Veiligheid en werkzaamheid van een niet-replicerend ChAdOx1-vectorvaccin AZD1222 (COVISHIELD), ter preventie van COVID-19 bij patiënten met levercirrose

• Studiepopulatie: Groep 1: Levercirrose Groep 2: Controlegroep (gezonde controles)
• Onderzoeksopzet: een enkel centrum, pilootstudie, adaptieve klinische proef
• Studieperiode: 1 jaar, Inschrijvingsperiode: maart 2021 tot aug. 2021
• Steekproefomvang met verantwoording:

Het onderzoek wordt uitgevoerd als pilotstudie. De eerste 100 deelnemers worden in beide groepen ingeschreven. Er zal echter een voorlopige analyse worden uitgevoerd na inschrijving van 50 deelnemers in elke groep. Studie wordt uitgevoerd als een Adaptive Clinical Trial.

• Interventie:

  2 IM-doses (0,5 ml) AZD1222 (Covishield) op dag 0 en na 6-8 weken van de eerste dosis (dag 42-56 dagen). Dit schema zal worden gevolgd voor de eerste 100 deelnemers, waarna het vaccinatieschema volgens de geldende overheidsprotocollen zal worden gevolgd als onderdeel van Adaptive Clinical Trial.

• Monitoring en beoordeling:

SARS CoV2 serum IgG-niveaus en neutraliserende antilichaamtiters:

De bloedmonsters bij baseline (vóór de eerste dosis), dag 28 (4 weken/28 dagen na de eerste dosis en vlak voor de tweede dosis), 8 weken (of 4 weken na de tweede dosis), 16 weken (of 12 weken na de tweede dosis) , 28 weken (of 24 weken na de tweede dosis), 40 weken (of 36 weken na de tweede dosis) en 52 weken (of 48 weken na de tweede dosis) Post-vaccinatie zal worden gescreend op anti-SARS-CoV-2 IgG door in de handel verkrijgbare chemiluminescente immunoassays (CLIA) SARS-CoV-2 IgG (Ortho Clinical Diagnostics, Raritan, NJ, VS) op het VITROS ECi/ECiQ/3600 geautomatiseerd instrument. De resultaten worden uitgedrukt als reactief met een serum/cut-off-ratio ≥ 1 en niet-reactief met een S/Co-ratio < 1.

Alle reactieve monsters zullen verder worden verwerkt om de neutraliserende antilichaamtiter te meten met behulp van een surrogaatvirusneutralisatietest ELISA-gebaseerde commerciële assay (sVNT) (GenScript cPass™ SARS-CoV-2 Neutralization Antibody Detection Kit) om te zoeken naar neutraliserende antilichaamrespons op het spike-eiwit van het virus.

Realtime PCR voor SARS CoV-2-infectie:

Een diagnose van SARSCoV-2-infectie zal worden bevestigd door uitvoering van Real Time reverse transcriptase-polymerasekettingreactie (RT-PCR) op het gecombineerde nasofaryngeale en orale uitstrijkje dat is verzameld in viraal transportmedium en door detectie van ten minste 2 specifieke gendoelen van de SARS CoV-2-virus (E- en RdRP-genen).

Primaire IFN-γ ELISPOT-test. De bloedmonsters bij baseline (vóór de eerste dosis), dag 28 (4 weken/28 dagen na de eerste dosis en vlak voor de tweede dosis), 8 weken (of 4 weken na de tweede dosis), 16 weken (of 12 weken na de tweede dosis) , 28 weken (of 24 weken na de tweede dosis), 40 weken (of 36 weken na de tweede dosis) en 52 weken (of 48 weken na de tweede dosis) worden verzameld. In de eerste plaats zullen cellulaire responsen worden beoordeeld met behulp van een ex-vivo interferon-γ-enzym-gekoppelde immunospot (ELISpot)-assay om antigeenspecifieke T-cellen te tellen. In het kort, PBMC's zullen worden geïsoleerd uit volbloed door dichtheidsgradiëntcentrifugatie, onmiddellijk gecryopreserveerd in 90% foetaal runderserum en 10% dimethylsulfoxide, en overgebracht naar vloeibare stikstof voor opslag.

