PCM1-JAK2 en neoplasias relacionadas con la terapia
Detección del gen de fusión PCM1-JAK2 en pacientes con síndrome mielodisplásico relacionado con la terapia/pacientes con leucemia mieloide aguda
El término leucemia "relacionada con la terapia" es descriptivo y se basa en el historial de exposición del paciente a agentes citotóxicos. Aunque se implica una relación causal, el mecanismo queda por probar. Se cree que estas neoplasias son la consecuencia directa de eventos mutacionales inducidos por la terapia anterior Los síndromes mielodisplásicos relacionados con la terapia/leucemia mieloide aguda (t-MDS/t-AML) ahora se consideran una sola entidad, denominada neoplasias mieloides relacionadas con la terapia según la clasificación actual de la OMS de la Organización Mundial de la Salud2,. Es un síndrome clínico bien reconocido que ocurre como una complicación tardía después de agentes citotóxicos y radioterapia ionizante en el tratamiento de la mayoría de los tipos de cáncer: linfoma de Hodgkin (LH), linfoma no Hodgkin (LNH), leucemia linfoblástica aguda (LLA), sarcoma, y cáncer de ovario y testicular. La incidencia de t-MDS/AML después de la terapia convencional oscila entre el 0,8 % y el 6,3 % a los 20 años. La mediana de tiempo hasta el desarrollo de t-MDS/AML es de 3 a 5 años, y el riesgo disminuye notablemente después de la primera década. La clasificación de la OMS reconoce dos tipos de t-MDS/AML según la exposición terapéutica causante: un agente alquilante /tipo relacionado con la radiación y un tipo relacionado con el inhibidor de la topoisomerasa II. La t-MDS/AML relacionada con el agente alquilante generalmente aparece de 4 a 7 años después de la exposición al agente mutagénico. La translocación recíproca t(8;9) (p22;p24) entre el brazo corto del cromosoma 8 y el brazo largo del cromosoma 9 es una anomalía recurrente que fusiona la cinasa 2 activada por Janus (JAK2) con el gen del material pericentriolar 1 del autoantígeno humano (PCM1), con rotura y reunión en las bandas 8p11 y 9q3410. Debido a la fusión del gen PCM1-JAK2, los dominios de bobina enrollada de PCM1 median una oligomerización que reúne los dominios JAK2 vinculados que dan como resultado un dominio de tirosina quinasa activado constitutivamente de JAK2. El mecanismo más común para la activación de JAK2 en neoplasias malignas hematológicas es la mutación puntual en la posición 617 (V617F).
Las consecuencias de la activación de JAK2 son la transformación neoplásica y la proliferación celular anormal en diversas neoplasias malignas.
- Por lo tanto, las translocaciones que involucran el locus JAK2 se consideran de importancia oncogénica en leucemias agudas y enfermedades mielodisplásicas/mieloproliferativas.
- Los pacientes con esta anomalía presentan un amplio espectro clínico que va desde enfermedades hematológicas crónicas hasta agudas con apariencia mieloide o linfoide.
Descripción general del estudio
Estado
Intervención / Tratamiento
Descripción detallada
El término leucemia "relacionada con la terapia" es descriptivo y se basa en el historial de exposición del paciente a agentes citotóxicos. Aunque se implica una relación causal, el mecanismo queda por probar. Se piensa que estos neoplasmas son la consecuencia directa de eventos mutacionales inducidos por la terapia previa.
Los síndromes mielodisplásicos/leucemia mieloide aguda relacionados con el tratamiento (t-MDS/t-AML) ahora se consideran una sola entidad, denominada neoplasias mieloides relacionadas con el tratamiento según la clasificación actual de la OMS de la Organización Mundial de la Salud2. Es un síndrome clínico bien reconocido que ocurre como una complicación tardía después de agentes citotóxicos y radioterapia ionizante en el tratamiento de la mayoría de los tipos de cáncer: linfoma de Hodgkin (LH), linfoma no Hodgkin (LNH), leucemia linfoblástica aguda (LLA), sarcoma, y cáncer de ovario y testicular3,4.
Las características de la neoplasia mieloide relacionada con la terapia y el momento de su desarrollo después de un diagnóstico primario dependen de la exposición a agentes específicos, así como de la dosis acumulada y la intensidad de la dosis de la terapia citotóxica anterior 5.
La incidencia de t-MDS/AML después de la terapia convencional oscila entre el 0,8 % y el 6,3 % a los 20 años. La mediana de tiempo hasta el desarrollo de t-MDS/AML es de 3 a 5 años, y el riesgo disminuye notablemente después de la primera década 6.
En la clasificación de la OMS se reconocen dos tipos de t-MDS/AML según la exposición terapéutica causante: un tipo relacionado con el agente alquilante/la radiación y un tipo relacionado con el inhibidor de la topoisomerasa II. La t-MDS/AML relacionada con el agente alquilante generalmente aparece de 4 a 7 años después de la exposición al agente mutagénico.
