Risque personnalisé d'athérosclérose rapidement progressive (RPA)

Conception de l'étude : étude ouverte continue rétrospective et prospective par la méthode des groupes parallèles.

Trois points de contrôle ont été définis dans le travail de thèse : le premier point était rétrospectif, 2 ans avant l'étude ; le second était le jour de l'inclusion dans l'étude ; et le troisième était de 12 mois après l'inclusion.

Le point rétrospectif couvrait 2 ans à compter de la date d'inclusion du patient dans l'étude (période de janvier 2019 à janvier 2021) avec détermination d'un large spectre de paramètres de nature clinique, instrumentale, biologique influençant potentiellement l'apparition et la progression de l'athérosclérose (selon l'analyse de la littérature). Les examens mentionnés ont été effectués et évalués à deux moments : le premier - au moment du premier événement coronarien précédent au cours de la période rétrospective de deux ans, le second - au moment de l'inclusion du patient dans la présente étude. 202 patients ont été divisés en deux groupes.

Méthodes d'étude. Au moment de l'inclusion (1 point) dans l'étude, tous les patients ont subi un examen clinique général avec évaluation des plaintes et de l'état clinique, un examen de laboratoire avec des tests sanguins généraux et biochimiques, y compris un examen biochimique spécial du sérum sanguin pour déterminer le niveau de haute sensibilité. Protéine C-réactive (CRP, mg/L) et spectre lipidique, y compris cholestérol total (GC, mmol/L), lipoprotéines de basse densité (LDL, mmol/L), lipoprotéines de haute densité (HDL, mmol/L), triglycérides (TG, mmol/L); analyses d'urine et examens instrumentaux: électrocardiographie (ECG), échocardiographie (Echo-CG), R-graphie des organes thoraciques, angiographie coronarienne sélective En plus des méthodes de recherche standard, tous les patients seront déterminés paramètres génétiques moléculaires. Les méthodes d'investigation standard seront répétées après un an (2 points).

Préparation de préparations d'ADN. L'extraction de l'ADN du sang a été réalisée par extraction au phénol-chloroforme. Cinq à six volumes de tampon A (Tris-HCl 10 mM, pH = 7,5 ; NaCl 10 mM ; MgCl2 3 mM) ont été ajoutés à 1 volume d'échantillon de sang et les caillots ont été frottés dans un homogénéisateur. Après centrifugation à 2500g pendant 15 min, les précipités ont été lavés trois fois avec du tampon A et remis en suspension dans 1 ml de tampon B (10 mM EDTA ; 100 mM NaCl ; 50 mM Tris-HCl, pH = 8,5). Après avoir ajouté du SDS à 0,5 % et de la protéinase E à 200 μg/mL, le mélange a été incubé pendant 12 heures à 56°C. La déprotéinisation a été effectuée séquentiellement avec un mélange phénol-chloroforme (1:1), du phénol saturé d'eau, un mélange phénol-chloroforme (1:1) et du chloroforme. L'ADN a été précipité en ajoutant une solution de NaCl à 1 M et 1 V d'alcool isopropylique. Après cela, la solution a été refroidie pendant 1 h à -20 °C. Le précipité obtenu par centrifugation sur une microcentrifugeuse Eppendorf à 12 000 g pendant 15 min a été lavé trois fois avec de l'éthanol à 75 % suivi d'une centrifugation pendant 5 min. 12000g et, après séchage à 56 °C, dissous dans de l'eau déminéralisée à une concentration d'ADN de 0,5 µg/μl. Le génotypage des polymorphismes a été réalisé par PCR en temps réel selon le protocole du fabricant (sondes TaqMan, Thermo Fisher Scientific, USA) sur un appareil StepOnePlus. Ils ont été sélectionnés en fonction des résultats d'études internationales d'association pangénomique complète (GWAS), qui ont confirmé l'association de ces SNP avec la maladie coronarienne (CHD), un processus inflammatoire qui joue un rôle important dans la progression de l'athérosclérose.

Méthodes d'analyse statistique. Le progiciel SPSS 22.0 sera utilisé pour l'analyse statistique des données de génétique moléculaire. La première étape consistera à déterminer les fréquences des génotypes et des allèles des SNP étudiés dans le groupe de patients infarctus du myocarde avec des valeurs élevées de marqueurs cardiospécifiques et le groupe de comparaison, où les marqueurs cardiospécifiques seront dans les limites normales ; puis nous évaluerons la conformité des fréquences génotypiques avec l'équilibre de Hardy-Weinberg dans le groupe témoin (en utilisant le critère du chi carré). Il y aura une comparaison des niveaux d'indicateurs tels que l'âge; niveau de créatinine ; niveau diagnostique des biomarqueurs de nécrose myocardique : MB créatine kinase et troponine, protéine de liaison aux acides gras (FABP) ; indice de masse corporelle; tour de taille; concentration sérique de peptide C ; taux de glycémie à l'admission et à la sortie ; taux d'hémoglobine sanguine à l'admission et à la sortie ; Pression artérielle systolique et diastolique à l'admission ; fréquence cardiaque à l'admission ; valeur de la fraction d'éjection ventriculaire gauche par échocardiographie ; concentration sérique d'HCMP ; lipidogramme : concentration sérique en lipoprotéines de basse densité (LDL), lipoprotéines de haute densité (HDL), cholestérol total, triglycérides ; taille, poids, indice de masse corporelle, chez des porteurs de différents génotypes ont été réalisées après vérification de la normalité de la distribution de ces caractéristiques par le test de Kolmogorov-Smirnov. Si les traits répondaient aux critères de distribution normale, une analyse de variance à un seul facteur serait utilisée. La signification des différences entre deux classes génotypiques sera également vérifiée à l'aide du test t pour deux échantillons indépendants. Si un caractère à l'étude ne répond pas aux critères de distribution normale, la comparaison du niveau de ce caractère chez les porteurs de différents génotypes sera effectuée à l'aide du test de Kruskal-Wallis ; la fiabilité des différences entre les deux classes génotypiques sera en outre vérifiée à l'aide du test de Mann-Whitney pour deux échantillons indépendants. L'association des SNP avec des facteurs de risque liés à des variables catégorielles sera testée avec des tables de conjugaison à l'aide du test du chi carré de Pearson. Dans le cas de tableaux à quatre champs, la comparaison des échantillons par génotype et fréquences alléliques utilisera le critère bilatéral exact de Fisher. Le risque relatif (OR - rapport de cotes) de la présence d'un résultat de la maladie/facteur de risque pour un allèle ou un génotype particulier sera calculé sous forme de rapport de cotes.

L'influence des paramètres cliniques, démographiques, fonctionnels, métaboliques, inflammatoires et des marqueurs de nécrose myocardique sur le pronostic à long terme sera évaluée par un rapport de cotes (intervalle de confiance de 0,95).