POROZUMĚNÍ REPERTOÁRU RECEPTORŮ T-BUNĚK A B-BUNĚK U DĚTÍ A MLADÝCH DOSPĚLÝCH S PROTILÁTKAMI PROTI LÉKU PROTI PEG ASPARAGINÁZE

Cílem této dílčí studie je identifikovat biomarkery u dětí a mladých dospělých s ALL s přecitlivělostí na PEG-asparaginázu.

Důkazy silně naznačují, že humorální imunita hraje roli v imunogenicitě asparaginázy s neutralizačními protilátkami18. Asparagináza je bakteriální enzym, který se přirozeně v lidském těle nevyskytuje, a proto je vysoce imunogenní. Po podání antigen-prezentující buňky internalizují a prezentují fragmenty enzymu naivním T buňkám, což vede k jejich diferenciaci v Th2 pomocné buňky signalizující diferenciaci B buněk. Podskupina aktivovaných B buněk dospívá v dlouho žijící plazmatické buňky, které migrují do kostní dřeně (BM), kde kontinuálně secernují protilátky proti asparagináze (AAA). Jiné se diferencují v paměťové B buňky, které umožňují rychlou protilátkovou odpověď. Tato imunologická paměť znamená, že jakmile dojde k senzibilizaci, opětovná expozice asparagináze spouští silné hypersenzitivní reakce, které činí další léčbu nebezpečnou. Přesto, navzdory klinickému významu, existuje pouze jedna studie o TCR repertoáru v reakci na AAA, ale dosud nebyly provedeny žádné studie, které by přímo profilovaly repertoár B-buněčného receptoru (BCR) u dětí s AAA14. Sekvenování BCR bylo nedávno vyvinuto. Integrací BCR-seq z krve a BM s proteomikou séra (Ig-Seq) můžeme přímo spojit specifické klony plazmatických buněk s cirkulujícími AAA. Tento přístup poskytne mechanistický vhled do imunogenity léčiva a umožní identifikaci molekulárních biomarkerů rizika přecitlivělosti u dětí a mladých dospělých s ALL.

Metody:

Provedeme longitudinální dánskou kohortní studii u pediatrických a mladých dospělých pacientů s ALL, kteří dostávají PEG-asparaginázu jako součást indukční a postkonsolidační léčby léčené na A2G-1. Zahrneme 20 pacientů s přecitlivělostí a 20 bez ní. Biologické vzorky budou odebírány na začátku, během rané postexpozice s PEG-asparaginázou, při klinické přecitlivělosti a v následných časových bodech podle A2G-1. Tyto vzorky spárujeme s EDTA-plazmovými vzorky ze stejných časových bodů. Provedeme obohacení plazmatických buněk společně s hromadným TCR a BCR repertoárem a sekvenováním klonotypů. Z plazmy provedeme proteomiku séra k identifikaci peptidových fragmentů cirkulujících AAA. Zarovnáme Ig-Seq peptidy s BCR sekvencemi z PBMC a BM, abychom mapovali specifické protilátky na jejich klonální původ plazmatických buněk. Tento přístup poskytuje přímou funkční vazbu mezi daty repertoáru a patogenními protilátkami.

Porovnáme BM repertoáry s krevními vzorky, abychom určili, zda cirkulující klony odrážejí dominantní plazmatické buňky rezidentní v kostní dřeni. Pokud lze AAA-specifické BCR spolehlivě detekovat v krvi, může to sloužit jako neinvazivní biomarker, což sníží potřebu odběru kostní dřeně.