Sikkerhet og effekt av en ikke-replikerende ChAdOx1 vektorvaksine AZD1222 (COVISHIELD), for forebygging av COVID-19 hos pasienter med levercirrhose

• Studiepopulasjon: Gruppe 1: Levercirrhose Gruppe 2: Kontrollgruppe (friske kontroller)
• Studiedesign: Et enkelt senter, pilotstudie, adaptiv klinisk utprøving
• Studieperiode: 1 år, påmeldingsperiode: mars 2021 til august 2021
• Prøvestørrelse med begrunnelse:

Studien gjennomføres som en pilotstudie. De første 100 deltakerne vil bli påmeldt i begge gruppene. Imidlertid vil en foreløpig analyse gjøres etter påmelding av 50 deltakere i hver gruppe. Studien utføres som en adaptiv klinisk studie.

• Innblanding:

  2 IM-doser (0,5 ml) av AZD1222(Covishield) på dag 0 og etter 6-8 uker med første dose (dag 42-56 dager). Denne planen vil bli fulgt for de første 100 deltakerne, hvoretter vaksinasjonsplanen i henhold til gjeldende regjeringsprotokoller skal følges som en del av Adaptive Clinical Trial.

• Overvåking og vurdering:

SARS CoV2 serum IgG-nivåer og nøytraliserende antistofftitere:

Blodprøvene ved baseline (før første dose), dag 28 (4 uker/28 dager etter første dose og like før andre dose), 8 uker (eller 4 uker etter andre dose), 16 uker (eller 12 uker etter andre dose) , 28 uker (eller 24 uker etter andre dose), 40 uker (eller 36 uker etter andre dose) og 52 uker (eller 48 uker etter andre dose) Etter vaksinasjon vil det bli screenet for anti-SARS-CoV-2 IgG av kommersielt tilgjengelig kjemiluminescerende immunoassays (CLIA) SARS-CoV-2 IgG (Ortho Clinical Diagnostics, Raritan, NJ, USA) på VITROS ECi/ECiQ/3600 automatisert instrument. Resultatene vil bli uttrykt som reaktive med Serum/cut-off-forhold ≥ 1, og ikke-reaktive med < 1 S/Co-forhold.

Alle reaktive prøver vil bli viderebehandlet for å måle den nøytraliserende antistofftiteren ved å bruke en surrogatvirusnøytraliseringstest ELISA-basert kommersiell analyse (sVNT) (GenScript cPass™ SARS-CoV-2 Neutralization Antibody Detection Kit) for å se etter nøytraliserende antistoffrespons på spikeproteinet av viruset.

Sanntids PCR for SARS CoV-2-infeksjon:

En diagnose av SARSCoV-2-infeksjon vil bli bekreftet ved utførelse av sanntids revers transkriptase-polymerasekjedereaksjon (RT-PCR) på den kombinerte nasofaryngeale og orale vattpinne innsamlet i viralt transportmedium og ved påvisning av minst 2 spesifikke genmål for SARS CoV-2-virus (E- og RdRP-gener).

Primær IFN-γ ELISPOT-analyse. Blodprøvene ved baseline (før første dose), dag 28 (4 uker/28 dager etter første dose og like før andre dose), 8 uker (eller 4 uker etter andre dose), 16 uker (eller 12 uker etter andre dose) , 28 uker (eller 24 uker etter andre dose), 40 uker (eller 36 uker etter andre dose) og 52 uker (eller 48 uker etter andre dose) samles inn. Primært vil cellulære responser bli vurdert ved å bruke en ex-vivo interferon-y enzym-linked immunospot (ELISpot) assay for å telle opp antigenspesifikke T-celler. Kort fortalt vil PBMC-er isoleres fra fullblod ved tetthetsgradientsentrifugering, umiddelbart kryokonserveres i 90 % føtalt bovint serum og 10 % dimetylsulfoksid, og overføres til flytende nitrogen for lagring.