Aproximadamente dos tercios de los pacientes presentan MDS y el resto LMA con características mielodisplásicas. Los pacientes frecuentemente presentan citopenias. La displasia multilinaje a menudo está presente 7.
En esta forma clásica de leucemia relacionada con la terapia que sigue al tratamiento con agentes alquilantes y/o radioterapia, los hallazgos en la sangre y la médula ósea se asemejan a los observados en el SMD primario, aunque el grado de disgranulopoyesis y dismegacariocitopoyesis suele ser mayor 8.
En contraste con el agente alquilante t-MDS/AML, la AML secundaria a los inhibidores de la topoisomerasa II a menudo no tiene una fase mielodisplásica precedente y se presenta como una leucemia aguda manifiesta, a menudo con un componente monocítico prominente. El período de latencia entre el inicio del tratamiento con inhibidores de la topoisomerasa II y la aparición de la leucemia es breve, con una mediana de 2 a 3 años 9.
La translocación recíproca t(8;9) (p22;p24) entre el brazo corto del cromosoma 8 y el brazo largo del cromosoma 9 es una anomalía recurrente que fusiona la cinasa 2 activada por Janus (JAK2) con el gen del material pericentriolar 1 del autoantígeno humano (PCM1), con rotura y reencuentro en las bandas 8p11 y 9q341010.
PCM1 codifica una proteína grande de 228 kDa que contiene varios dominios enrollados en espiral potenciales en su parte aminoterminal. Esta proteína se localiza en gránulos citoplasmáticos denominados satélites centriolares. Se supone que juega un papel crucial en el ensamblaje de las proteínas centrosómicas, la organización de los microtúbulos y en la progresión del ciclo celular11.
Debido a la fusión del gen PCM1-JAK2, los dominios en espiral de PCM1 median en una oligomerización que reúne los dominios JAK2 vinculados, lo que da como resultado un dominio de tirosina quinasa activado constitutivamente de JAK212, 13.
JAK2 es un miembro de la familia Janus de tirosina quinasas (JAK1, JAK2, JAK3, TYK2). Estas tirosina quinasas no receptoras juegan un papel importante en varias vías de transducción de señales que regulan la supervivencia, proliferación, diferenciación y apoptosis celular. La proteína está formada por siete dominios. El dominio JH2 (dominio pseudoquinasa, dominio tipo quinasa) está ubicado en el exón 14 y tiene una función autorreguladora negativa esencial14.
El mecanismo más común para la activación de JAK2 en neoplasias malignas hematológicas es la mutación puntual en la posición 617 (V617F).
Las consecuencias de la activación de JAK2 son la transformación neoplásica y la proliferación celular anormal en diversas neoplasias malignas15.
- Por lo tanto, las translocaciones que involucran el locus JAK2 se consideran de importancia oncogénica en leucemias agudas y enfermedades mielodisplásicas/mieloproliferativas.
- Los pacientes con esta anomalía presentan un amplio espectro clínico que va desde enfermedades hematológicas crónicas hasta agudas con apariencia mieloide o linfoide 16.
La hibridación in situ con fluorescencia (FISH) es un tipo de técnica citogenética que permite la visualización de secuencias de ácido nucleico definidas en sitios celulares o cromosómicos particulares mediante la hibridación de secuencias de sonda marcadas con fluorescencia complementarias dentro de células en metafase o interfase intactas.
Las sondas fluorescentes son ácidos nucleicos marcados con grupos fluorescentes y pueden unirse a secuencias específicas de ADN/ARN. La microscopía de fluorescencia se puede utilizar para averiguar dónde se une la sonda fluorescente a los cromosomas17.
Tipo de estudio
Inscripción (Anticipado)
Criterios de participación
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
- Niño
- Adulto
- Adulto Mayor
Acepta Voluntarios Saludables
Géneros elegibles para el estudio
Método de muestreo
Población de estudio
Descripción
Criterios de inclusión:
• Síndromes mielodisplásicos: el diagnóstico de SMD debe confirmarse mediante un aspirado y/o biopsia de médula ósea: el recuento de blastos debe ser < 20%; los pacientes con cualquier puntuación de pronóstico internacional (IPSS) son elegibles; los pacientes con IPSS bajo o intermedio (INT)-1 deben tener un recuento de plaquetas < 50x10⁹/L y/o recuento absoluto de neutrófilos (RAN) < 50x10⁹/L.
- Leucemia mieloide aguda con displasia multilinaje: el diagnóstico de AML-TLD debe confirmarse mediante un aspirado y/o biopsia de médula ósea NOTA: debe haber evidencia de >= 20 % de blastos en la revisión del aspirado y/o biopsia de médula ósea; AML-TLD se interpretará para incluir a pacientes previamente diagnosticados según los criterios franco-estadounidense-británicos (FAB) como anemia refractaria con exceso de blastos en transformación (RAEB-t), así como pacientes sin antecedentes de trastorno hematológico previo que tienen AML que cumple con los criterios para AML-TLD según los criterios de la Organización Mundial de la Salud (OMS); los pacientes con AML-TLD deben tener un recuento de glóbulos blancos (WBC) = < 30x10⁹/L documentado dentro de las 4 semanas anteriores al ingreso al estudio (se tomarán dos conjuntos de conteos con 2 semanas de diferencia); los pacientes cuyos glóbulos blancos se hayan duplicado dentro de este período de tiempo y sean mayores de 20x10⁹/L en el momento de la selección no serán elegibles
- Los pacientes han iniciado terapia (agentes citotóxicos y radioterapia ionizante) hace al menos 2 años.
