Henkilökohtainen nopeasti etenevän ateroskleroosin riski (RPA)

Tutkimussuunnittelu: avoin jatkuva retrospektiivinen ja prospektiivinen tutkimus rinnakkaisryhmämenetelmällä.

Väitöstyössä määriteltiin kolme kontrollipistettä: ensimmäinen piste oli retrospektiivinen, 2 vuotta ennen tutkimusta; toinen oli tutkimukseen sisällyttämisen päivä; ja kolmas oli 12 kuukautta sisällyttämisen jälkeen.

Retrospektiivinen piste kattoi 2 vuotta siitä päivästä, jolloin potilas otettiin mukaan tutkimukseen (ajanjakso tammikuusta 2019 tammikuuhun 2021), jolloin määritettiin laaja kirjo kliinisiä, instrumentaalisia ja laboratorioluonteisia parametreja, jotka mahdollisesti vaikuttavat ateroskleroosin ilmenemiseen ja etenemiseen (esim. kirjallisuusanalyysi). Mainitut tutkimukset suoritettiin ja arvioitiin kahdessa kohdassa: ensimmäinen - ensimmäisen edeltävän sepelvaltimotapahtuman aikaan kahden vuoden retrospektiivisen ajanjakson aikana, toinen - kun potilas sisällytettiin tähän tutkimukseen. 202 potilasta jaettiin kahteen ryhmään.

Tutkimusmenetelmät. Tutkimukseen sisällyttämishetkellä (1 piste) kaikille potilaille tehtiin yleinen kliininen tutkimus valitusten ja kliinisen tilan arvioimiseksi, laboratoriotutkimus yleisillä ja biokemiallisilla verikokeilla, mukaan lukien veren seerumin erityinen biokemiallinen tutkimus korkean herkkyyden tason määrittämiseksi C-reaktiivinen proteiini (CRP, mg/L) ja lipidispektri, mukaan lukien kokonaiskolesteroli (GC, mmol/L), matalatiheyksiset lipoproteiinit (LDL, mmol/L), korkeatiheyksiset lipoproteiinit (HDL, mmol/L), triglyseridit (TG, mmol/l); virtsa- ja instrumentaalitutkimukset: elektrokardiografia (EKG), kaikukardiografia (Echo-CG), rintaelinten R-grafia, selektiivinen sepelvaltimon angiografia Vakiotutkimusmenetelmien lisäksi kaikille potilaille määritetään molekyyligeneettiset parametrit. Vakiotutkintamenetelmät toistetaan vuoden kuluttua (2 pistettä).

DNA-valmisteiden valmistus. DNA-uutto verestä suoritettiin fenoli-kloroformiuutolla. Viidestä kuuteen tilavuutta puskuria A (10 mM Tris-HCl, pH = 7,5; 10 mM NaCl; 3 mM MgCl2) lisättiin 1 tilavuuteen verinäytettä ja hyytymiä hierottiin homogenisaattorissa. Kun oli sentrifugoitu 2 500 g:ssä 15 minuutin ajan, sakat pestiin kolme kertaa puskurilla A ja suspendoitiin uudelleen 1 ml:aan puskuria B (10 mM EDTA; 100 mM NaCl; 50 mM Tris-HCl, pH = 8,5). Kun SDS:ää oli lisätty 0,5 %:iin ja proteinaasi E:tä 200 µg/ml:aan, seosta inkuboitiin 12 tuntia 56 °C:ssa. Proteiinin poisto suoritettiin peräkkäin fenoli-kloroformiseoksella (1:1), vedellä kyllästetyllä fenolilla, fenoli-kloroformiseoksella (1:1) ja kloroformilla. DNA saostettiin lisäämällä NaCl-liuosta 1 M ja 1 V isopropyylialkoholiin. Sen jälkeen liuosta jäähdytettiin 1 tunti -20 °C:ssa. Sakka, joka saatiin sentrifugoimalla Eppendorf-mikrosentrifugilla 12 000 g:ssä 15 minuutin ajan, pestiin kolme kertaa 75-prosenttisella etanolilla, mitä seurasi sentrifugointi 5 minuutin ajan. 12 000 g ja 56 °C:ssa kuivaamisen jälkeen liuotettu deinalisoituun veteen DNA-pitoisuuteen 0,5 µg/μl. Polymorfismien genotyypitys suoritettiin käyttäen reaaliaikaista PCR:ää valmistajan protokollan mukaisesti (TaqMan-koettimet, Thermo Fisher Scientific, USA). StepOnePlus-instrumentti. Ne valittiin kansainvälisten täyden genomin laajuisten assosiaatiotutkimusten (GWAS) tulosten perusteella, jotka vahvistivat näiden SNP:iden yhteyden sepelvaltimotautiin (CHD), tulehdusprosessiin, jolla on merkittävä rooli ateroskleroosin etenemisessä.

