COMPREENSÃO DO REPERTÓRIO DE RECEPTORES DE CÉLULAS T E CÉLULAS B EM CRIANÇAS E JOVENS ADULTOS COM ANTICORPOS ANTI-FÁRMACO CONTRA A PEG-ASPARAGINASE

O objetivo deste subestudo é identificar biomarcadores em crianças e jovens adultos com LLA com hipersensibilidade à PEG-asparaginase.

As evidências implicam fortemente a imunidade humoral na imunogenicidade da asparaginase com anticorpos neutralizantes18. A asparaginase é uma enzima bacteriana não presente naturalmente no corpo humano e, portanto, altamente imunogénica. Após a administração, as células apresentadoras de antigénios internalizam e apresentam fragmentos da enzima a células T virgens, conduzindo à sua diferenciação em células T auxiliares Th2 que sinalizam a diferenciação das células B. Um subconjunto de células B ativadas amadurece em células plasmáticas de vida longa que migram para a medula óssea (MO), onde secretam continuamente anticorpos anti-asparaginase (AAA). Outras diferenciam-se em células B de memória que permitem respostas rápidas de anticorpos. Esta memória imunológica significa que, uma vez ocorrida a sensibilização, a reexposição à asparaginase desencadeia reações de hipersensibilidade fortes que tornam o tratamento adicional inseguro. No entanto, apesar da importância clínica, apenas existe um estudo sobre o repertório de TCR em resposta a AAA, mas até à data nenhum estudo perfilou diretamente o repertório do recetor de células B (BCR) em crianças com AAA14. O sequenciamento de BCR foi recentemente desenvolvido. Ao integrar BCR-seq do sangue e da MO com proteómica sérica (Ig-Seq), podemos ligar diretamente clones específicos de células plasmáticas aos AAA circulantes. Esta abordagem fornecerá uma compreensão mecanicista da imunogenicidade do fármaco e permitirá a identificação de biomarcadores moleculares de risco de hipersensibilidade em crianças e jovens adultos com LLA.

Métodos:

Realizaremos um estudo de coorte longitudinal dinamarquês em doentes pediátricos e jovens adultos com LLA que recebem PEG-asparaginase como parte da terapia de indução e pós-consolidação tratados no A2G-1. Incluiremos 20 doentes com hipersensibilidade e 20 sem. As amostras biológicas serão recolhidas na linha de base, durante o período inicial após exposição à PEG-asparaginase, na hipersensibilidade clínica e em momentos de seguimento de acordo com o A2G-1. Emparelharemos estas amostras com amostras de plasma EDTA dos mesmos momentos. Realizaremos enriquecimento de células plasmáticas juntamente com sequenciação do repertório e clonotipo de TCR e BCR a granel. A partir do plasma, realizaremos proteómica sérica para identificar fragmentos peptídicos de AAA circulantes. Alinharemos péptidos Ig-Seq com sequências BCR de PBMC e MO para mapear anticorpos específicos à sua origem clonal de células plasmáticas. Esta abordagem produz uma ligação funcional direta entre dados de repertório e anticorpos patogénicos.

Compararemos repertórios da MO com amostras de sangue para determinar se os clones circulantes refletem as células plasmáticas residentes dominantes na medula. Se BCRs específicos de AAA puderem ser detetados de forma fiável no sangue, isto pode servir como um biomarcador não invasivo, reduzindo a necessidade de recolha de amostras da medula óssea.