Personlig risiko for raskt progressiv aterosklerose (RPA)

Studiedesign: åpen kontinuerlig retrospektiv og prospektiv studie ved parallellgruppemetode.

Tre kontrollpunkter ble definert i avhandlingsarbeidet: det første punktet var retrospektivt, 2 år før studien; den andre var dagen for inkludering i studien; og den tredje var 12 måneder etter inkludering.

Det retrospektive punktet dekket 2 år fra datoen for pasientens inkludering i studien (perioden fra januar 2019 til januar 2021) med bestemmelse av et stort spekter av parametere av klinisk, instrumentell, laboratoriemessig karakter som potensielt kan påvirke utseendet og progresjonen av aterosklerose (iht. litteraturanalysen). De nevnte undersøkelsene ble utført og evaluert på to punkter: den første - på tidspunktet for den første foregående koronarhendelsen i løpet av den toårige retrospektive perioden, den andre - på tidspunktet for pasientens inkludering i denne studien. 202 pasienter ble delt inn i to grupper.

Studiemetoder. Ved inkluderingsøyeblikket (1 poeng) i studien gjennomgikk alle pasienter generell klinisk undersøkelse med vurdering av plager og klinisk status, laboratorieundersøkelse med generelle og biokjemiske blodprøver, inkludert spesiell biokjemisk undersøkelse av blodserum for å bestemme nivået av høysensitivitet C-reaktivt protein (CRP, mg/L) og lipidspekter, inkludert totalkolesterol (GC, mmol/L), lipoproteiner med lav tetthet (LDL, mmol/L), lipoproteiner med høy tetthet (HDL, mmol/L), triglyserider (TG, mmol/L); urinanalyse og instrumentelle undersøkelser: elektrokardiografi (EKG), ekkokardiografi (Echo-CG), R-grafi av brystorganer, selektiv koronar angiografi I tillegg til standard forskningsmetoder vil alle pasienter bli bestemt molekylærgenetiske parametere. Standard undersøkelsesmetoder vil bli gjentatt etter ett år (2 poeng).

Utarbeidelse av DNA-preparater. DNA-ekstraksjon fra blod ble utført ved fenol-kloroform-ekstraksjon. Fem til seks volumer av buffer A (10 mM Tris-HCl, pH=7,5; 10 mM NaCl; 3 mM MgCl2) ble tilsatt til 1 volum blodprøve og koagler ble gnidd i en homogenisator. Etter sentrifugering ved 2500 g i 15 minutter ble utfellingene vasket tre ganger med buffer A og resuspendert i 1 ml buffer B (10 mM EDTA; 100 mM NaCl; 50 mM Tris-HCl, pH=8,5). Etter tilsetning av SDS til 0,5 % og proteinase E til 200 μg/ml, ble blandingen inkubert i 12 timer ved 56°C. Deproteinisering ble utført sekvensielt med fenol-kloroformblanding (1:1), vannmettet fenol, fenol-kloroformblanding (1:1) og kloroform. DNA ble utfelt ved å tilsette NaCl-løsning til 1 M og 1 V isopropylalkohol. Deretter ble løsningen avkjølt i 1 time ved -20 °C. Bunnfallet oppnådd ved sentrifugering på en Eppendorf mikrosentrifuge ved 12000 g i 15 minutter ble vasket tre ganger med 75 % etanol etterfulgt av sentrifugering i 5 minutter. 12000g og, etter tørking ved 56 °C, oppløst i deinanilisert vann til en DNA-konsentrasjon på 0,5 µg/μl. Genotyping av polymorfismer ble utført ved bruk av sanntids PCR i henhold til produsentens protokoll (TaqMan-prober, Thermo Fisher Scientific, USA) på et StepOnePlus-instrument. De ble valgt i henhold til resultatene fra internasjonale full-genom-wide assosiasjonsstudier (GWAS), som bekreftet assosiasjonen av disse SNP-ene med koronar hjertesykdom (CHD), en inflammatorisk prosess som spiller en betydelig rolle i progresjonen av aterosklerose.

Metoder for statistisk analyse. SPSS 22.0 programvarepakke vil bli brukt til statistisk analyse av molekylærgenetiske data. Det første trinnet vil være å bestemme frekvensene av genotyper og alleler av de studerte SNP-ene i gruppen hjerteinfarktpasienter med forhøyede verdier av kardiospesifikke markører og sammenligningsgruppen, hvor kardiospesifikke markører vil være innenfor normale grenser; så vil vi vurdere samsvar med genotypefrekvenser med Hardy-Weinberg-likevekt i kontrollgruppen (ved å bruke kjikvadratkriteriet). Det vil være en sammenligning av nivåene av indikatorer som alder; kre-atinin nivå; diagnostisk nivå av biomarkører for myokardiell nekrose: MB kreatinkinase og troponin, fettsyrebindende protein (FABP); kroppsmasseindeks; Midjeomkrets; serum C-peptidkonsentrasjon; glykeminivåer ved innleggelse og utskrivning; hemoglobinnivåer i blodet ved innleggelse og utskrivning; systolisk og diastolisk blodtrykk ved innleggelse; hjertefrekvens ved innleggelse; venstre ventrikkel ejeksjonsfraksjon verdi ved ekkokardiografi; serum HCMP konsentrasjon; lipidogram: serumkonsentrasjon av lipoproteiner med lav tetthet (LDL), lipoproteiner med høy tetthet (HDL), totalt kolesterol, triglyserider; høyde, vekt, kroppsmasseindeks, i bærere av forskjellige genotyper ble utført etter å ha kontrollert normaliteten av distribusjon av disse funksjonene ved Kolmogorov-Smirnov-testen. Hvis egenskapene ville oppfylle kriteriene for normalfordeling, ville en enkeltfaktor variansanalyse bli brukt. Betydningen av forskjeller mellom to genotypiske klasser vil i tillegg bli kontrollert ved hjelp av t-test for to uavhengige prøver. Hvis en egenskap som studeres ikke oppfyller kriteriene for normalfordeling, vil sammenligning av nivået av denne egenskapen hos bærere av forskjellige genotyper bli utført ved bruk av Kruskal-Wallis-testen; påliteligheten til forskjellene mellom de to genotypiske klassene vil i tillegg bli kontrollert ved hjelp av Mann-Whitney-testen for to uavhengige prøver. Assosiasjonen av SNP-er med risikofaktorer relatert til kategoriske variabler vil bli testet med konjugasjonstabeller ved bruk av Pearson chi-square test. Når det gjelder firefeltstabeller, vil sammenligning av prøver etter genotype og allelfrekvenser bruke Fishers eksakte tosidige kriterium. Den relative risikoen (OR - odds ratio) for sykdomsutfall/risikofaktor tilstedeværelse for en bestemt allel eller genotype vil bli beregnet som odds ratio.

Påvirkning av kliniske, demografiske, funksjonelle, metabolske, inflammatoriske parametere og myokardnekrosemarkører på langtidsprognose vil bli vurdert ved oddsratio (0,95 konfidensintervall).