Risco personalizado de aterosclerose rapidamente progressiva (RPA)

Desenho do estudo: estudo retrospectivo contínuo aberto e prospectivo pelo método de grupos paralelos.

Três pontos de controle foram definidos no trabalho de dissertação: o primeiro ponto foi retrospectivo, 2 anos antes do estudo; a segunda era o dia da inclusão no estudo; e a terceira foi 12 meses após a inclusão.

O ponto retrospectivo abrangeu 2 anos a partir da data de inclusão do paciente no estudo (período de janeiro de 2019 a janeiro de 2021) com determinação de um amplo espectro de parâmetros de natureza clínica, instrumental e laboratorial potencialmente influenciando o aparecimento e progressão da aterosclerose (segundo a análise da literatura). Os referidos exames foram realizados e avaliados em dois momentos: o primeiro - no momento do primeiro evento coronariano precedente durante o período retrospectivo de dois anos, o segundo - no momento da inclusão do paciente no presente estudo. 202 pacientes foram divididos em dois grupos.

Métodos de estudo. No momento da inclusão (1 ponto) no estudo todos os pacientes foram submetidos a exame clínico geral com avaliação de queixas e estado clínico, exame laboratorial com exames gerais e bioquímicos de sangue, incluindo exame bioquímico especial de soro sanguíneo para determinar o nível de alta sensibilidade Proteína C reativa (PCR, mg/L) e espectro lipídico, incluindo colesterol total (GC, mmol/L), lipoproteínas de baixa densidade (LDL, mmol/L), lipoproteínas de alta densidade (HDL, mmol/L), triglicerídeos (TG, mmol/L); urinálise e exames instrumentais: eletrocardiografia (ECG), ecocardiografia (Echo-CG), R-grafia de órgãos torácicos, angiografia coronária seletiva Além dos métodos de pesquisa padrão, todos os pacientes serão determinados parâmetros genéticos moleculares. Os métodos padrão de investigação serão repetidos após um ano (2 pontos).

Preparação de preparações de ADN. A extração de DNA do sangue foi realizada por extração com fenol-clorofórmio. Cinco a seis volumes de tampão A (10 mM Tris-HCl, pH = 7,5; 10 mM NaCl; 3 mM MgCl2) foram adicionados a 1 volume de amostra de sangue e os coágulos foram esfregados em um homogeneizador. Após centrifugação a 2500 g durante 15 min, os precipitados foram lavados três vezes com tampão A e ressuspensos em 1 ml de tampão B (10 mM EDTA; 100 mM NaCl; 50 mM Tris-HCl, pH = 8,5). Após adicionar SDS a 0,5% e proteinase E a 200 μg/mL, a mistura foi incubada por 12 horas a 56°C. A desproteinização foi realizada sequencialmente com mistura de fenol-clorofórmio (1:1), fenol saturado com água, mistura de fenol-clorofórmio (1:1) e clorofórmio. O DNA foi precipitado pela adição de solução de NaCl a 1 M e 1 V de álcool isopropílico. Depois disso, a solução foi resfriada por 1 hora a -20 °C. O precipitado obtido por centrifugação em microcentrífuga Eppendorf a 12.000g por 15 min foi lavado três vezes com etanol 75% seguido de centrifugação por 5 min. 12000g e, após secagem a 56 °C, dissolvido em água desinanilizada até uma concentração de DNA de 0,5 µg/μl. um instrumento StepOnePlus. Eles foram selecionados de acordo com os resultados de estudos internacionais de associação ampla do genoma (GWAS), que confirmaram a associação desses SNPs com doença coronariana (DAC), um processo inflamatório que desempenha um papel significativo na progressão da aterosclerose.

Métodos de análise estatística. O pacote de software SPSS 22.0 será utilizado para análise estatística dos dados moleculares-genéticos. A primeira etapa será determinar as frequências dos genótipos e alelos dos SNPs estudados no grupo de pacientes com infarto do miocárdio com valores elevados de marcadores cardioespecíficos e no grupo de comparação, onde os marcadores cardioespecíficos estarão dentro dos limites da normalidade; em seguida, avaliaremos a conformidade das frequências genotípicas com o equilíbrio de Hardy-Weinberg no grupo controle (usando o critério do qui-quadrado). Haverá uma comparação dos níveis de indicadores como idade; nível de creatinina; nível diagnóstico de biomarcadores de necrose miocárdica: MB creatina quinase e troponina, proteína de ligação a ácidos graxos (FABP); índice de massa corporal; circunferência da cintura; concentração sérica de peptídeo C; níveis de glicemia na admissão e na alta; níveis de hemoglobina sanguínea na admissão e na alta; Pressão arterial sistólica e diastólica na admissão; frequência cardíaca na admissão; valor da fração de ejeção do ventrículo esquerdo pela ecocardiografia; concentração sérica de HCMP; lipidograma: concentração sérica de lipoproteínas de baixa densidade (LDL), lipoproteínas de alta densidade (HDL), colesterol total, triglicérides; altura, peso, índice de massa corporal, em portadores de diferentes genótipos, após verificação da normalidade da distribuição dessas características pelo teste de Kolmogorov-Smirnov. Se as características atendessem aos critérios de distribuição normal, uma análise de variância de fator único seria usada. A significância das diferenças entre duas classes genotípicas será adicionalmente verificada por meio do teste t para duas amostras independentes. Se uma característica em estudo não atender aos critérios de distribuição normal, a comparação do nível dessa característica em portadores de diferentes genótipos será realizada por meio do teste de Kruskal-Wallis; a confiabilidade das diferenças entre as duas classes genotípicas será adicionalmente verificada por meio do teste de Mann-Whitney para duas amostras independentes. A associação de SNPs com fatores de risco relacionados a variáveis ​​categóricas será testada com tabelas de conjugação usando o teste qui-quadrado de Pearson. No caso de tabelas de quatro campos, a comparação de amostras por genótipo e frequências alélicas usará o critério bilateral exato de Fisher. O risco relativo (OR - odds ratio) do desfecho da doença/presença de fator de risco para um determinado alelo ou genótipo será calculado como odds ratio.

A influência de parâmetros clínicos, demográficos, funcionais, metabólicos, inflamatórios e marcadores de necrose miocárdica no prognóstico a longo prazo será avaliada por odds ratio (intervalo de confiança de 0,95).