FORSTÅELSE AV T-CELLE- OG B-CELLE RESEPTORREPERTOARET HOS BARN OG UNGE VOKSNE MED ANTISTOFFER MOT PEGASPARAGINASE

Målet med denne delstudien er å identifisere biomarkører hos barn og unge voksne med ALL som har overfølsomhet mot PEG-asparaginase.

Bevis tyder sterkt på at humoral immunitet er involvert i asparaginase immunogenitet med nøytraliserende antistoffer18. Asparaginase er et bakterielt enzym som ikke naturlig finnes i menneskekroppen, og er derfor svært immunogent. Ved administrering internaliserer antigenpresenterende celler og presenterer fragmenter av enzymet til naive T-celler, noe som driver deres differensiering til Th2-hjelperceller som signaliserer differensiering av B-celler. En undergruppe av aktiverte B-celler modnes til langlivede plasmaceller som migrerer til beinmargen (BM), der de kontinuerlig utskiller anti-asparaginase-antistoffer (AAA). Andre differensierer seg til minne-B-celler som muliggjør raske antistoffresponser. Dette immunologiske minnet betyr at når sensitivering skjer, vil re-eksponering for asparaginase utløse kraftige overfølsomhetsreaksjoner som gjør videre behandling usikker. Til tross for den kliniske betydningen finnes det imidlertid bare én studie om TCR-repertoaret som svar på AAA, men ingen studier til dags dato har direkte profilert B-celle-reseptor (BCR)-repertoaret hos barn med AAA14. BCR-sekvensering er nylig utviklet. Ved å integrere BCR-sekvensering fra blod og BM med serumproteomikk (Ig-Seq) kan vi direkte koble spesifikke plasmacellkloner til sirkulerende AAA. Denne tilnærmingen vil gi mekanistisk innsikt i legemiddelimmunogenitet og muliggjøre identifisering av molekylære biomarkører for overfølsomhetsrisiko hos barn og unge voksne med ALL.

Metoder:

Vi vil gjennomføre en longitudinell dansk kohortstudie hos pediatriske og unge voksne ALL-pasienter som får PEG-asparaginase som del av induksjons- og postkonsolideringsterapi behandlet på A2G-1. Vi vil inkludere 20 pasienter med overfølsomhet og 20 uten. Biologiske prøver vil bli samlet ved baseline, under tidlig post-eksponering med PEG-asparaginase, ved klinisk overfølsomhet og ved oppfølgingstidspunkter i henhold til A2G-1. Vi vil pare disse prøvene med EDTA-plasmaprøver fra samme tidspunkter. Vi vil utføre berikelse av plasmaceller sammen med bulk TCR- og BCR-repertoar og klonotypsekvensering. Fra plasma vil vi utføre serumproteomikk for å identifisere peptidfragmenter av sirkulerende AAA. Vi vil justere Ig-Seq-peptider med BCR-sekvenser fra PBMC og BM for å kartlegge spesifikke antistoffer til deres klonale plasmacelleopprinnelse. Denne tilnærmingen gir en direkte funksjonell kobling mellom repertoardata og patogene antistoffer.

Vi vil sammenligne BM-repertoarer med blodprøver for å avgjøre om sirkulerende kloner gjenspeiler de dominerende margboende plasmacellene. Hvis AAA-spesifikke BCR-er kan påvises pålitelig i blod, kan dette tjene som en ikke-invasiv biomarkør, noe som reduserer behovet for beinmargprøvetaking.