Säkerhet och effekt av ett icke-replikerande ChAdOx1 vektorvaccin AZD1222 (COVISHIELD), för förebyggande av covid-19 hos patienter med levercirros

• Studiepopulation: Grupp 1: Levercirros Grupp 2: Kontrollgrupp (friska kontroller)
• Studiedesign: Ett enda centrum, Pilotstudie, Adaptiv klinisk prövning
• Studieperiod: 1 år, inskrivningsperiod: mars 2021 till augusti 2021
• Provstorlek med motivering:

Studien genomförs som en pilotstudie. De första 100 deltagarna kommer att registreras i båda grupperna. En preliminär analys kommer dock att göras efter inskrivning av 50 deltagare i varje grupp. Studien genomförs som en adaptiv klinisk prövning.

• Intervention:

  2 imdoser (0,5 ml) av AZD1222(Covishield) på dag 0 och efter 6-8 veckors första dos (dag 42-56 dagar). Detta schema kommer att följas för de första 100 deltagarna, varefter vaccinationsschemat enligt de rådande regeringsprotokollen ska följas som en del av Adaptive Clinical Trial.

• Övervakning och bedömning:

SARS CoV2 serum IgG-nivåer och neutraliserande antikroppstitrar:

Blodproverna vid baslinjen (före första dosen), dag 28 (4 veckor/28 dagar efter första dosen och strax före andra dosen), 8 veckor (eller 4 veckor efter andra dosen), 16 veckor (eller 12 veckor efter andra dosen) , 28 veckor (eller 24 veckor efter andra dosen), 40 veckor (eller 36 veckor efter andra dosen) och 52 veckor (eller 48 veckor efter andra dosen) Efter vaccination kommer att screenas för anti-SARS-CoV-2 IgG av kommersiellt tillgängligt kemiluminescerande immunanalyser (CLIA) SARS-CoV-2 IgG (Ortho Clinical Diagnostics, Raritan, NJ, USA) på VITROS ECi/ECiQ/3600 automatiserat instrument. Resultaten kommer att uttryckas som reaktiva med Serum/cut-off-förhållande ≥ 1 och icke-reaktiva med < 1 S/Co-förhållande.

Alla reaktiva prover kommer att bearbetas ytterligare för att mäta den neutraliserande antikroppstitern med användning av ett surrogatvirusneutralisationstest ELISA-baserad kommersiell analys (sVNT) (GenScript cPass™ SARS-CoV-2 Neutralization Antibody Detection Kit) för att leta efter neutraliserande antikroppssvar mot spikeproteinet av viruset.

Realtids-PCR för SARS CoV-2-infektion:

En diagnos av SARSCoV-2-infektion kommer att bekräftas genom utförande av realtid omvänd transkriptaspolymeraskedjereaktion (RT-PCR) på den kombinerade nasofaryngeala och orala pinnprovningen som samlats in i viralt transportmedium och genom detektering av minst 2 specifika genmål för SARS. CoV-2-virus (E- och RdRP-gener).

Primär IFN-y ELISPOT-analys. Blodproverna vid baslinjen (före första dosen), dag 28 (4 veckor/28 dagar efter första dosen och strax före andra dosen), 8 veckor (eller 4 veckor efter andra dosen), 16 veckor (eller 12 veckor efter andra dosen) , 28 veckor (eller 24 veckor efter andra dosen), 40 veckor (eller 36 veckor efter andra dosen) och 52 veckor (eller 48 veckor efter andra dosen) samlas in. I första hand kommer cellulära svar att bedömas med hjälp av en ex-vivo interferon-y enzymkopplad immunospot-analys (ELISpot) för att räkna upp antigenspecifika T-celler. I korthet kommer PBMCs att isoleras från helblod genom densitetsgradientcentrifugering, omedelbart kryokonserveras i 90 % fetalt bovint serum och 10 % dimetylsulfoxid och överföras till flytande kväve för lagring.

