PCM1-JAK2 em Neoplasias Relacionadas à Terapia
Detecção do gene de fusão PCM1-JAK2 em pacientes com síndrome mielodisplásica relacionada à terapia/pacientes com leucemia mielóide aguda
O termo leucemia "relacionada à terapia" é descritivo e baseia-se na história de exposição do paciente a agentes citotóxicos. Embora uma relação causal esteja implícita, o mecanismo ainda precisa ser comprovado. Acredita-se que essas neoplasias sejam a consequência direta de eventos mutacionais induzidos pela terapia anterior. a classificação atual da OMS da Organização Mundial da Saúde2,. É uma síndrome clínica bem reconhecida que ocorre como uma complicação tardia após agentes citotóxicos e radioterapia ionizante no tratamento da maioria dos tipos de câncer: linfoma de Hodgkin (LH), linfoma não-Hodgkin (NHL), leucemia linfoblástica aguda (ALL), sarcoma, e câncer de ovário e testículo A incidência de t-MDS/AML após a terapia convencional varia de 0,8% a 6,3% em 20 anos. O tempo médio para o desenvolvimento de t-MDS/AML é de 3 a 5 anos, com o risco diminuindo acentuadamente após a primeira década Dois tipos de t-MDS/AML são reconhecidos na classificação da OMS, dependendo da exposição terapêutica causadora: um agente alquilante /tipo relacionado à radiação e um tipo relacionado ao inibidor da topoisomerase II. O t-MDS/AML relacionado ao agente alquilante geralmente aparece 4 a 7 anos após a exposição ao agente mutagênico. A translocação recíproca t(8;9) (p22;p24) entre o braço curto do cromossomo 8 e o braço longo do cromossomo 9 é uma anormalidade recorrente que funde a quinase 2 ativada por Janus (JAK2) ao gene do material pericentriolar 1 do autoantígeno humano (PCM1), com quebra e reunião nas bandas 8p11 e 9q3410 uma oligomerização que reúne os domínios JAK2 ligados, resultando em um domínio de tirosina quinase constitutivamente ativado de JAK2. O mecanismo mais comum para a ativação de JAK2 em malignidades hematológicas é a mutação pontual na posição 617 (V617F).
As consequências da ativação de JAK2 são transformação neoplásica e proliferação celular anormal em várias malignidades
- Assim, as translocações envolvendo o locus JAK2 são consideradas de importância oncogênica em leucemias agudas e doenças mielodisplásicas/mieloproliferativas.
- Pacientes com esta anormalidade apresentam amplo espectro clínico variando de doenças hematológicas crônicas a agudas com aspecto mielóide ou linfóide
Visão geral do estudo
Status
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
O termo leucemia "relacionada à terapia" é descritivo e baseia-se na história de exposição do paciente a agentes citotóxicos. Embora uma relação causal esteja implícita, o mecanismo ainda precisa ser comprovado. Acredita-se que essas neoplasias sejam consequência direta de eventos mutacionais induzidos pela terapia anterior.
As síndromes mielodisplásicas relacionadas à terapia/leucemia mielóide aguda (t-MDS/t-AML) são agora consideradas uma entidade única, denominadas neoplasias mielóides relacionadas à terapia com base na classificação atual da OMS da Organização Mundial da Saúde2,. É uma síndrome clínica bem reconhecida que ocorre como uma complicação tardia após agentes citotóxicos e radioterapia ionizante no tratamento da maioria dos tipos de câncer: linfoma de Hodgkin (LH), linfoma não-Hodgkin (NHL), leucemia linfoblástica aguda (ALL), sarcoma, e câncer de ovário e testículo3,4.
As características da neoplasia mielóide relacionada à terapia e o tempo de seu desenvolvimento após um diagnóstico primário dependem da exposição a agentes específicos, bem como da dose cumulativa e da intensidade da dose da terapia citotóxica anterior 5.
A incidência de t-MDS/AML após a terapia convencional varia de 0,8% a 6,3% em 20 anos. O tempo médio para o desenvolvimento de t-MDS/AML é de 3 a 5 anos, com o risco diminuindo acentuadamente após a primeira década 6.
Dois tipos de t-MDS/AML são reconhecidos na classificação da OMS, dependendo da exposição terapêutica causadora: um agente alquilante/tipo relacionado à radiação e um tipo relacionado ao inibidor da topoisomerase II. O t-MDS/AML relacionado ao agente alquilante geralmente aparece 4 a 7 anos após a exposição ao agente mutagênico.
Aproximadamente dois terços dos pacientes apresentam SMD e o restante LMA com características mielodisplásicas. Os pacientes frequentemente apresentam citopenias. A displasia multilinhagem está frequentemente presente 7.
