Personlig risiko for hurtigt progressiv aterosklerose (RPA)

Studiedesign: åben kontinuerlig retrospektiv og prospektiv undersøgelse ved parallelgruppemetode.

Tre kontrolpunkter blev defineret i afhandlingsarbejdet: det første punkt var retrospektivt, 2 år før undersøgelsen; den anden var dagen for optagelse i undersøgelsen; og den tredje var 12 måneder efter inklusion.

Det retrospektive punkt dækkede 2 år fra datoen for patientens optagelse i undersøgelsen (perioden fra januar 2019 til januar 2021) med bestemmelse af et stort spektrum af parametre af klinisk, instrumentel, laboratoriemæssig karakter, der potentielt kunne påvirke forekomsten og progressionen af ​​åreforkalkning (iht. litteraturanalysen). De nævnte undersøgelser blev udført og evalueret på to punkter: det første - på tidspunktet for den første forudgående koronarhændelse i den toårige retrospektive periode, det andet - på tidspunktet for patientens inklusion i nærværende undersøgelse. 202 patienter blev opdelt i to grupper.

Undersøgelsesmetoder. På tidspunktet for inklusion (1 point) i undersøgelsen gennemgik alle patienter generel klinisk undersøgelse med vurdering af klager og klinisk status, laboratorieundersøgelse med generelle og biokemiske blodprøver, herunder særlig biokemisk undersøgelse af blodserum for at bestemme niveauet af højsensitivitet C-reaktivt protein (CRP, mg/L) og lipidspektrum, inklusive total kolesterol (GC, mmol/L), low-density lipoproteiner (LDL, mmol/L), high-density lipoproteiner (HDL, mmol/L), triglycerider (TG, mmol/L); urinanalyse og instrumentelle undersøgelser: elektrokardiografi (EKG), ekkokardiografi (Echo-CG), R-grafi af brystorganer, selektiv koronar angiografi Ud over standard forskningsmetoder vil alle patienter blive bestemt molekylærgenetiske parametre. Standardundersøgelsesmetoder vil blive gentaget efter et år (2 point).

Fremstilling af DNA præparater. DNA-ekstraktion fra blod blev udført ved phenol-chloroform-ekstraktion. Fem til seks volumener af buffer A (10 mM Tris-HCl, pH=7,5; 10 mM NaCI; 3 mM MgCl2) blev tilsat til 1 volumen blodprøve, og koagler blev gnidet i en homogenisator. Efter centrifugering ved 2500 g i 15 minutter blev præcipitaterne vasket tre gange med buffer A og resuspenderet i 1 ml buffer B (10 mM EDTA; 100 mM NaCI; 50 mM Tris-HCl, pH=8,5). Efter tilsætning af SDS til 0,5% og proteinase E til 200 μg/mL blev blandingen inkuberet i 12 timer ved 56°C. Deproteinisering blev udført sekventielt med phenol-chloroform-blanding (1:1), vandmættet phenol, phenol-chloroform-blanding (1:1) og chloroform. DNA blev præcipiteret ved tilsætning af NaCl-opløsning til 1 M og 1 V isopropylalkohol. Derefter blev opløsningen afkølet i 1 time ved -20 °C. Bundfaldet opnået ved centrifugering på en Eppendorf-mikrocentrifuge ved 12000 g i 15 minutter blev vasket tre gange med 75 % ethanol efterfulgt af centrifugering i 5 minutter. 12000g og, efter tørring ved 56 °C, opløst i deinaniliseret vand til en DNA-koncentration på 0,5 µg/μl. Genotypning af polymorfismer blev udført ved anvendelse af real-time PCR i henhold til producentens protokol (TaqMan-prober, Thermo Fisher Scientific, USA) d. et StepOnePlus-instrument. De blev udvalgt i henhold til resultaterne af internationale fuld-genom-dækkende associationsstudier (GWAS), som bekræftede associeringen af ​​disse SNP'er med koronar hjertesygdom (CHD), en inflammatorisk proces, der spiller en væsentlig rolle i progressionen af ​​åreforkalkning.

Metoder til statistisk analyse. SPSS 22.0 softwarepakke vil blive brugt til statistisk analyse af molekylærgenetiske data. Det første trin vil være at bestemme frekvenserne af genotyper og alleler af de undersøgte SNP'er i gruppen af ​​myokardieinfarktpatienter med forhøjede værdier af kardiospecifikke markører og sammenligningsgruppen, hvor kardiospecifikke markører vil være inden for normale grænser; derefter vil vi vurdere overensstemmelse af genotype frekvenser med Hardy-Weinberg ligevægt i kontrolgruppen (ved hjælp af chi-kvadrat-kriteriet). Der vil være en sammenligning af niveauerne af indikatorer såsom alder; kre-atinin niveau; diagnostisk niveau af biomarkører for myokardienekrose: MB kreatinkinase og troponin, fedtsyrebindende protein (FABP); BMI; taljemål; serum C-peptidkoncentration; glykæminiveauer ved indlæggelse og udskrivelse; blodhæmoglobinniveauer ved indlæggelse og udskrivelse; Systolisk og diastolisk blodtryk ved indlæggelse; puls ved indlæggelse; venstre ventrikulær ejektionsfraktionsværdi ved ekkokardiografi; serum HCMP koncentration; lipidogram: serumkoncentration af low-density lipoproteiner (LDL), high-density lipoproteins (HDL), total cholesterol, triglycerider; højde, vægt, kropsmasseindeks, i bærere af forskellige genotyper blev udført efter kontrol af normaliteten af ​​fordelingen af ​​disse træk ved Kolmogorov-Smirnov test. Hvis egenskaberne ville opfylde kriterierne for normalfordeling, ville en enkelt-faktor variansanalyse blive brugt. Betydningen af ​​forskelle mellem to genotypiske klasser vil desuden blive kontrolleret ved hjælp af t-test for to uafhængige prøver. Hvis en egenskab, der undersøges, ikke opfylder kriterierne for normalfordeling, vil sammenligning af niveauet af denne egenskab hos bærere af forskellige genotyper blive udført ved brug af Kruskal-Wallis-testen; pålideligheden af ​​forskelle mellem de to genotypiske klasser vil desuden blive kontrolleret ved hjælp af Mann-Whitney-testen for to uafhængige prøver. Sammenhængen af ​​SNP'er med risikofaktorer relateret til kategoriske variabler vil blive testet med konjugationstabeller ved hjælp af Pearson chi-square test. I tilfælde af firefeltstabeller vil sammenligning af prøver efter genotype og allelfrekvenser bruge Fishers nøjagtige tosidede kriterium. Den relative risiko (OR - odds ratio) for sygdomsudfald/risikofaktor tilstedeværelse for en bestemt allel eller genotype vil blive beregnet som odds ratio.

Indflydelse af kliniske, demografiske, funktionelle, metaboliske, inflammatoriske parametre og myokardienekrosemarkører på langtidsprognose vil blive vurderet ved oddsratio (0,95 konfidensinterval).