IFN-y ELISPOT-analyser kommer att utföras med användning av kryokonserverad PBMC. Kortfattat kommer ofraktionerade PBMC att tinas, återsuspenderas i en koncentration av 1 × 106 celler/ml i DMEM-medium och kommer att strökas ut med 100 μl/brunn (1 × 105 celler/brunn) i 96-brunnars, nitrocellulosaunderlagda plattor ( Millipore Corp, Bedford, MA) tidigare belagd med en PBS-lösning av anti-IFN-γ monoklonal antikropp (1-D1K, 5 μg/ml; Mabtech Technologies, Nacka, Sverige). Tillsammans med negativ kontroll som kommer olika cellstimuli (PMA; fytohemagglutinin 1 μg/ml och Ionomycin) att användas i som positiva kontroller., Plattorna kommer sedan att inkuberas vid 37°C i 40 timmar och sedan skördas och läsas av i ELISPOT-läsaren. Ett vaccininducerat svar kommer att definieras som en ≥3-faldig ökning jämfört med baslinjesvaret på den individuella epitoppeptiden.

T-cellers funktion:

Blodproverna vid baslinjen (före första dosen), dag 28 (4 veckor/28 dagar efter första dosen och strax före andra dosen), 8 veckor (eller 4 veckor efter andra dosen), 16 veckor (eller 12 veckor efter andra dosen) , 28 veckor (eller 24 veckor efter andra dosen), 40 veckor (eller 36 veckor efter andra dosen) och 52 veckor (eller 48 veckor efter andra dosen) Immunsvarsmätningar kommer att bedömas med användning av mononukleära celler från perifert blod (PBMC) tidpunkter.

För att undersöka CD4- och CD8-T-cellsfunktionaliteten kommer PBMC:er att odlas i 96-brunnars platta i RPMI-media innehållande 10% FBS, med eller utan PMA / Ionomycin (positiv kontroll) (PMA 2 ng/mL; jonomycin 1 μg/mL; Merck, Darmstadt, Tyskland) och 10 µg/ml LPS (Merck, Darmstadt, Tyskland) vid 37°C, 5 % CO2 under 6-7 timmar. Efter 1 timmes inkubation tillsätts 1 μg/mL brefeldin A (BD Pharmingen, USA) till alla brunnarna. Efter inkubation kommer cellerna att ytfärgas i 25-30 minuter med anti-CD3FITC, anti-CD8BV421 och anti-CD4 PE/cyanin5.5 (Cy5) följt av 10 minuters permeabilisering med 100 µL permeabiliserande lösning (BD Biosciences, USA) och kommer att tvättas två gånger med 500 µL 1x cytoperm. Efter tvättning kommer cellerna att färgas för intracellulärt uttryck av IL-2, IFN-y och IL-17 med anti-IL2 APC, anti-IFN-y PE, anti-IL-17 PE-Cy7 (BD Biosciences och Pharmingen, USA ) och kommer att inkuberas i 25-30 minuter följt av tvättning med PBS och fixering av cellerna i 0,1 % PFA innan de förvärvas på en BD Verse-flödescytometer. Data kommer att analyseras med FlowJo programvara version 10.

Byte av monocyt fenotyp och funktionalitet:

Blodproverna vid baslinjen (före första dosen), dag 28 (4 veckor/28 dagar efter första dosen och strax före andra dosen), 8 veckor (eller 4 veckor efter andra dosen), 16 veckor (eller 12 veckor efter andra dosen) , 28 veckor (eller 24 veckor efter andra dosen), 40 veckor (eller 36 veckor efter andra dosen) och 52 veckor (eller 48 veckor efter andra dosen) Vaccin kommer att inducera en ökning av proinflammatorisk cytokinproduktion, vilket är beroende av tränad immunitet i medfödda immunceller. Vi kommer att karakterisera fenotypen och funktionaliteten hos monocyter före vaccination och efter vaccination med hjälp av flödescytometrisk analys.

De som är helt immuniserade och fortfarande utvecklar klinisk Covid 19-infektion kommer att grupperas och immunologisk profil kommer att studeras.