps neutralisants :

Les échantillons de sang au départ (avant la première dose), jour 28 (4 semaines/28 jours après la première dose et juste avant la deuxième dose), 8 semaines (ou 4 semaines après la deuxième dose), 16 semaines (ou 12 semaines après la deuxième dose) , 28 semaines (ou 24 semaines après la deuxième dose), 40 semaines (ou 36 semaines après la deuxième dose) et 52 semaines (ou 48 semaines après la deuxième dose) Après la vaccination, un dépistage des IgG anti-SARS-CoV-2 sera effectué par des dosages immunologiques par chimiluminescence (CLIA) SARS-CoV-2 IgG (Ortho Clinical Diagnostics, Raritan, NJ, USA) sur l'instrument automatisé VITROS ECi/ECiQ/3600. Les résultats seront exprimés comme réactifs avec un rapport sérum/seuil ≥ 1, et non réactifs avec un rapport S/Co < 1.

Tous les échantillons réactifs seront ensuite traités pour mesurer le titre d'anticorps neutralisants à l'aide d'un test commercial basé sur ELISA de test de neutralisation du virus de substitution (sVNT) (GenScript cPass™ SARS-CoV-2 Neutralization Antibody Detection Kit) pour rechercher la réponse des anticorps neutralisants à la protéine de pointe du virus.

PCR en temps réel pour l'infection par le SRAS CoV-2 :

Un diagnostic d'infection par le SARSCoV-2 sera confirmé par la réalisation d'une amplification en chaîne par polymérase par transcriptase inverse en temps réel (RT-PCR) sur l'écouvillon nasopharyngé et oral combiné collecté dans un milieu de transport viral et par la détection d'au moins 2 cibles génétiques spécifiques du SRAS. Virus CoV-2 (gènes E et RdRP).

Dosage primaire IFN-γ ELISPOT. Les échantillons de sang au départ (avant la première dose), jour 28 (4 semaines/28 jours après la première dose et juste avant la deuxième dose), 8 semaines (ou 4 semaines après la deuxième dose), 16 semaines (ou 12 semaines après la deuxième dose) , 28 semaines (ou 24 semaines après la deuxième dose), 40 semaines (ou 36 semaines après la deuxième dose) et 52 semaines (ou 48 semaines après la deuxième dose) seront recueillies. Principalement, les réponses cellulaires seront évaluées à l'aide d'un test immunospot lié à l'enzyme interféron-γ ex-vivo (ELISpot) pour dénombrer les cellules T spécifiques de l'antigène. En bref, les PBMC seront isolés du sang total par centrifugation en gradient de densité, immédiatement cryoconservés dans 90 % de sérum bovin fœtal et 10 % de diméthylsulfoxyde, et transférés dans de l'azote liquide pour le stockage.

Les dosages IFN-γ ELISPOT seront effectués à l'aide de PBMC cryoconservés. En bref, les PBMC non fractionnés seront décongelés, remis en suspension à une concentration de 1 × 106 cellules/ml dans du milieu DMEM et seront étalés à 100 μl/puits (1 × 105 cellules/puits) dans des plaques à 96 puits à dos de nitrocellulose ( Millipore Corp, Bedford, MA) préalablement recouvert d'une solution PBS d'anticorps monoclonal anti-IFN-γ (1-D1K, 5 μg/ml ; Mabtech Technologies, Nacka, Suède). En plus du contrôle négatif, différents stimuli cellulaires (PMA ; phytohémagglutinine 1 μg/ml et ionomycine) seront utilisés comme contrôles positifs., Les plaques seront ensuite incubées à 37°C pendant 40 h, puis seront récoltées et lues dans le lecteur ELISPOT. Une réponse induite par le vaccin sera définie comme une augmentation ≥ 3 fois par rapport à la réponse de base au peptide épitopique individuel.

Cellules T Fonctionnalité :

Les échantillons de sang au départ (avant la première dose), jour 28 (4 semaines/28 jours après la première dose et juste avant la deuxième dose), 8 semaines (ou 4 semaines après la deuxième dose), 16 semaines (ou 12 semaines après la deuxième dose) , 28 semaines (ou 24 semaines après la deuxième dose), 40 semaines (ou 36 semaines après la deuxième dose) et 52 semaines (ou 48 semaines après la deuxième dose) Les mesures de la réponse immunitaire seront évaluées à l'aide de cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) obtenues à tous Points de temps.

Pour étudier la fonctionnalité des lymphocytes T CD4 et CD8, les PBMC seront cultivées dans une plaque à 96 puits dans un milieu RPMI contenant 10 % de FBS, avec ou sans PMA/ionomycine (contrôle positif) (PMA 2 ng/mL ; ionomycine 1 μg/mL ; Merck, Darmstadt, Allemagne) et 10 µg/ml de LPS (Merck, Darmstadt, Allemagne) à 37 °C, 5 % de CO2 pendant 6 à 7 heures. Après 1 heure d'incubation, 1 μg/mL de brefeldine A (BD Pharmingen, USA) seront ajoutés dans tous les puits. Après incubation, les cellules seront colorées en surface pendant 25 à 30 minutes avec anti-CD3FITC, anti-CD8BV421 et anti-CD4 PE/cyanine5.5 (Cy5) suivi de 10 minutes de perméabilisation avec 100 µL de solution perméabilisante (BD Biosciences, USA) et sera lavé deux fois avec 500 µL 1x cytoperm. Après lavage, les cellules seront colorées pour l'expression intracellulaire d'IL-2, IFN-γ et IL-17 avec anti-IL2 APC, anti-IFN-γ PE, anti-IL-17 PE- Cy7 (BD Biosciences and Pharmingen, USA ) et sera incubé pendant 25 à 30 minutes suivi d'un lavage avec du PBS et d'une fixation des cellules dans du PFA à 0,1 % avant l'acquisition sur un cytomètre en flux BD Verse. Les données seront analysées à l'aide du logiciel FlowJo version 10.

Commutation du monocyte Phénotype et fonctionnalité :

Les échantillons de sang au départ (avant la première dose), jour 28 (4 semaines/28 jours après la première dose et juste avant la deuxième dose), 8 semaines (ou 4 semaines après la deuxième dose), 16 semaines (ou 12 semaines après la deuxième dose) , 28 semaines (ou 24 semaines après la deuxième dose), 40 semaines (ou 36 semaines après la deuxième dose) et 52 semaines (ou 48 semaines après la deuxième dose) Le vaccin induira une augmentation de la production de cytokines pro-inflammatoires, qui dépend de l'immunité entraînée chez cellules immunitaires innées. Nous caractériserons le phénotype et la fonctionnalité des monocytes avant vaccination et après vaccination à l'aide d'une analyse par cytométrie en flux.

Ceux qui sont complètement immunisés et qui développent encore une infection clinique à Covid 19 seront regroupés et le profil immunologique sera étudié.