IFN-γ ELISPOT-assays zullen worden uitgevoerd met gecryopreserveerde PBMC. In het kort, ongefractioneerde PBMC zal worden ontdooid, geresuspendeerd in een concentratie van 1 x 106 cellen/ml in DMEM-medium, en zal worden geplateerd bij 100 μl/putje (1 x 105 cellen/putje) in 96-putjes, nitrocellulose-ondersteunde platen ( Millipore Corp, Bedford, MA) eerder gecoat met een PBS-oplossing van anti-IFN-γ monoklonaal antilichaam (1-D1K, 5 μg/ml; Mabtech Technologies, Nacka, Zweden). Naast negatieve controle zullen verschillende celstimuli (PMA; fytohemagglutinine 1 μg/ml en ionomycine) worden gebruikt als positieve controles., De platen worden vervolgens gedurende 40 uur bij 37°C geïncubeerd en vervolgens geoogst en afgelezen in de ELISPOT-lezer. Een door vaccin geïnduceerde respons zal worden gedefinieerd als een ≥3-voudige toename ten opzichte van de basislijnrespons op het individuele epitooppeptide.

T-cellen Functionaliteit:

De bloedmonsters bij baseline (vóór de eerste dosis), dag 28 (4 weken/28 dagen na de eerste dosis en vlak voor de tweede dosis), 8 weken (of 4 weken na de tweede dosis), 16 weken (of 12 weken na de tweede dosis) , 28 weken (of 24 weken na de tweede dosis), 40 weken (of 36 weken na de tweede dosis) en 52 weken (of 48 weken na de tweede dosis). Tijd punten.

Om de CD4- en CD8-T-celfunctionaliteit te onderzoeken, zullen PBMC's worden gekweekt in platen met 96 putjes in RPMI-media die 10% FBS bevatten, met of zonder PMA / Ionomycine (positieve controle) (PMA 2 ng/ml; ionomycine 1 μg/ml; Merck, Darmstadt, Duitsland) en 10 µg/ml LPS (Merck, Darmstadt, Duitsland) bij 37°C, 5% CO2 gedurende 6-7 uur. Na 1 uur incubatie wordt 1 μg/ml brefeldin A (BD Pharmingen, VS) aan alle putjes toegevoegd. Na incubatie worden de cellen gedurende 25-30 minuten aan het oppervlak gekleurd met anti-CD3FITC, anti-CD8BV421 en anti-CD4 PE/cyanine5.5 (Cy5), gevolgd door 10 minuten permeabilisatie met 100 µL permeabiliseringsoplossing (BD Biosciences, VS). en wordt tweemaal gewassen met 500 µL 1x cytoperm. Na het wassen zullen de cellen worden gekleurd voor intracellulaire expressie van IL-2, IFN-γ en IL-17 met anti-IL2 APC, anti-IFN-γ PE, anti-IL-17 PE-Cy7 (BD Biosciences en Pharmingen, VS ) en zullen gedurende 25-30 minuten worden geïncubeerd, gevolgd door wassen met PBS en fixeren van de cellen in 0,1% PFA voordat ze worden verkregen op een BD Verse flowcytometer. Gegevens worden geanalyseerd met behulp van FlowJo-softwareversie 10.

Schakelen van monocyt fenotype en functionaliteit:

De bloedmonsters bij baseline (vóór de eerste dosis), dag 28 (4 weken/28 dagen na de eerste dosis en vlak voor de tweede dosis), 8 weken (of 4 weken na de tweede dosis), 16 weken (of 12 weken na de tweede dosis) , 28 weken (of 24 weken na de tweede dosis), 40 weken (of 36 weken na de tweede dosis) en 52 weken (of 48 weken na de tweede dosis) Vaccin induceert een toename van de pro-inflammatoire cytokineproductie, die afhankelijk is van getrainde aangeboren immuuncellen. We zullen het fenotype en de functionaliteit van monocyten voor vaccinatie en na vaccinatie karakteriseren met behulp van flowcytometrische analyse.

Degenen die volledig zijn geïmmuniseerd en nog steeds een klinische Covid 19-infectie ontwikkelen, zullen worden gegroepeerd en het immunologische profiel zal worden bestudeerd.