ИЗУЧЕНИЕ РЕПЕРТУАРА Т-КЛЕТОЧНЫХ И В-КЛЕТОЧНЫХ РЕЦЕПТОРОВ У ДЕТЕЙ И МОЛОДЫХ ВЗРОСЛЫХ С АНТИТЕЛАМИ К ПРЕПАРАТУ ПРОТИВ PEG-АСПАРАГИНАЗЫ

Цель этого подисследования — выявить биомаркеры у детей и молодых взрослых с ОЛЛ, имеющих гиперчувствительность к ПЭГ-аспарагиназе.

Данные убедительно свидетельствуют о роли гуморального иммунитета в иммуногенности аспарагиназы с нейтрализующими антителами18. Аспарагиназа — это бактериальный фермент, который в норме отсутствует в организме человека и поэтому обладает высокой иммуногенностью. При введении антигенпрезентирующие клетки интернализуют и представляют фрагменты фермента наивным Т-клеткам, стимулируя их дифференцировку в Th2-хелперы, которые сигнализируют о дифференцировке В-клеток. Подмножество активированных В-клеток созревает в долгоживущие плазматические клетки, которые мигрируют в костный мозг (КМ), где непрерывно секретируют антитела против аспарагиназы (ААА). Другие дифференцируются в В-клетки памяти, обеспечивающие быстрый антительный ответ. Эта иммунологическая память означает, что после сенсибилизации повторное воздействие аспарагиназы вызывает сильные реакции гиперчувствительности, делая дальнейшее лечение небезопасным. Однако, несмотря на клиническую важность, существует лишь одно исследование TCR-репертуара в ответ на ААА, но на сегодняшний день нет исследований, непосредственно профилировавших репертуар В-клеточных рецепторов (BCR) у детей с ААА14. Секвенирование BCR недавно было разработано. Интегрируя BCR-seq из крови и КМ с сывороточной протеомикой (Ig-Seq), мы можем напрямую связать специфические клоны плазматических клеток с циркулирующими ААА. Этот подход обеспечит механистическое понимание иммуногенности препарата и позволит идентифицировать молекулярные биомаркеры риска гиперчувствительности у детей и молодых взрослых с ОЛЛ.

Методы:

Мы проведем лонгитюдное когортное исследование в Дании среди педиатрических и молодых взрослых пациентов с ОЛЛ, получающих ПЭГ-аспарагиназу в рамках индукционной и постконсолидационной терапии по протоколу A2G-1. Мы включим 20 пациентов с гиперчувствительностью и 20 без нее. Биологические образцы будут собираться на исходном уровне, в ранний период после воздействия ПЭГ-аспарагиназы, при клинической гиперчувствительности и в контрольные моменты времени согласно протоколу A2G-1. Мы сопоставим эти образцы с образцами ЭДТА-плазмы, взятыми в те же моменты времени. Мы проведем обогащение плазматических клеток вместе с массовым секвенированием репертуара и клонотипов TCR и BCR. Из плазмы мы проведем сывороточную протеомику для идентификации пептидных фрагментов циркулирующих ААА. Мы сопоставим пептиды Ig-Seq с последовательностями BCR из PBMC и КМ, чтобы связать специфические антитела с их клональным происхождением из плазматических клеток. Этот подход обеспечивает прямую функциональную связь между данными репертуара и патогенными антителами.

Мы сравним репертуары КМ с образцами крови, чтобы определить, отражают ли циркулирующие клоны доминирующие плазматические клетки, резидентные в костном мозге. Если BCR, специфичные к ААА, можно надежно детектировать в крови, это может служить неинвазивным биомаркером, снижая необходимость в заборе костного мозга.