Aineenvaihdunta- ja immuunijärjestelmän vasteet sekalaiseen ateriaan

Tämän tutkimuksen tavoitteena on selvittää rasvakudoksen aineenvaihdunnan ja tulehduksen eroja sekä verenkiertoa vasteena aterian lisääntyvän rasvaisuuden vuoksi. Oletuksena on, että osallistujilla, joilla on lisääntynyt rasvamassa, on selvempi tulehduksellinen vaste ateriaan verrattuna osallistujiin, joilla on "terve" paino. Tulehdusvastetta arvioidaan mittaamalla muutoksia geeniekspressiossa ja proteiinin erittymisessä rasvakudoksessa sekä mittaamalla aineenvaihdunnan, insuliiniresistenssin, sydän- ja verisuonitautien ja tulehduksen markkereita verestä.

Tutkimuksesta ilmoituksen jälkeen kiinnostuneita potentiaalisia osallistujia pyydetään ottamaan yhteyttä päätutkijaan saadakseen lisätietoja sähköpostitse tai puhelimitse. Kelpoisuus arvioidaan alustavasti mukaanotto-/poissulkemiskriteerien perusteella, ja jos nämä vaatimukset täyttyvät, mahdollinen osallistuja kutsutaan kokoukseen, jossa keskustellaan edelleen kokeesta. Kun he ovat lukeneet osallistujan tietolomakkeen ja nähneet vuokaavion, jossa esitetään tutkimuksen aikajana, heitä pyydetään allekirjoittamaan suostumuslomake, jos he haluavat osallistua. Sitten sovitaan päivämäärät joillekin alustaville antropometrisille mittauksille, 9 päivän fyysisen aktiivisuuden seurannalle ja koepäivälle (vain 1 täysi päivä laboratoriossa).

Alustavat mitat:

Alustavassa testauksessa mitataan antropometrisesti pituus, paino, vyötärön ja lantion ympärysmitat, sagitaalinen vyötärön korkeus ja verenpaine. Nämä mittaukset tehdään Bathin yliopiston fysiologian laboratorioissa.

Fyysisen aktiivisuuden seuranta:

Osallistujat varustetaan yhdeksän päivän ajan fyysisen aktiivisuuden monitorilla (Actiheart™) ja heitä pyydetään kirjaamaan vastaava päiväkirja fyysisestä aktiivisuudestaan ​​tänä aikana, jotta se tulkitsee ja mahdollistaa tarkemman laskennan keskimääräisestä päivittäisestä aktiivisuudesta. Osallistujien ei tule tehdä mitään tietoisia muutoksia normaaleihin elämäntottumuksiinsa/rutiineihinsa tänä aikana. Aktiivisuuden seurannan ensimmäiset 2 päivää jätetään analyysin ulkopuolelle reaktiivisuuden huomioon ottamiseksi.

Pääkoepäivä:

Kolmen päivän aikana ennen pääkoepäivää osallistujia pyydetään kirjaamaan ruoka- ja juomansa ja 48 tuntia ennen kuin heidän tulee pidättäytyä kaikista rasittavista fyysisistä aktiviteeteista. Osallistujien tulee myös pidättäytyä käyttämästä alkoholia tai kofeiinia edeltävien 24 tunnin aikana.

Osallistujien tulee saapua Bathin yliopiston Sports Training Villageen aamulla 10 tunnin paaston jälkeen, jossa heidän kehonkoostumus mitataan tarkasti käyttämällä kaksienergiaista röntgenabsorptiometriä (DEXA). Sitten ne viedään fysiologian lepolaboratorioon, jossa kerätään lähtötilanteessa uloshengityneet kaasut lepoaineenvaihduntanopeuden (RMR) arvioimiseksi. Kanyyli asetetaan kyynärvarren laskimoon ja otetaan perusverinäyte(t) metabolisten/tulehdusmerkkiaineiden analysointia ja T-solujen eristämistä varten. Rasvanäyte otetaan myös käyttämällä neulaaspiraatiotekniikkaa.

Osallistujaa pyydetään sitten nauttimaan aamiaistyyppinen ateria, jossa on runsaasti hiilihydraatteja ja rasvaa ja joka koostuu briossista, hillosta, voita ja pirtelöstä, joka on mukautettu Rijkelijkhuizen J. et al., 2008, käyttämästä ateriasta, joka indusoi vahvempaa. beetasoluvasteet (eli insuliini) verrattuna glukoosikuormitukseen ja osoittivat eroja insuliiniherkkyydessä, joten tämän ateriatyypin pitäisi tunnistaa aineenvaihdunnan erot rasvaisuuden perusteella.

Lisäksi on näyttöä siitä, että runsaasti tärkkelystä/vähän kuitua sisältävät ruoat voivat aiheuttaa suurempaa tulehdusta (Manning, Sutherland et al. 2008). Ateriakoostumus on kaikille henkilöille identtinen, mutta hiilihydraattien energiapitoisuus lasketaan osana yksilön lepoaineenvaihduntaa. Tämä mahdollistaa energian saannin standardoinnin kehon painon/koostumuksen erojen mukaan ja heijastaa yksilön energiantarpeita levossa.

Ateria tulee nauttia 15 minuutin sisällä ja verinäytteitä otetaan kanyylistä 15, 30, 60 ja 90 minuutin kohdalla ja sitten joka tunti 6 tunnin ajan aterian nauttimisen jälkeen, jotta voidaan seurata aineenvaihdunnan ja tulehdusmerkkiaineiden muutoksia. Lisäverinäytteitä otetaan 2 ja 6 tuntia aterian jälkeen venepunktiolla tulehdusmerkkien analysoimiseksi, koska on näyttöä siitä, että kanyyli voi stimuloida paikallista tulehdusta, joka häiritsee todellista tulosta.

Vanhentuneet kaasunäytteet RMR:ää varten otetaan myös tunnin välein ja epäsuoraa kalorimetriaa käytetään suhteellisen rasva- ja hiilihydraattiaineenvaihdunnan arvioimiseen vastauksena ateriaan.

Toinen rasvanäyte otetaan 6 tunnin kuluttua aterian tulehduksellisten ja metabolisten vasteiden tutkimiseksi rasvakudoksessa. Toinen verinäyte T-solujen eristämistä varten otetaan myös tässä ajankohdassa vastaavien metabolisten/tulehdusvasteiden tutkimiseksi T-soluissa.

Analyysi:

Koepäivänä kokoverestä analysoidaan valkosolujen määrä, glukoosi ja laktaatti. Plasma- ja seeruminäytteet uutetaan kokoverestä sentrifugoimalla ja säilytetään -80 °C:ssa. Monosyytit ja T-lymfosyytit (valkosolupopulaatiot) eristetään myös kokoverestä myöhempää insuliiniherkkyyden arviointia ja viljelykokeita varten.

Jokaisessa rasvanäytteessä viljellään erillisiä osia joko rasvakudoksesta tai rasvakudoksesta (eristetty muista rasvakudoksen soluista digestiomenetelmällä) ja elatusaine kerätään myöhempiä tutkimuksia varten. mRNA:n ilmentymistä tutkitaan myös rasvakudoksessa ja eristetyissä rasvasoluissa. Jäljelle jääneet solut rasvakudoksesta (SVF) tallennetaan myös myöhempää solupopulaatioiden analysointia varten virtaussytometriaa ja ilmentymis-/eritysanalyysiä varten.