Persoonlijk risico op snel voortschrijdende atherosclerose (RPA)

Studieopzet: open continue retrospectieve en prospectieve studie volgens de methode van parallelle groepen.

In het proefschrift werden drie controlepunten gedefinieerd: het eerste punt was retrospectief, 2 jaar vóór het onderzoek; de tweede was de dag van opname in het onderzoek; en de derde was 12 maanden na opname.

Het retrospectieve punt besloeg 2 jaar vanaf de datum van opname van de patiënt in de studie (periode van januari 2019 tot januari 2021) met bepaling van een groot spectrum van parameters van klinische, instrumentele, laboratoriumaard die mogelijk het optreden en de progressie van atherosclerose beïnvloeden (volgens de literatuuranalyse). De genoemde onderzoeken werden op twee punten uitgevoerd en geëvalueerd: de eerste - op het moment van de eerste voorafgaande coronaire gebeurtenis tijdens de retrospectieve periode van twee jaar, de tweede - op het moment van opname van de patiënt in de huidige studie. 202 patiënten werden in twee groepen verdeeld.

Studie Methoden. Op het moment van opname (1 punt) in de studie ondergingen alle patiënten een algemeen klinisch onderzoek met beoordeling van klachten en klinische status, laboratoriumonderzoek met algemeen en biochemisch bloedonderzoek, inclusief speciaal biochemisch onderzoek van bloedserum om het niveau van hooggevoeligheid te bepalen C-reactief proteïne (CRP, mg/L) en lipidenspectrum, inclusief totaal cholesterol (GC, mmol/L), lipoproteïnen met lage dichtheid (LDL, mmol/L), lipoproteïnen met hoge dichtheid (HDL, mmol/L), triglyceriden (TG, mmol/L); urineonderzoek en instrumenteel onderzoek: elektrocardiografie (ECG), echocardiografie (Echo-CG), R-grafie van borstorganen, selectieve coronaire angiografie Naast standaard onderzoeksmethoden zullen bij alle patiënten moleculair genetische parameters bepaald worden. Standaard onderzoeksmethoden worden na een jaar herhaald (2 punten).

Bereiding van DNA-preparaten. DNA-extractie uit bloed werd uitgevoerd door extractie met fenol-chloroform. Vijf tot zes volumes buffer A (10 mM Tris-HCl, pH=7,5; 10 mM NaCl; 3 mM MgCl2) werden toegevoegd aan 1 volume bloedmonster en stolsels werden gewreven in een homogenisator. Na 15 minuten centrifugeren bij 2500 g werden de neerslagen driemaal gewassen met buffer A en opnieuw gesuspendeerd in 1 ml buffer B (10 mM EDTA; 100 mM NaCl; 50 mM Tris-HCl, pH=8,5). Na toevoeging van SDS tot 0,5% en proteïnase E tot 200 ug/ml, werd het mengsel gedurende 12 uur bij 56°C geïncubeerd. Deproteïnisering werd achtereenvolgens uitgevoerd met fenol-chloroformmengsel (1:1), met water verzadigd fenol, fenol-chloroformmengsel (1:1) en chloroform. DNA werd geprecipiteerd door NaCl-oplossing toe te voegen aan 1 M en 1 V isopropylalcohol. Daarna werd de oplossing 1 uur gekoeld bij -20°C. Het neerslag verkregen door centrifugatie op een Eppendorf microcentrifuge bij 12.000 g gedurende 15 minuten werd driemaal gewassen met 75% ethanol, gevolgd door centrifugatie gedurende 5 minuten. 12000 g en, na drogen bij 56 °C, opgelost in gedeïoniseerd water tot een DNA-concentratie van 0,5 µg/μl. Genotypering van polymorfismen werd uitgevoerd met behulp van real-time PCR volgens het protocol van de fabrikant (TaqMan-sondes, Thermo Fisher Scientific, VS) op een StepOnePlus-instrument. Ze werden geselecteerd op basis van de resultaten van internationale volledige genoombrede associatiestudies (GWAS), die de associatie van deze SNP's met coronaire hartziekte (CHZ) bevestigden, een ontstekingsproces dat een belangrijke rol speelt in de progressie van atherosclerose.

Methoden voor statistische analyse. Het softwarepakket SPSS 22.0 zal worden gebruikt voor statistische analyse van moleculair-genetische gegevens. De eerste fase zal zijn om de frequenties van genotypen en allelen van de bestudeerde SNP's te bepalen in de groep myocardinfarctpatiënten met verhoogde waarden van cardiospecifieke markers en de vergelijkingsgroep, waar cardiospecifieke markers binnen normale grenzen zullen zijn; daarna zullen we de conformiteit van genotypefrequenties met Hardy-Weinberg-evenwicht in de controlegroep beoordelen (met behulp van het chikwadraatcriterium). Er zal een vergelijking zijn van de niveaus van indicatoren zoals leeftijd; creatininegehalte; diagnostisch niveau van biomarkers van myocardiale necrose: MB creatinekinase en troponine, vetzuurbindend eiwit (FABP); lichaamsmassa-index; tailleomtrek; serum C-peptideconcentratie; glycemiewaarden bij opname en ontslag; hemoglobinegehalte in het bloed bij opname en ontslag; Systolische en diastolische bloeddruk bij opname; hartslag bij opname; linkerventrikelejectiefractiewaarde door echocardiografie; serum HCMP-concentratie; lipidogram: serumconcentratie van lipoproteïnen met lage dichtheid (LDL), lipoproteïnen met hoge dichtheid (HDL), totaal cholesterol, triglyceriden; lengte, gewicht, body mass index, bij dragers van verschillende genotypen werden uitgevoerd na controle van de normaliteit van de verdeling van deze kenmerken door middel van de Kolmogorov-Smirnov-test. Als de kenmerken zouden voldoen aan de criteria van normale verdeling, zou een single-factor variantieanalyse worden gebruikt. De significantie van verschillen tussen twee genotypische klassen zal bovendien worden gecontroleerd met behulp van een t-test voor twee onafhankelijke steekproeven. Als een bestudeerde eigenschap niet voldoet aan de criteria van normale verdeling, zal de vergelijking van het niveau van deze eigenschap bij dragers van verschillende genotypen worden uitgevoerd met behulp van de Kruskal-Wallis-test; de betrouwbaarheid van verschillen tussen de twee genotypische klassen zal bovendien worden gecontroleerd met behulp van de Mann-Whitney-test voor twee onafhankelijke monsters. De associatie van SNP's met risicofactoren gerelateerd aan categorische variabelen zal worden getest met conjugatietabellen met behulp van de Pearson chi-kwadraattoets. In het geval van tabellen met vier velden, zal de vergelijking van monsters op basis van genotype en allelfrequenties het exacte tweezijdige criterium van Fisher gebruiken. Het relatieve risico (OF - odds ratio) van ziekte-uitkomst/aanwezigheid van risicofactor voor een bepaald allel of genotype wordt berekend als odds ratio.

De invloed van klinische, demografische, functionele, metabolische, inflammatoire parameters en markers van myocardiale necrose op de langetermijnprognose zal worden beoordeeld aan de hand van een oddsratio (0,95 betrouwbaarheidsinterval).