Personlig risk för snabbt progressiv ateroskleros (RPA)

Studiedesign: öppen kontinuerlig retrospektiv och prospektiv studie med parallell gruppmetod.

Tre kontrollpunkter definierades i avhandlingsarbetet: den första punkten var retrospektiv, 2 år före studien; den andra var dagen för inkludering i studien; och den tredje var 12 månader efter inkluderingen.

Den retrospektiva punkten omfattade 2 år från det datum då patienten inkluderades i studien (perioden från januari 2019 till januari 2021) med bestämning av ett stort spektrum av parametrar av klinisk, instrumentell, laboratorietyp som potentiellt kan påverka uppkomsten och progressionen av åderförkalkning (enligt åderförkalkning) litteraturanalysen). De nämnda undersökningarna utfördes och utvärderades vid två punkter: den första - vid tidpunkten för den första föregående kranskärlshändelsen under den tvååriga retrospektiva perioden, den andra - vid tidpunkten för patientens inkludering i föreliggande studie. 202 patienter delades in i två grupper.

Studiemetoder. Vid inklusionsögonblicket (1 poäng) i studien genomgick alla patienter allmän klinisk undersökning med bedömning av besvär och klinisk status, laboratorieundersökning med allmänna och biokemiska blodprov, inklusive speciell biokemisk undersökning av blodserum för att fastställa nivån av högkänslighet C-reaktivt protein (CRP, mg/L) och lipidspektrum, inklusive totalkolesterol (GC, mmol/L), lågdensitetslipoproteiner (LDL, mmol/L), högdensitetslipoproteiner (HDL, mmol/L), triglycerider (TG, mmol/L); urinanalys och instrumentella undersökningar: elektrokardiografi (EKG), ekokardiografi (Echo-CG), R-grafi av bröstorgan, selektiv kranskärlsangiografi Förutom standardforskningsmetoder kommer alla patienter att bestämmas molekylärgenetiska parametrar. Standardmetoder för undersökning kommer att upprepas efter ett år (2 poäng).

Framställning av DNA-preparat. DNA-extraktion från blod utfördes genom fenol-kloroformextraktion. Fem till sex volymer buffert A (10 mM Tris-HCl, pH=7,5; 10 mM NaCl; 3 mM MgCl2) sattes till 1 volym blodprov och koagel gnuggades in i en homogenisator. Efter centrifugering vid 2500 g under 15 minuter tvättades fällningarna tre gånger med buffert A och återsuspenderades i 1 ml buffert B (10 mM EDTA; 100 mM NaCl; 50 mM Tris-HCl, pH=8,5). Efter tillsats av SDS till 0,5 % och proteinas E till 200 μg/ml, inkuberades blandningen i 12 timmar vid 56°C. Avproteinisering utfördes sekventiellt med fenol-kloroformblandning (1:1), vattenmättad fenol, fenol-kloroformblandning (1:1) och kloroform. DNA fälldes ut genom tillsats av NaCl-lösning till 1 M och 1 V isopropylalkohol. Därefter kyldes lösningen under 1 timme vid -20°C. Fällningen som erhölls genom centrifugering på en Eppendorf-mikrocentrifug vid 12000 g under 15 minuter tvättades tre gånger med 75 % etanol följt av centrifugering under 5 minuter. 12000g och, efter torkning vid 56 °C, löst i avinaniserat vatten till en DNA-koncentration av 0,5 µg/μl. Genotypning av polymorfismer utfördes med realtids-PCR enligt tillverkarens protokoll (TaqMan-sonder, Thermo Fisher Scientific, USA) den ett StepOnePlus-instrument. De valdes ut enligt resultaten av internationella fullgenomomfattande associationsstudier (GWAS), som bekräftade associeringen av dessa SNP med kranskärlssjukdom (CHD), en inflammatorisk process som spelar en betydande roll i utvecklingen av ateroskleros.

Metoder för statistisk analys. SPSS 22.0 mjukvarupaket kommer att användas för statistisk analys av molekylärgenetisk data. Det första steget kommer att vara att bestämma frekvensen av genotyper och alleler för de studerade SNP:erna i gruppen hjärtinfarktpatienter med förhöjda värden av kardiospecifika markörer och jämförelsegruppen, där kardiospecifika markörer kommer att ligga inom normala gränser; sedan kommer vi att bedöma överensstämmelse av genotypfrekvenser med Hardy-Weinberg-jämvikt i kontrollgruppen (med hjälp av chi-kvadratkriteriet). Det kommer att göras en jämförelse av nivåerna på indikatorer som ålder; kre-atinin nivå; diagnostisk nivå av biomarkörer för myokardiell nekros: MB-kreatinkinas och troponin, fettsyrabindande protein (FABP); Body mass Index; midjemått; serum C-peptidkoncentration; glykeminivåer vid intagning och utskrivning; blodhemoglobinnivåer vid intagning och utskrivning; systoliskt och diastoliskt blodtryck vid intagning; hjärtfrekvens vid antagning; vänster ventrikulär ejektionsfraktion värde genom ekokardiografi; serum-HCMP-koncentration; lipidogram: serumkoncentration av lågdensitetslipoproteiner (LDL), högdensitetslipoproteiner (HDL), totalt kolesterol, triglycerider; längd, vikt, kroppsmassaindex, i bärare av olika genotyper utfördes efter kontroll av normaliteten i distributionen av dessa egenskaper genom Kolmogorov-Smirnov-test. Om egenskaperna skulle uppfylla kriterierna för normalfördelning skulle en enfaktorsanalys av varians användas. Betydelsen av skillnader mellan två genotypklasser kommer dessutom att kontrolleras med t-test för två oberoende prover. Om en egenskap som studeras inte uppfyller kriterierna för normalfördelning, kommer en jämförelse av nivån av denna egenskap hos bärare av olika genotyper att utföras med hjälp av Kruskal-Wallis-testet; tillförlitligheten av skillnader mellan de två genotypklasserna kommer att kontrolleras ytterligare med Mann-Whitney-testet för två oberoende prover. Sambandet av SNP med riskfaktorer relaterade till kategoriska variabler kommer att testas med konjugationstabeller med Pearson chi-kvadrattest. När det gäller tabeller med fyra fält, kommer jämförelse av prover efter genotyp och allelfrekvens att använda Fishers exakta tvåsidiga kriterium. Den relativa risken (OR - oddskvot) för närvaro av sjukdomsutfall/riskfaktor för en viss allel eller genotyp kommer att beräknas som oddskvot.

Inverkan av kliniska, demografiska, funktionella, metabola, inflammatoriska parametrar och myokardnekrosmarkörer på långtidsprognoser kommer att bedömas med oddskvot (0,95 konfidensintervall).