VERSTÄNDNIS DES T-ZELL- UND B-ZELL-REZEPTORREPERTOIRES BEI KINDERN UND JUNGEN ERWACHSENEN MIT ANTIKÖRPERN GEGEN PEG-ASPARAGINASE

Ziel dieser Teilstudie ist die Identifizierung von Biomarkern bei Kindern und jungen Erwachsenen mit ALL und Hypersensitivität gegenüber PEG-Asparaginase.

Die Evidenz deutet stark auf eine Beteiligung der humoralen Immunität an der Immunogenität von Asparaginase mit neutralisierenden Antikörpern hin18. Asparaginase ist ein bakterielles Enzym, das im menschlichen Körper nicht natürlich vorkommt und daher hochgradig immunogen ist. Bei Verabreichung internalisieren antigenpräsentierende Zellen Fragmente des Enzyms und präsentieren sie naiven T-Zellen, wodurch deren Differenzierung in Th2-Helferzellen angeregt wird, die die Differenzierung von B-Zellen signalisieren. Eine Untergruppe aktivierter B-Zellen reift zu langlebigen Plasmazellen heran, die ins Knochenmark (KM) einwandern, wo sie kontinuierlich Anti-Asparaginase-Antikörper (AAA) sezernieren. Andere differenzieren sich zu Gedächtnis-B-Zellen, die schnelle Antikörperreaktionen ermöglichen. Dieses immunologische Gedächtnis bedeutet, dass nach erfolgter Sensibilisierung eine erneute Exposition gegenüber Asparaginase starke Hypersensitivitätsreaktionen auslöst, die eine weitere Behandlung unsicher machen. Trotz der klinischen Bedeutung existiert jedoch nur eine Studie zum TCR-Repertoire in Reaktion auf AAA, aber bis heute keine Studien, die direkt das B-Zell-Rezeptor (BCR)-Repertoire bei Kindern mit AAA14 profiliert haben. Die BCR-Sequenzierung wurde kürzlich entwickelt. Durch die Integration von BCR-Seq aus Blut und KM mit Serumproteomik (Ig-Seq) können wir spezifische Plasmazellklone direkt mit zirkulierenden AAA verknüpfen. Dieser Ansatz wird mechanistische Einblicke in die Arzneimittelimmunogenität liefern und die Identifizierung molekularer Biomarker für das Hypersensitivitätsrisiko bei Kindern und jungen Erwachsenen mit ALL ermöglichen.

Methoden:

Wir werden eine longitudinale dänische Kohortenstudie bei pädiatrischen und jungen erwachsenen ALL-Patienten durchführen, die PEG-Asparaginase als Teil der Induktions- und Postkonsolidierungstherapie nach A2G-1 erhalten. Wir werden 20 Patienten mit Hypersensitivität und 20 ohne einschließen. Biologische Proben werden gemäß A2G-1 zu Studienbeginn, während der frühen Postexposition mit PEG-Asparaginase, bei klinischer Hypersensitivität und zu Nachuntersuchungszeitpunkten gesammelt. Wir werden diese Proben mit EDTA-Plasmaproben von denselben Zeitpunkten koppeln. Wir werden eine Anreicherung von Plasmazellen zusammen mit TCR- und BCR-Repertoire sowie Klonotyp-Sequenzierung im Bulk durchführen. Aus dem Plasma werden wir Serumproteomik durchführen, um Peptidfragmente zirkulierender AAA zu identifizieren. Wir werden Ig-Seq-Peptide mit BCR-Sequenzen aus PBMC und KM abgleichen, um spezifische Antikörper ihrem klonalen Plasmazellursprung zuzuordnen. Dieser Ansatz liefert eine direkte funktionelle Verknüpfung zwischen Repertoiredaten und pathogenen Antikörpern.

Wir werden KM-Repertoires mit Blutproben vergleichen, um festzustellen, ob zirkulierende Klone die dominanten, im Mark residierenden Plasmazellen widerspiegeln. Falls AAA-spezifische BCRs zuverlässig im Blut nachgewiesen werden können, könnte dies als nicht-invasiver Biomarker dienen und die Notwendigkeit von Knochenmarkprobenahmen reduzieren.