FORSTÅELSE AF T-CELLE- OG B-CELLE-RECEPTORREPERTOARET HOS BØRN OG UNGE VOKSNE MED ANTI-LÆGEMIDDEL-ANTISTOFFER MOD PEGASPARAGINASE

Formålet med denne delundersøgelse er at identificere biomarkører hos børn og unge voksne med ALL med overfølsomhed over for PEG-asparaginase.

Beviser tyder stærkt på, at humoral immunitet er involveret i asparaginase-immunogenicitet med neutraliserende antistoffer18. Asparaginase er et bakteriellt enzym, der ikke naturligt findes i den menneskelige krop, og derfor meget immunogent. Ved administration internaliserer antigenpræsenterende celler og præsenterer fragmenter af enzymet for naive T-celler, hvilket driver deres differentiering til Th2-hjælperceller, der signalerer differentiering af B-celler. En delmængde af aktiverede B-celler modnes til langlivede plasmaceller, der hjemvender til knoglemarven (BM), hvor de kontinuerlt udskiller anti-asparaginase-antistoffer (AAA). Andre differentierer sig til hukommelses-B-celler, der muliggør hurtige antistofresponser. Denne immunologiske hukommelse betyder, at når først sensibilisering er opstået, udløser re-eksponering for asparaginase stærke overfølsomhedsreaktioner, der gør yderligere behandling usikker. Alligevel, på trods af den kliniske betydning, findes der kun én undersøgelse af TCR-repertoiret som respons på AAA, men ingen undersøgelser til dato har direkte profileret B-celle-receptoren (BCR) repertoiret hos børn med AAA14. BCR-sekventering er for nylig blevet udviklet. Ved at integrere BCR-seq fra blod og BM med serumproteomik (Ig-Seq) kan vi direkte forbinde specifikke plasmacellekloner med cirkulerende AAA. Denne tilgang vil give mekanistisk indsigt i lægemiddelimmunogenicitet og muliggøre identifikation af molekylære biomarkører for overfølsomhedsrisiko hos børn og unge voksne med ALL.

Metoder:

Vi vil udføre en longitudinal dansk kohortestudie hos pædiatriske og unge voksne ALL-patienter, der modtager PEG-asparaginase som en del af induktions- og postkonsolideringsterapi behandlet på A2G-1. Vi vil inkludere 20 patienter med overfølsomhed og 20 uden. Biologiske prøver vil blive indsamlet ved baseline, under tidlig post-eksponering med PEG-asparaginase, ved klinisk overfølsomhed og ved opfølgningstidspunkter i henhold til A2G-1. Vi vil parre disse prøver med EDTA-plasmaprøver fra de samme tidspunkter. Vi vil udføre anrigelse af plasmaceller sammen med bulk TCR- og BCR-repertoire samt klonotyppesekventering. Fra plasma vil vi udføre serumproteomik for at identificere peptidfragmenter af cirkulerende AAA. Vi vil justere Ig-Seq-peptider med BCR-sekvenser fra PBMC og BM for at kortlægge specifikke antistoffer til deres klonale plasmacelleoprindelse. Denne tilgang giver et direkte funktionelt link mellem repertoiredata og patogene antistoffer.

Vi vil sammenligne BM-repertoirer med blodprøver for at afgøre, om cirkulerende kloner afspejler de dominerende marv-residerende plasmaceller. Hvis AAA-specifikke BCR'er kan påvises pålideligt i blod, kan dette tjene som en ikke-invasiv biomarkør, hvilket reducerer behovet for knoglemarvsprøvetagning.