COMPRENSIÓN DEL REPERTORIO DE RECEPTORES DE CÉLULAS T Y CÉLULAS B EN NIÑOS Y ADULTOS JÓVENES CON ANTICUERPOS ANTI-FÁRMACO CONTRA LA PEGASPARAGINASA

El objetivo de este subestudio es identificar biomarcadores en niños y adultos jóvenes con LLA con hipersensibilidad a PEG-asparaginasa.

La evidencia implica fuertemente a la inmunidad humoral en la inmunogenicidad de la asparaginasa con anticuerpos neutralizantes18. La asparaginasa es una enzima bacteriana no presente de forma natural en el cuerpo humano y, por lo tanto, altamente inmunogénica. Tras su administración, las células presentadoras de antígeno internalizan y presentan fragmentos de la enzima a células T vírgenes, impulsando su diferenciación en células T colaboradoras Th2 que señalan la diferenciación de células B. Un subconjunto de células B activadas madura en células plasmáticas de larga vida que migran a la médula ósea (MO), donde secretan continuamente anticuerpos anti-asparaginasa (AAA). Otras se diferencian en células B de memoria que permiten respuestas rápidas de anticuerpos. Esta memoria inmunológica significa que una vez que ocurre la sensibilización, la reexposición a la asparaginasa desencadena fuertes reacciones de hipersensibilidad que hacen que el tratamiento adicional sea inseguro. Sin embargo, a pesar de la importancia clínica, solo existe un estudio sobre el repertorio de TCR en respuesta a AAA, pero hasta la fecha no hay estudios que hayan perfilado directamente el repertorio del receptor de células B (BCR) en niños con AAA14. La secuenciación de BCR se ha desarrollado recientemente. Al integrar BCR-seq de sangre y MO con proteómica sérica (Ig-Seq), podemos vincular directamente clones específicos de células plasmáticas con AAA circulantes. Este enfoque proporcionará una comprensión mecanicista de la inmunogenicidad del fármaco y permitirá la identificación de biomarcadores moleculares del riesgo de hipersensibilidad en niños y adultos jóvenes con LLA.

Métodos:

Realizaremos un estudio de cohorte longitudinal danés en pacientes pediátricos y adultos jóvenes con LLA que reciben PEG-asparaginasa como parte de la terapia de inducción y postconsolidación tratados en el A2G-1. Incluiremos 20 pacientes con hipersensibilidad y 20 sin ella. Las muestras biológicas se recolectarán al inicio, durante el período temprano posterior a la exposición con PEG-asparaginasa, en caso de hipersensibilidad clínica y en puntos de seguimiento según el A2G-1. Emparejaremos estas muestras con muestras de plasma con EDTA de los mismos puntos temporales. Realizaremos enriquecimiento de células plasmáticas junto con secuenciación del repertorio y clonotipo de TCR y BCR a granel. A partir del plasma realizaremos proteómica sérica para identificar fragmentos peptídicos de AAA circulantes. Alinearemos péptidos de Ig-Seq con secuencias de BCR de PBMC y MO para mapear anticuerpos específicos a su origen clonal de células plasmáticas. Este enfoque proporciona un vínculo funcional directo entre los datos del repertorio y los anticuerpos patógenos.

Compararemos los repertorios de MO con muestras de sangre para determinar si los clones circulantes reflejan las células plasmáticas dominantes residentes en la médula. Si los BCR específicos de AAA pueden detectarse de manera confiable en la sangre, esto podría servir como un biomarcador no invasivo, reduciendo la necesidad de muestreo de médula ósea.