La anatomía molecular de la curación de heridas orales

FONDO:

Dos propiedades importantes distinguen el proceso de cicatrización de las heridas de la mucosa oral de las de la piel: una cicatrización más rápida y la ausencia de formación de tejido cicatricial. Esto es notable dadas las aparentes similitudes de los dos tejidos. Sin embargo, existen diferencias importantes en el entorno de curación, como la hidratación, la disponibilidad del factor de crecimiento, la respuesta inflamatoria y la exposición microbiana. El conocimiento sobre la contribución causal de cada uno de estos factores a la respuesta de cicatrización diferencial de los dos epitelios es en su mayoría anecdótico, y la cicatrización de heridas orales generalmente ha sido poco estudiada. Este estudio busca proporcionar una definición molecular global de la cicatrización de heridas orales en comparación con la de la piel. El objetivo general será identificar los factores específicos que permiten una curación rápida y casi sin cicatrices de la mucosa oral. La identificación de estos determinantes fisiológicos y moleculares tendrá amplias implicaciones para la salud bucal humana. Entre otros, proporcionaría lugares para la exploración específica de procedimientos para acelerar la curación de lesiones orales de tamaño crítico formadas por trauma, cirugía, radioterapia, infección y otras patologías orales que, si no se tratan, conducen a discapacidad y disfunción permanentes. . Además, las vías y/o moléculas identificadas en estos estudios que pueden facilitar una curación rápida y sin cicatrices podrían considerarse para su aplicación en sitios de la mucosa no oral para promover la curación y minimizar las cicatrices antiestéticas, que también pueden comprometer la integridad funcional del tejido.

Hipótesis:

• Existen diferencias significativas en la expresión de genes y proteínas entre la cicatrización de heridas en la piel y la mucosa oral.
• El reclutamiento de células inflamatorias asociado con una gran regulación positiva de los genes asociados con la inflamación, incluidas las citocinas y las quimiocinas, en las células epiteliales de las heridas de la piel puede explicar estas diferencias.
• Existen programas genéticos específicos que pueden explicar la presencia de cicatrices significativas en los tejidos de la piel pero no en la mucosa oral.

OBJETIVOS:

El objetivo general de esta propuesta de estudio piloto es establecer los perfiles de expresión de genes y proteínas durante las primeras etapas (1 a 6 días) de la reparación normal de heridas orales. Al comparar estos perfiles con los de la cicatrización de heridas cutáneas, es posible que podamos identificar moléculas exclusivas de la reparación de heridas orales que podrían representar biomarcadores del proceso de cicatrización o servir como nuevos objetivos terapéuticos en la cicatrización de heridas patológicas y el cáncer. Una hipótesis específica a probar es que el nivel de expresión de redes de genes proinflamatorios por queratinocitos infiltrantes de heridas constituye la diferencia más significativa entre los transcriptomas de heridas orales y cutáneas humanas. La hipótesis específica se ha desarrollado a partir de los datos obtenidos de nuestros recientes estudios complementarios de cicatrización de heridas orales y cutáneas en animales.

ELEGIBILIDAD:

En este estudio se inscribirán voluntarios varones sanos de entre 18 y 40 años.

DISEÑO:

Muestras de mucosa oral: Se utilizará un sacabocados dérmico estéril de 3 mm para crear una biopsia uniforme de espesor completo en la mucosa de la mejilla justo por encima del plano oclusal. Se extraerán piezas circulares de tejido de aproximadamente 2 mm de profundidad el día de la biopsia (día 1). Estos sujetos serán posteriormente agrupados aleatoriamente de la siguiente manera:

Grupo 1: no se recogerán más muestras; Las fotografías se tomarán los días 3, 6, 9, 13 y 15 (ver Horario). Este grupo ayudará a documentar el proceso de curación normal en las condiciones del presente estudio, incluida la falta de cicatrización en el área seleccionada para la herida inicial en la mucosa oral en comparación con la piel.

Grupo 2: se tomará una segunda biopsia el día 3, que incluirá el área de la primera biopsia con punch estéril de 5 mm, siguiendo el mismo procedimiento descrito para el día 0; las fotografías se tomarán de acuerdo con el horario establecido en el Horario. Esta segunda biopsia permitirá tomar muestras del área de cicatrización inducida por la primera biopsia. Seleccionando un tamaño de punzón dos milímetros más ancho y tomando una muestra concéntrica al primero, podemos asegurar la eliminación completa del área de interés.

Grupo 3: se tomará una segunda biopsia el día 6, respectivamente, de forma similar a la descrita para el Grupo 2; Las fotografías se tomarán de acuerdo con el Horario.

Muestras de piel: Paralelamente a las biopsias orales, se obtendrán biopsias de piel de la región axilar de tamaño y profundidad similar a la biopsia oral de los mismos sujetos siguiendo el mismo programa y procedimiento, incluyendo una segunda biopsia para los grupos 2 y 3.

Las heridas se fotografiarán con una cámara digital y se controlará la cicatrización en las visitas a la clínica según el cronograma anterior. Los tejidos extirpados en cada caso se cortarán inmediatamente en hielo; la mitad de la muestra se fijará en formaldehído/PBS al 4 % y se incluirá en parafina para histología e inmunohistoquímica estándar, y la mitad restante se colocará en moldes de base de plástico llenos de OCT, se congelará instantáneamente en nitrógeno líquido y se almacenará a 80 (Infinite )C hasta su procesamiento para análisis genómico y proteómico.