ZROZUMIENIE REPERTOARU RECEPTORÓW LIMFOCYTÓW T I B U DZIECI I MŁODYCH DOROSŁYCH Z PRZECIWCIAŁAMI PRZECIWLEKOWYMI PRZECIWKO PEG ASPARAGINAZIE

Celem tego badania podrzędnego jest identyfikacja biomarkerów u dzieci i młodych dorosłych z ALL z nadwrażliwością na PEG-asparaginazę.

Dowody silnie implikują odporność humoralną w immunogenności asparaginazy z przeciwciałami neutralizującymi18. Asparaginaza jest bakteryjnym enzymem nieobecnym naturalnie w ludzkim ciele, a zatem wysoce immunogennym. Po podaniu komórki prezentujące antygen internalizują i prezentują fragmenty enzymu naiwnym limfocytom T, napędzając ich różnicowanie w komórki pomocnicze Th2 sygnalizujące różnicowanie limfocytów B. Podzbiór aktywowanych limfocytów B dojrzewa w długo żyjące komórki plazmatyczne, które migrują do szpiku kostnego (BM), gdzie stale wydzielają przeciwciała przeciwko asparaginazie (AAA). Inne różnicują się w komórki pamięci B umożliwiające szybkie odpowiedzi przeciwciał. Ta pamięć immunologiczna oznacza, że po wystąpieniu uczulenia, ponowna ekspozycja na asparaginazę wywołuje silne reakcje nadwrażliwości, które uniemożliwiają dalsze bezpieczne leczenie. Jednak mimo klinicznego znaczenia, istnieje tylko jedno badanie dotyczące repertuaru TCR w odpowiedzi na AAA, ale do tej pory nie przeprowadzono badań bezpośrednio profilujących repertuar receptora komórek B (BCR) u dzieci z AAA14. Sekwencjonowanie BCR zostało niedawno opracowane. Integrując BCR-seq z krwi i BM z proteomiką surowicy (Ig-Seq), możemy bezpośrednio powiązać specyficzne klony komórek plazmatycznych z krążącymi AAA. To podejście zapewni mechanistyczny wgląd w immunogenność leku i umożliwi identyfikację molekularnych biomarkerów ryzyka nadwrażliwości u dzieci i młodych dorosłych z ALL.

Metody:

Przeprowadzimy podłużne badanie kohortowe w Danii u pediatrycznych i młodych dorosłych pacjentów z ALL otrzymujących PEG-asparaginazę jako część terapii indukcyjnej i pokonsolidacyjnej leczonych według protokołu A2G-1. Włączymy 20 pacjentów z nadwrażliwością i 20 bez. Próbki biologiczne będą zbierane na początku, wczesnie po ekspozycji na PEG-asparaginazę, przy klinicznej nadwrażliwości oraz w punktach czasowych obserwacji zgodnie z A2G-1. Sparujemy te próbki z próbkami osocza EDTA z tych samych punktów czasowych. Przeprowadzimy wzbogacenie komórek plazmatycznych wraz z sekwencjonowaniem repertuaru i klonotypu TCR oraz BCR w puli. Z osocza przeprowadzimy proteomikę surowicy w celu identyfikacji fragmentów peptydowych krążących AAA. Wyrównamy peptydy Ig-Seq z sekwencjami BCR z PBMC i BM, aby zmapować specyficzne przeciwciała do ich klonalnego pochodzenia komórek plazmatycznych. To podejście zapewnia bezpośredni funkcjonalny związek między danymi repertuaru a patogennymi przeciwciałami.

Porównamy repertuary BM z próbkami krwi, aby określić, czy krążące klony odzwierciedlają dominujące komórki plazmatyczne rezydujące w szpiku. Jeśli specyficzne dla AAA BCR mogą być wiarygodnie wykrywane we krwi, może to służyć jako nieinwazyjny biomarker, redukując potrzebę pobierania szpiku kostnego.