Nesta forma clássica de leucemia relacionada à terapia que segue o tratamento com agentes alquilantes e/ou radioterapia, os achados sanguíneos e da medula óssea se assemelham aos observados na SMD primária, embora o grau de disgranulopoiese e dismegacariocitopoiese seja tipicamente maior 8.
Em contraste com o agente alquilante t-MDS/AML, a AML secundária aos inibidores da topoisomerase II geralmente não tem uma fase mielodisplásica precedente e se apresenta como leucemia aguda evidente, muitas vezes com um componente monocítico proeminente. O período de latência entre o início do tratamento com inibidores da topoisomerase II e o aparecimento da leucemia é breve, com mediana de 2 a 3 anos 9.
A translocação recíproca t(8;9) (p22;p24) entre o braço curto do cromossomo 8 e o braço longo do cromossomo 9 é uma anormalidade recorrente que funde a quinase 2 ativada por Janus (JAK2) ao gene 1 do material pericentriolar humano autoantígeno (PCM1) , com quebra e reunião nas bandas 8p11 e 9q341010.
PCM1 codifica uma grande proteína de 228kDa contendo vários potenciais domínios enrolados em sua parte aminoterminal. Esta proteína está localizada em grânulos citoplasmáticos denominados satélites centriolares. Supõe-se que desempenhe um papel crucial na montagem das proteínas centrossomais, na organização dos microtúbulos e na progressão do ciclo celular11.
Devido à fusão do gene PCM1-JAK2, os domínios espiralados de PCM1 medeiam uma oligomerização que reúne os domínios JAK2 ligados, resultando em um domínio de tirosina quinase constitutivamente ativado de JAK212, 13.
JAK2 é um membro da família Janus de tirosina quinases (JAK1, JAK2, JAK3, TYK2). Essas tirosina quinases não receptoras desempenham um papel significativo em várias vias de transdução de sinal que regulam a sobrevivência celular, proliferação, diferenciação e apoptose. A proteína é formada por sete domínios. O domínio JH2 (domínio pseudoquinase, domínio semelhante a quinase) está localizado no exon 14 e tem uma função autorregulatória negativa essencial14.
O mecanismo mais comum para a ativação de JAK2 em malignidades hematológicas é a mutação pontual na posição 617 (V617F).
As consequências da ativação de JAK2 são transformação neoplásica e proliferação celular anormal em várias malignidades15.
- Assim, as translocações envolvendo o locus JAK2 são consideradas de importância oncogênica em leucemias agudas e doenças mielodisplásicas/mieloproliferativas.
- Pacientes com essa anormalidade apresentam amplo espectro clínico, variando de doenças hematológicas crônicas a agudas com aspecto mielóide ou linfoide 16.
A hibridação fluorescente in situ (FISH) é um tipo de técnica citogenética que permite a visualização de sequências de ácidos nucleicos definidas em determinados locais celulares ou cromossômicos por hibridização de sequências de sondas marcadas com fluorescência complementares em células metafásicas ou interfásicas intactas.
As sondas fluorescentes são ácidos nucleicos marcados com grupos fluorescentes e podem se ligar a sequências específicas de DNA/RNA. A microscopia de fluorescência pode ser usada para descobrir onde a sonda fluorescente está ligada aos cromossomos17.
Tipo de estudo
Inscrição (Antecipado)
Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
- Filho
- Adulto
- Adulto mais velho
Aceita Voluntários Saudáveis
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Método de amostragem
População do estudo
Descrição
Critério de inclusão:
• Síndromes mielodisplásicas: o diagnóstico de SMD deve ser confirmado por aspirado e/ou biópsia de medula óssea: contagem de blastos deve ser < 20%; pacientes com qualquer Pontuação Prognóstica Internacional (IPSS) são elegíveis; pacientes com IPSS baixo ou intermediário (INT)-1 devem ter uma contagem de plaquetas < 50x10⁹/L e/ou contagem absoluta de neutrófilos (ANC) < 50x10⁹/L.
- Leucemia mielóide aguda com displasia multilinhagem: o diagnóstico de LMA-TLD deve ser confirmado por aspirado e/ou biópsia de medula óssea OBSERVAÇÃO: deve haver evidência de >= 20% de blastos na revisão do aspirado e/ou biópsia de medula óssea; AML-TLD será interpretado para incluir pacientes anteriormente diagnosticados pelos critérios franco-americanos-britânicos (FAB) como anemia refratária com excesso de blastos em transformação (RAEB-t), bem como pacientes sem história de distúrbio hematológico antecedente que têm AML que atende aos critérios para AML-TLD pelos critérios da Organização Mundial da Saúde (OMS); os pacientes com LMA-TLD devem ter um glóbulo branco (WBC) = < 30x10⁹/L documentado dentro de 4 semanas antes da entrada no estudo (serão feitos dois conjuntos de contagens com 2 semanas de intervalo); pacientes cuja WBC dobrou dentro desse período de tempo e é maior que 20x10⁹/L no momento da triagem não serão elegíveis
- Os pacientes iniciaram a terapia (agentes citotóxicos e radioterapia ionizante) há pelo menos 2 anos.
