FÖRSTÅELSE AV T-CELL- OCH B-CELL-RECEPTORREPERTOAREN HOS BARN OCH UNGA VUXNA MED ANTILÄKEMEDELSANTIKROPPAR MOT PEG-ASPARAGINAS

Syftet med denna delstudie är att identifiera biomarkörer hos barn och unga vuxna med ALL som har överkänslighet mot PEG-asparaginas.

Bevis tyder starkt på att humoralt immunförsvar är inblandat i asparaginass immunogenicitet med neutraliserande antikroppar18. Asparaginas är ett bakterieenzym som inte naturligt finns i människokroppen och därför är starkt immunogent. Vid administrering internaliserar antigenpresenterande celler och presenterar fragment av enzymet för naiva T-celler, vilket driver deras differentiering till Th2-hjälparceller som signalerar differentiering av B-celler. En delmängd av aktiverade B-celler mognar till långlivade plasmaceller som migrerar till benmärgen (BM), där de kontinuerligt utsöndrar anti-asparaginas-antikroppar (AAA). Andra differentieras till minnes-B-celler som möjliggör snabba antikroppssvar. Detta immunologiska minne innebär att när en sensibilisering har inträffat, utlöser återexponering för asparaginas starka överkänslighetsreaktioner som gör vidare behandling osäker. Trots den kliniska betydelsen finns det dock endast en studie om TCR-repertoaren som svar på AAA, men inga studier hittills har direkt profilerat B-cell-receptorns (BCR) repertoar hos barn med AAA14. BCR-sekvensering har nyligen utvecklats. Genom att integrera BCR-sekvensering från blod och BM med serumproteomik (Ig-Seq) kan vi direkt koppla specifika plasmacellkloner till cirkulerande AAA. Detta tillvägagångssätt kommer att ge mekanistisk insikt i läkemedlets immunogenicitet och möjliggöra identifiering av molekylära biomarkörer för överkänslighetsrisk hos barn och unga vuxna med ALL.

Metoder:

Vi kommer att genomföra en longitudinell dansk kohortstudie på pediatriska och unga vuxna ALL-patienter som får PEG-asparaginas som en del av induktions- och postkonsolideringsterapi behandlade enligt A2G-1. Vi kommer att inkludera 20 patienter med överkänslighet och 20 utan. Biologiska prover kommer att samlas in vid baslinje, under tidig postexponering med PEG-asparaginas, vid klinisk överkänslighet och vid uppföljningstidpunkter enligt A2G-1. Vi kommer att para ihop dessa prover med EDTA-plasmaprover från samma tidpunkter. Vi kommer att utföra anrikning av plasmaceller tillsammans med bulk-TCR- och BCR-repertoar samt klonotypsekvensering. Från plasma kommer vi att utföra serumproteomik för att identifiera peptidfragment av cirkulerande AAA. Vi kommer att matcha Ig-Seq-peptider med BCR-sekvenser från PBMC och BM för att kartlägga specifika antikroppar till deras klonala plasmacellursprung. Detta tillvägagångssätt ger en direkt funktionell länk mellan repertoardata och patogena antikroppar.

Vi kommer att jämföra BM-repertoarer med blodprover för att avgöra om cirkulerande kloner återspeglar de dominerande märgboende plasmacellerna. Om AAA-specifika BCR:er på ett tillförlitligt sätt kan detekteras i blod, kan detta fungera som en icke-invasiv biomarkör, vilket minskar behovet av benmärgsprovtagning.