COMPRENSIONE DEL REPERTORIO DEI RECETTORI DEI LINFOCITI T E B NEI BAMBINI E NEI GIOVANI ADULTI CON ANTICORPI ANTI-FARMACO CONTRO LA PEG ASPARAGINASI

Lo scopo di questo sotto-studio è identificare biomarcatori nei bambini e nei giovani adulti con leucemia linfoblastica acuta (LLA) con ipersensibilità alla PEG-asparaginasi.

Le evidenze implicano fortemente l'immunità umorale nell'immunogenicità dell'asparaginasi con anticorpi neutralizzanti18. L'asparaginasi è un enzima batterico non naturalmente presente nel corpo umano, e quindi altamente immunogenico. Dopo la somministrazione, le cellule presentanti l'antigene internalizzano e presentano frammenti dell'enzima alle cellule T naive, guidandone la differenziazione in cellule helper Th2 che segnalano la differenziazione delle cellule B. Un sottoinsieme di cellule B attivate matura in plasmacellule longeve che migrano nel midollo osseo (BM), dove secernono continuamente anticorpi anti-asparaginasi (AAA). Altre si differenziano in cellule B della memoria che consentono rapide risposte anticorpali. Questa memoria immunologica significa che una volta avvenuta la sensibilizzazione, una riesposizione all'asparaginasi scatena forti reazioni di ipersensibilità che rendono ulteriori trattamenti non sicuri. Tuttavia, nonostante l'importanza clinica, esiste solo uno studio sul repertorio del TCR in risposta agli AAA, ma ad oggi nessuno studio ha profilato direttamente il repertorio del recettore delle cellule B (BCR) nei bambini con AAA14. Il sequenziamento del BCR è stato recentemente sviluppato. Integrando il BCR-seq da sangue e BM con la proteomica sierica (Ig-Seq), possiamo collegare direttamente cloni specifici di plasmacellule agli AAA circolanti. Questo approccio fornirà una comprensione meccanicistica dell'immunogenicità del farmaco e consentirà l'identificazione di biomarcatori molecolari del rischio di ipersensibilità nei bambini e nei giovani adulti con LLA.

Metodi:

Condurremo uno studio longitudinale di coorte danese in pazienti pediatrici e giovani adulti con LLA che ricevono PEG-asparaginasi come parte della terapia di induzione e post-consolidazione trattati secondo il protocollo A2G-1. Includeremo 20 pazienti con ipersensibilità e 20 senza. I campioni biologici saranno raccolti al basale, durante il periodo post-esposizione precoce alla PEG-asparaginasi, in caso di ipersensibilità clinica, e ai tempi di follow-up secondo il protocollo A2G-1. Abbineremo questi campioni con campioni di plasma EDTA degli stessi tempi. Effettueremo l'arricchimento delle plasmacellule insieme al sequenziamento del repertorio TCR e BCR in bulk e dei clonotipi. Dal plasma eseguiremo la proteomica sierica per identificare frammenti peptidici degli AAA circolanti. Allineeremo i peptidi Ig-Seq con le sequenze BCR da PBMC e BM per mappare anticorpi specifici alla loro origine clonale di plasmacellule. Questo approccio produce un collegamento funzionale diretto tra i dati del repertorio e gli anticorpi patogeni.

Confrontaremo i repertori del BM con i campioni di sangue per determinare se i cloni circolanti riflettono le plasmacellule residenti dominanti nel midollo. Se i BCR specifici per AAA possono essere rilevati in modo affidabile nel sangue, ciò potrebbe servire come biomarcatore non invasivo, riducendo la necessità di prelievi di midollo osseo.