Tilastollisen analyysin menetelmät. Molekyyligeneettisten tietojen tilastolliseen analyysiin käytetään SPSS 22.0 -ohjelmistopakettia. Ensimmäisessä vaiheessa selvitetään tutkittujen SNP:iden genotyyppien ja alleelien esiintymistiheydet sydäninfarktipotilaiden ryhmässä, joilla on kohonneet kardiospesifisten markkerien arvot, ja vertailuryhmässä, jossa kardiospesifiset markkerit ovat normaalin rajoissa; sitten arvioimme genotyyppifrekvenssien yhteensopivuutta Hardy-Weinberg-tasapainon kanssa kontrolliryhmässä (khin-neliö-kriteerin avulla). Siinä verrataan indikaattoreiden, kuten iän, tasoja; kreatiniinitaso; sydänlihasnekroosin biomarkkerien diagnostinen taso: MB kreatiinikinaasi ja troponiini, rasvahappoja sitova proteiini (FABP); painoindeksi; vyötärönympärys; seerumin C-peptidipitoisuus; glykemiatasot sisäänpääsyn ja kotiutuksen yhteydessä; veren hemoglobiinitasot sisääntulon ja kotiutuksen yhteydessä; Systolinen ja diastolinen verenpaine vastaanoton yhteydessä; syke sisäänpääsyn yhteydessä; vasemman kammion ejektiofraktion arvo kaikukardiografialla; seerumin HCMP-pitoisuus; lipidogrammi: matalatiheyksisten lipoproteiinien (LDL), korkeatiheyksisten lipoproteiinien (HDL), kokonaiskolesterolin, triglyseridien pitoisuus seerumissa; pituus, paino, painoindeksi, eri genotyyppien kantajilla suoritettiin sen jälkeen, kun näiden piirteiden jakautumisen normaalillisuus oli tarkistettu Kolmogorov-Smirnov-testillä. Jos ominaisuudet täyttäisivät normaalijakauman kriteerit, käytettäisiin yksitekijävarianssianalyysiä. Kahden genotyyppiluokan erojen merkitys tarkistetaan lisäksi t-testillä kahdelle riippumattomalle näytteelle. Jos tutkittava ominaisuus ei täytä normaalijakauman kriteerejä, verrataan tämän ominaisuuden tasoa eri genotyyppien kantajilla Kruskal-Wallis-testillä; kahden genotyyppiluokan erojen luotettavuus tarkistetaan lisäksi Mann-Whitney-testillä kahdelle riippumattomalle näytteelle. SNP:iden yhteyttä kategorisiin muuttujiin liittyviin riskitekijöihin testataan konjugaatiotaulukoilla käyttäen Pearsonin khin neliötestiä. Nelikenttätaulukoiden tapauksessa näytteiden vertailu genotyypin ja alleelitaajuuden mukaan käyttää Fisherin tarkkaa kaksipuolista kriteeriä. Suhteellinen riski (OR - todennäköisyyssuhde) sairauden lopputuloksen / riskitekijän esiintymisen tietylle alleelille tai genotyypille lasketaan todennäköisyyssuhteena.

Kliinisten, demografisten, toiminnallisten, metabolisten, tulehdusparametrien ja sydännekroosimarkkerien vaikutusta pitkän aikavälin ennusteeseen arvioidaan todennäköisyyssuhteella (0,95 luottamusvälillä).