Criterio de exclusión:
- otras neoplasias relacionadas con la terapia distintas del síndrome mieloplásico o la leucemia mieloide aguda
Plan de estudios
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
- Modelos observacionales: Otro
- Perspectivas temporales: Transversal
Cohortes e Intervenciones
Grupo / Cohorte |
Intervención / Tratamiento |
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SMD/LMA de Denovo
Pacientes con neoplasia mieloide de novo, ya sea síndrome mielodisplásico y/o leucemia mieloide aguda, que se diagnostican mediante hemograma completo, frotis de sangre, aspirado de médula ósea, biopsia de médula ósea, inmunofenotipado y biopsia de médula ósea con estos criterios de inclusión. • Síndromes mielodisplásicos: el diagnóstico de SMD debe confirmarse mediante un aspirado y/o biopsia de médula ósea: el recuento de blastos debe ser < 20 %; • Leucemia mieloide aguda con displasia multilinaje: el diagnóstico de AML-TLD debe confirmarse mediante un aspirado y/o biopsia de médula ósea NOTA: debe haber evidencia de >= 20 % de blastos en la revisión del aspirado y/o biopsia de médula ósea ; |
Las muestras se deshidratan en etanol (una serie al 50, 80 y 95 % (v/v), exposición durante 3 min a 300 µl de etanol en cada concentración) antes de la hibridación. Las muestras en cintas se hibridan durante 15 minutos a 55 °C utilizando una cámara de incubación de portaobjetos sellada contra la humedad. Brevemente, se aplican volúmenes de 500 µl de tampón de hibridación (NaCl 0,7 M, Tris 0,1 M [pH 8,0], dodecilsulfato de sodio al 0,1 %, EDTA 10 mM, que contiene la sonda, precalentada a 55 ºC) a la superficie de la cinta y a la cámara. la tapa está sellada, creando un ambiente húmedo y de temperatura controlada dentro de la cámara. Después de 15 min, se retira la tapa y las muestras se enjuagan brevemente con tampón de hibridación sin sonda, precalentado a 55ºC. Las células hibridadas en las cintas se contrastan durante 10 minutos en la oscuridad con ~30 µl de medio de montaje que contiene 1,5 µg ml-1 de 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI). Luego, las cintas se montan con un cubreobjetos y se examinan con un microscopio de fluorescencia. |
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MDS/LMA relacionados con la terapia
Detección del gen de fusión PCM1-JAK2 en pacientes con síndrome mielodisplásico relacionado con la terapia/pacientes con leucemia mieloide aguda
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Las muestras se deshidratan en etanol (una serie al 50, 80 y 95 % (v/v), exposición durante 3 min a 300 µl de etanol en cada concentración) antes de la hibridación. Las muestras en cintas se hibridan durante 15 minutos a 55 °C utilizando una cámara de incubación de portaobjetos sellada contra la humedad. Brevemente, se aplican volúmenes de 500 µl de tampón de hibridación (NaCl 0,7 M, Tris 0,1 M [pH 8,0], dodecilsulfato de sodio al 0,1 %, EDTA 10 mM, que contiene la sonda, precalentada a 55 ºC) a la superficie de la cinta y a la cámara. la tapa está sellada, creando un ambiente húmedo y de temperatura controlada dentro de la cámara. Después de 15 min, se retira la tapa y las muestras se enjuagan brevemente con tampón de hibridación sin sonda, precalentado a 55ºC. Las células hibridadas en las cintas se contrastan durante 10 minutos en la oscuridad con ~30 µl de medio de montaje que contiene 1,5 µg ml-1 de 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI). Luego, las cintas se montan con un cubreobjetos y se examinan con un microscopio de fluorescencia. |
¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Detección del gen PCM1-JAK2fusion
Periodo de tiempo: 24 meses
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Usando muestras frescas de pacientes con neoplasia mieloide para buscar el gen de fusión PCM1-JAK2 en los 2 tipos de neoplasia mieloide relacionada con thaerap, estudiando la relación entre PCM1-JAK2 y la intensidad de la dosis y el tiempo de exposición, y estudiando la relación entre PCM1-JAK2 y otros citogenéticos anomalías utilizando la técnica FISH y
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24 meses
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Colaboradores e Investigadores
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Fechas importantes del estudio
Inicio del estudio (Anticipado)
Finalización primaria (Anticipado)
Finalización del estudio (Anticipado)
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- PCM1-JAK2 fusion gene
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Estudia un producto farmacéutico regulado por la FDA de EE. UU.
Estudia un producto de dispositivo regulado por la FDA de EE. UU.
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