IFN-γ ELISPOT-analyser vil bli utført ved bruk av kryokonservert PBMC. Kort fortalt vil ufraksjonert PBMC bli tint, resuspendert ved en konsentrasjon på 1 × 106 celler/ml i DMEM-medium, og vil bli belagt med 100 μl/brønn (1 × 105 celler/brønn) i 96-brønners nitrocellulose-støttede plater ( Millipore Corp, Bedford, MA) tidligere belagt med en PBS-løsning av anti-IFN-γ monoklonalt antistoff (1-D1K, 5 μg/ml; Mabtech Technologies, Nacka, Sverige). Sammen med negativ kontroll som, vil ulike cellestimuli (PMA; phytohemagglutinin 1 μg/ml og Ionomycin ) bli brukt i som positive kontroller., Platene vil deretter inkuberes ved 37 °C i 40 timer, og deretter høstes og leses i ELISPOT-leseren. En vaksineindusert respons vil bli definert som en ≥3 ganger økning i forhold til baseline-responsen på det individuelle epitoppeptidet.

T-cellers funksjonalitet:

Blodprøvene ved baseline (før første dose), dag 28 (4 uker/28 dager etter første dose og like før andre dose), 8 uker (eller 4 uker etter andre dose), 16 uker (eller 12 uker etter andre dose) , 28 uker (eller 24 uker etter andre dose), 40 uker (eller 36 uker etter andre dose) og 52 uker (eller 48 uker etter andre dose) Immunresponsmålinger vil bli vurdert ved å bruke perifere mononukleære blodceller (PBMC) oppnådd i det hele tatt tidspunkt.

For å undersøke CD4- og CD8-T-cellefunksjonaliteten vil PBMC-er dyrkes i 96-brønners plate i RPMI-medier som inneholder 10 % FBS, med eller uten PMA/ionomycin (positiv kontroll) (PMA 2 ng/mL; ionomycin 1 μg/mL; Merck, Darmstadt, Tyskland) og 10 µg/ml LPS (Merck, Darmstadt, Tyskland) ved 37°C, 5 % CO2 i 6-7 timer. Etter 1 times inkubasjon vil 1 μg/mL brefeldin A (BD Pharmingen, USA) tilsettes alle brønnene. Etter inkubering vil cellene overflatefarges i 25-30 minutter med anti-CD3FITC, anti-CD8BV421 og anti-CD4 PE/cyanine5.5 (Cy5) etterfulgt av 10 minutter permeabilisering med 100 µL permeabiliserende løsning (BD Biosciences, USA) og vil bli vasket to ganger med 500 µL 1x cytoperm. Etter vask vil cellene farges for intracellulær ekspresjon av IL-2, IFN-γ og IL-17 med anti-IL2 APC, anti-IFN-γ PE, anti-IL-17 PE-Cy7 (BD Biosciences og Pharmingen, USA ) og vil bli inkubert i 25-30 minutter etterfulgt av vasking med PBS og fiksering av cellene i 0,1 % PFA før innsamling på et BD Verse flowcytometer. Data vil bli analysert med FlowJo programvareversjon 10.

Bytte av monocytt fenotype og funksjonalitet:

Blodprøvene ved baseline (før første dose), dag 28 (4 uker/28 dager etter første dose og like før andre dose), 8 uker (eller 4 uker etter andre dose), 16 uker (eller 12 uker etter andre dose) , 28 uker (eller 24 uker etter andre dose), 40 uker (eller 36 uker etter andre dose) og 52 uker (eller 48 uker etter andre dose) Vaksine vil indusere en økning i proinflammatorisk cytokinproduksjon, som er avhengig av trent immunitet i medfødte immunceller. Vi vil karakterisere fenotypen og funksjonaliteten til monocytter før vaksinasjon og etter vaksinasjon ved hjelp av flowcytometrisk analyse.

De som er fullt immunisert og fortsatt utvikler klinisk Covid 19-infeksjon vil bli gruppert sammen og immunologisk profil vil bli studert.