Critério de exclusão:
- outras neoplasias relacionadas à terapia, exceto síndrome mieloplásica ou leucemia mielóide aguda
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Modelos de observação: Outro
- Perspectivas de Tempo: Transversal
Coortes e Intervenções
Grupo / Coorte |
Intervenção / Tratamento |
|---|---|
|
Denovo MDS/ AML
Pacientes com neoplasia mielóide de novo ou síndrome mielodisplásica e/ou leucemia mielóide aguda que são diagnosticados por hemograma completo, esfregaço sanguíneo, aspirado de medula óssea, biópsia de medula óssea, imunofenotipagem e biópsia de medula óssea com estes critérios de inclusão • Síndromes mielodisplásicas: o diagnóstico de SMD deve ser confirmado por aspirado e/ou biópsia de medula óssea: contagem de blastos deve ser < 20%; • Leucemia mielóide aguda com displasia multilinhagem: o diagnóstico de LMA-TLD deve ser confirmado por aspirado e/ou biópsia de medula óssea OBSERVAÇÃO: deve haver evidência de >= 20% de blastos na revisão do aspirado e/ou biópsia de medula óssea ; |
As amostras são desidratadas em etanol (uma série de 50, 80 e 95% (v/v), exposição por 3 min a 300 µl de etanol em cada concentração) antes da hibridização. Amostras em fitas são hibridizadas por 15 minutos a 55°C usando uma câmara de incubação de lâmina vedada contra umidade. Resumidamente, volumes de 500 µl de tampão de hibridação (0,7 M NaCl, 0,1 M Tris [pH 8,0], 0,1% dodecil sulfato de sódio, 10 mM EDTA, contendo sonda, pré-aquecido a 55 ºC) são aplicados à superfície da fita e da câmara a tampa é selada, criando um ambiente úmido e com temperatura controlada dentro da câmara. Após 15 min, a tampa é removida e as amostras são brevemente enxaguadas com tampão de hibridização isento de sonda, pré-aquecido a 55ºC. As células hibridizadas em fitas são contrastadas por 10 minutos no escuro com ~30 µl de meio de montagem contendo 1,5 µg ml-1 de 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI). Em seguida, as fitas são montadas com uma lamela e examinadas usando um microscópio de fluorescência. |
|
MDS/AML relacionada à terapia
Detecção do gene de fusão PCM1-JAK2 em pacientes com síndrome mielodisplásica relacionada à terapia / pacientes com leucemia mielóide aguda
|
As amostras são desidratadas em etanol (uma série de 50, 80 e 95% (v/v), exposição por 3 min a 300 µl de etanol em cada concentração) antes da hibridização. Amostras em fitas são hibridizadas por 15 minutos a 55°C usando uma câmara de incubação de lâmina vedada contra umidade. Resumidamente, volumes de 500 µl de tampão de hibridação (0,7 M NaCl, 0,1 M Tris [pH 8,0], 0,1% dodecil sulfato de sódio, 10 mM EDTA, contendo sonda, pré-aquecido a 55 ºC) são aplicados à superfície da fita e da câmara a tampa é selada, criando um ambiente úmido e com temperatura controlada dentro da câmara. Após 15 min, a tampa é removida e as amostras são brevemente enxaguadas com tampão de hibridização isento de sonda, pré-aquecido a 55ºC. As células hibridizadas em fitas são contrastadas por 10 minutos no escuro com ~30 µl de meio de montagem contendo 1,5 µg ml-1 de 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI). Em seguida, as fitas são montadas com uma lamela e examinadas usando um microscópio de fluorescência. |
O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
|
Detecção do gene de fusão PCM1-JAK2
Prazo: 24 meses
|
Usando amostra fresca de pacientes com neoplasia mielóide para procurar o gene de fusão PCM1-JAK2 nos 2 tipos de neoplasia mielóide relacionada a thaerap, estudando a relação entre PCM1-JAK2 e intensidade da dose e tempo de exposição, e estudando a relação entre PCM1-JAK2 e outros citogenéticos anormalidades usando a técnica de FISH e
|
24 meses
|
Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Antecipado)
Conclusão Primária (Antecipado)
Conclusão do estudo (Antecipado)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Outros números de identificação do estudo
- PCM1-JAK2 fusion gene
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
Essas informações foram obtidas diretamente do site clinicaltrials.gov sem nenhuma alteração. Se você tiver alguma solicitação para alterar, remover ou atualizar os detalhes do seu estudo, entre em contato com register@clinicaltrials.gov. Assim que uma alteração for implementada em clinicaltrials.gov, ela também será atualizada automaticamente em nosso site .