Respuestas metabólicas y del sistema inmunitario a una comida mixta

El objetivo de esta investigación es investigar las diferencias en el metabolismo y la inflamación en el tejido adiposo y la circulación en respuesta a una comida con aumento de la adiposidad. Se supone que los participantes con mayor masa grasa tendrán una respuesta inflamatoria más pronunciada a una comida en comparación con los participantes con un peso "saludable". La respuesta inflamatoria se evaluará midiendo los cambios en la expresión génica y la secreción de proteínas en el tejido adiposo y midiendo marcadores de metabolismo, resistencia a la insulina, enfermedades cardiovasculares e inflamación en la sangre.

Después de la publicidad del estudio, se pedirá a los posibles participantes interesados ​​que se comuniquen con el Investigador Jefe para obtener más información por correo electrónico o correspondencia telefónica. Habrá una evaluación inicial de elegibilidad basada en los criterios de inclusión/exclusión y, si se cumplen estos requisitos, se invitará al participante potencial a una reunión para analizar más a fondo el ensayo. Después de leer la hoja de información del participante y ver el diagrama de flujo que describe el cronograma del estudio, si desean participar, se les pedirá que firmen un formulario de consentimiento. Posteriormente se programarán fechas para la toma de unas medidas antropométricas preliminares, 9 días de seguimiento de la actividad física y la fecha de la prueba (1 día completo solo en el laboratorio).

Medidas preliminares:

Las pruebas preliminares incluirán medidas antropométricas de altura, peso, circunferencias de cintura y cadera, altura sagital de la cintura y presión arterial. Estas mediciones se llevarán a cabo en los Laboratorios de Fisiología de la Universidad de Bath.

Seguimiento de la actividad física:

Durante 9 días, a los participantes se les colocará un monitor de actividad física (Actiheart™) y se les pedirá que registren un diario correspondiente de su actividad física durante este período para ayudar a su interpretación y permitir un cálculo más preciso del gasto de energía de actividad diario promedio. Los participantes no deben realizar ningún cambio consciente en sus hábitos/rutinas normales de estilo de vida durante este período. Los primeros 2 días de seguimiento de la actividad se excluirán del análisis para tener en cuenta la reactividad.

Día principal del juicio:

En los 3 días previos al día principal del ensayo, se les pedirá a los participantes que registren su ingesta de alimentos y bebidas y 48 horas antes deben abstenerse de realizar cualquier actividad física extenuante. En las 24 horas previas, los participantes también deben abstenerse de consumir alcohol o cafeína.

Los participantes deben llegar a Sports Training Village, Universidad de Bath por la mañana después de un ayuno de 10 horas donde se evaluará con precisión su composición corporal utilizando un absorciómetro de rayos X de energía dual (DEXA). Luego serán llevados al laboratorio de reposo de fisiología donde se recolectarán los gases espirados de referencia para evaluar la tasa metabólica en reposo (RMR). Se insertará una cánula en una vena del antebrazo y se tomarán muestras de sangre de referencia para el análisis de marcadores metabólicos/inflamatorios y el aislamiento de células T. También se obtendrá una muestra de grasa mediante una técnica de aspiración con aguja.

Luego, se le pedirá al participante que consuma una comida tipo desayuno con un alto contenido de carbohidratos y grasas que consista en brioche, mermelada, mantequilla y batido, que ha sido adaptado de una comida utilizada por Rijkelijkhuizen J. et al, 2008, que indujo una mayor fuerza. Las respuestas de las células beta (es decir, de insulina) en comparación con una carga de glucosa y mostraron diferencias con la sensibilidad a la insulina, por lo que este tipo de comida debería identificar diferencias en el metabolismo en función de la adiposidad.

Además, existe alguna evidencia de que los alimentos ricos en almidón y bajos en fibra pueden inducir una mayor inflamación (Manning, Sutherland et al. 2008). La composición de la comida para todos los individuos será idéntica, pero el contenido de energía de los carbohidratos se calculará como una porción de la tasa metabólica en reposo de los individuos. Esto permite la estandarización de la ingesta de energía para las diferencias de peso/composición corporal y reflejará los requisitos de energía del individuo mientras está en reposo.

La comida debe consumirse dentro de los 15 minutos y se tomarán muestras de sangre de la cánula a los 15, 30, 60 y 90 minutos y luego cada hora durante las 6 horas posteriores al consumo de la comida para controlar los cambios en los marcadores metabólicos e inflamatorios. Se obtendrán muestras de sangre adicionales a las 2 y 6 horas después de las comidas mediante venopunción para el análisis de marcadores inflamatorios, ya que existe evidencia de que la cánula puede estimular la inflamación local que interfiere con el verdadero resultado.

También se tomarán muestras de gases espirados para RMR cada hora y se usará calorimetría indirecta para estimar el metabolismo relativo de grasas y carbohidratos en respuesta a la comida.

Se tomará una segunda muestra de grasa a las 6 horas para examinar las respuestas inflamatorias y metabólicas a la comida dentro del tejido adiposo. También se obtendrá una segunda muestra de sangre para el aislamiento de células T en este momento para examinar las respuestas metabólicas/inflamatorias correspondientes en las células T.

Análisis:

El día de la prueba se analizará sangre completa para el recuento de glóbulos blancos, glucosa y lactato. Las muestras de plasma y suero se extraerán de la sangre completa mediante centrifugación y se almacenarán a -80ºC. Los monocitos y los linfocitos T (poblaciones de glóbulos blancos) también se aislarán de la sangre completa para una evaluación posterior de la sensibilidad a la insulina y experimentos de cultivo.

En cada muestra de grasa, se cultivarán porciones separadas de tejido adiposo o adipocitos (aislados de las otras células dentro del tejido adiposo mediante un método de digestión) y se recolectarán los medios para investigaciones posteriores. La expresión de ARNm también se examinará en tejido adiposo y adipocitos aislados. Las células restantes del tejido adiposo (SVF) también se almacenarán para su posterior análisis de poblaciones celulares mediante citometría de flujo y análisis de expresión/secreción.