T-SOLUN JA B-SOLUN RESEPTORIREPERTOAARIN YMMÄRTÄMINEN LAPSILLA JA NUORILLA AIKUISILLA, JOILLA ON LÄÄKEVASTA-AINETTA VASTAAN SUUNTAUTUNEITA ANTIIKEITA PEG-ASPARAGINAASIA VASTAAN

Tämän alitutkimuksen tavoitteena on tunnistaa biomarkkereita lapsilla ja nuorilla aikuisilla, joilla on ALL ja yliherkkyys PEG-asparaginaasille.

Todisteet viittaavat vahvasti humoraaliseen immuniteettiin asparaginaasin immunogeenisyydessä neutraloivien vasta-aineiden kanssa18. Asparaginaasi on bakteerien entsyymi, jota ei luonnostaan esiinny ihmiskehossa, ja siksi se on erittäin immunogeeninen. Annostettaessa antigeeniantavia soluja internalisoivat ja esittelevät entsyymin osia naiiveille T-soluille, ohjaten niiden erilaistumisen Th2-auttajasoluiksi, jotka signaalisoivat B-solujen erilaistumista. Osa aktivoituneista B-soluista kypsyy pitkäikäisiksi plasmasoluiksi, jotka suuntautuvat luuytimeen (BM), jossa ne jatkuvasti erittävät anti-asparaginaasivasta-aineita (AAA). Toiset erilaistuvat muistisoluiksi, jotka mahdollistavat nopeat vasta-ainevasteet. Tämä immunologinen muisti tarkoittaa, että kun herkistyminen on tapahtunut, uudelleenaltistuminen asparaginaasille laukaisee voimakkaita yliherkkyysreaktioita, jotka tekevät jatkohoidosta vaarallisen. Kuitenkin, huolimatta kliinisestä merkityksestä, on olemassa vain yksi tutkimus TCR-repertoaarista AAA-vasteeseen, mutta tähän mennessä ei ole tutkimuksia, jotka olisivat suoraan profiloineet B-solureseptorin (BCR) repertoaaria lapsilla, joilla on AAA14. BCR-sekvensointi on kehitetty äskettäin. Integroimalla BCR-sekvensointia verestä ja luuytimestä seerumin proteomiikkaan (Ig-Seq), voimme suoraan yhdistää tiettyjä plasmasoluklooneja kiertävään AAA:han. Tämä lähestymistapa tarjoaa mekanistista näkemystä lääkeaineen immunogeenisyyteen ja mahdollistaa molekyylibiomarkkereiden tunnistamisen yliherkkyysriskistä lapsilla ja nuorilla aikuisilla, joilla on ALL.

Menetelmät:

Suoritamme pitkittäistutkimuksen tanskalaisessa kohortissa lasten ja nuorten aikuisten ALL-potilailla, jotka saavat PEG-asparaginaasia osana induktio- ja konsolidaationjälkeistä hoitoa A2G-1-protokollan mukaisesti. Sisällytämme 20 potilasta, joilla on yliherkkyys, ja 20 ilman. Biologiset näytteet kerätään perustasolla, varhaisessa PEG-asparaginaasialtistuksen jälkeen, kliinisessä yliherkkyydessä ja seuranta-aikoina A2G-1-protokollan mukaisesti. Yhdistämme nämä näytteet EDTA-plasmanäytteisiin samoista ajoista. Suoritamme plasmasolujen rikastamisen yhdessä bulkkien TCR- ja BCR-repertoaarin ja klonotyyppisekvensoinnin kanssa. Plasmanäytteistä suoritamme seerumin proteomiikkaa kiertävien AAA:n peptidiosien tunnistamiseksi. Yhdistämme Ig-Seq-peptidit BCR-sekvensseihin PBMC:stä ja luuytimestä kartoittaaksemme tiettyjä vasta-aineita niiden kloonisten plasmasolujen alkuperään. Tämä lähestymistapa tuottaa suoran toiminnallisen yhteyden repertoaaritietojen ja patogeenisten vasta-aineiden välille.

Vertailemme luuytimen repertoaareja verinäytteisiin määrittääksemme, heijastavatko kiertävät kloonit vallitsevia luuytimessä olevia plasmasoluja. Jos AAA-spesifisiä BCR:itä voidaan luotettavasti havaita veressä, tämä voi toimia ei-invasiivisena biomarkkerina, vähentäen tarpeita luuytimenäytteisiin.