PCM1-JAK2 nelle neoplasie correlate alla terapia
Rilevamento del gene di fusione PCM1-JAK2 in pazienti con sindrome mielodisplastica correlata alla terapia/pazienti con leucemia mieloide acuta
Il termine leucemia "correlata alla terapia" è descrittivo e si basa sulla storia di esposizione di un paziente ad agenti citotossici. Sebbene sia implicita una relazione causale, il meccanismo resta da dimostrare. Si pensa che queste neoplasie siano la diretta conseguenza di eventi mutazionali indotti dalla precedente terapia Le sindromi mielodisplastiche correlate alla terapia/leucemia mieloide acuta (t-MDS/t-AML) sono ora considerate un'unica entità, chiamate neoplasie mieloidi correlate alla terapia sulla base di l'attuale classificazione OMS dell'Organizzazione Mondiale della Sanità2,. È una sindrome clinica ben nota che si verifica come complicanza tardiva dopo agenti citotossici e radioterapia ionizzante nel trattamento della maggior parte dei tipi di cancro: linfoma di Hodgkin (HL), linfoma non Hodgkin (NHL), leucemia linfoblastica acuta (ALL), sarcoma, e cancro ovarico e testicolare L'incidenza di t-MDS/AML dopo la terapia convenzionale varia dallo 0,8% al 6,3% a 20 anni. Il tempo mediano allo sviluppo di t-MDS/AML è compreso tra 3 e 5 anni, con il rischio che diminuisce notevolmente dopo la prima decade Due tipi di t-MDS/AML sono riconosciuti nella classificazione dell'OMS a seconda dell'esposizione terapeutica causale: un agente alchilante /tipo correlato alle radiazioni e un tipo correlato all'inibitore della topoisomerasi II. La t-MDS/AML correlata all'agente alchilante di solito appare da 4 a 7 anni dopo l'esposizione all'agente mutageno. La traslocazione reciproca t(8;9) (p22;p24) tra il braccio corto del cromosoma 8 e il braccio lungo del cromosoma 9 è un'anomalia ricorrente che fonde la chinasi 2 attivata da Janus (JAK2) con il gene del materiale 1 pericentriolare dell'autoantigene umano (PCM1), con rottura e ricongiungimento alle bande 8p11 e 9q3410A causa della fusione del gene PCM1-JAK2, i domini coiled-coil di PCM1 mediano un'oligomerizzazione che riunisce i domini JAK2 collegati risultando in un dominio tirosina chinasi costitutivamente attivato di JAK2 Il meccanismo più comune per l'attivazione di JAK2 nelle neoplasie ematologiche è la mutazione puntiforme in posizione 617 (V617F).
Le conseguenze dell'attivazione di JAK2 sono la trasformazione neoplastica e la proliferazione cellulare anormale in varie neoplasie
- Pertanto, le traslocazioni che coinvolgono il locus JAK2 sono considerate di importanza oncogenica nelle leucemie acute e nelle malattie mielodisplastiche/mieloproliferative.
- I pazienti con questa anomalia presentano un ampio spettro clinico che va dalle malattie ematologiche croniche a quelle acute con aspetto mieloide o linfoide
Panoramica dello studio
Stato
Descrizione dettagliata
Il termine leucemia "correlata alla terapia" è descrittivo e si basa sulla storia di esposizione di un paziente ad agenti citotossici. Sebbene sia implicita una relazione causale, il meccanismo resta da dimostrare. Si ritiene che queste neoplasie siano la diretta conseguenza di eventi mutazionali indotti dalla precedente terapia.
Le sindromi mielodisplastiche correlate alla terapia/leucemia mieloide acuta (t-MDS/t-AML) sono ora considerate una singola entità, chiamate neoplasie mieloidi correlate alla terapia sulla base dell'attuale classificazione OMS dell'Organizzazione Mondiale della Sanità2,. È una sindrome clinica ben nota che si verifica come complicanza tardiva dopo agenti citotossici e radioterapia ionizzante nel trattamento della maggior parte dei tipi di cancro: linfoma di Hodgkin (HL), linfoma non Hodgkin (NHL), leucemia linfoblastica acuta (ALL), sarcoma, e cancro alle ovaie e ai testicoli3,4.
Le caratteristiche della neoplasia mieloide correlata alla terapia e la tempistica del suo sviluppo dopo una diagnosi primaria dipendono dall'esposizione ad agenti specifici, nonché dalla dose cumulativa e dall'intensità della dose della precedente terapia citotossica 5.
L'incidenza di t-MDS/AML dopo la terapia convenzionale varia dallo 0,8% al 6,3% a 20 anni. Il tempo mediano allo sviluppo di t-MDS/AML è compreso tra 3 e 5 anni, con il rischio che diminuisce notevolmente dopo la prima decade 6.
Nella classificazione dell'OMS sono riconosciuti due tipi di t-MDS/AML a seconda dell'esposizione terapeutica causale: un tipo correlato all'agente alchilante/radiazioni e un tipo correlato all'inibitore della topoisomerasi II. La t-MDS/AML correlata all'agente alchilante di solito appare da 4 a 7 anni dopo l'esposizione all'agente mutageno.
Circa due terzi dei pazienti presentano SMD e il resto presenta AML con caratteristiche mielodisplastiche. I pazienti spesso presentano citopenie. La displasia multilineare è spesso presente 7.
In questa forma classica di leucemia correlata alla terapia che segue il trattamento con agenti alchilanti e/o radioterapia, i risultati del sangue e del midollo osseo assomigliano a quelli osservati nella MDS primaria, sebbene il grado di disgranulopoiesi e dismegacariocitopoiesi sia tipicamente maggiore 8.
Contrariamente all'agente alchilante t-MDS/AML, l'AML secondaria agli inibitori della topoisomerasi II spesso non ha una precedente fase mielodisplastica e si presenta come leucemia acuta conclamata, spesso con una componente monocitica prominente. Il periodo di latenza tra l'inizio del trattamento con inibitori della topoisomerasi II e l'insorgenza della leucemia è breve, con una mediana di 2-3 anni9.
La traslocazione reciproca t(8;9) (p22;p24) tra il braccio corto del cromosoma 8 e il braccio lungo del cromosoma 9 è un'anomalia ricorrente che fonde la chinasi 2 attivata da Janus (JAK2) al gene del materiale pericentriolare dell'autoantigene umano 1 (PCM1), con rottura e ricongiungimento alle bande 8p11 e 9q341010.
PCM1 codifica una grande proteina di 228kDa contenente diversi potenziali domini a spirale nella sua parte amminoterminale. Questa proteina è localizzata in granuli citoplasmatici indicati come satelliti centriolari. Si suppone che svolga un ruolo cruciale nell'assemblaggio delle proteine centrosomiali, nell'organizzazione dei microtubuli e nella progressione del ciclo cellulare11.
A causa della fusione del gene PCM1-JAK2, i domini coiled-coil di PCM1 mediano un'oligomerizzazione che riunisce i domini JAK2 collegati risultando in un dominio tirosina chinasi costitutivamente attivato di JAK212, 13.
JAK2 è un membro della famiglia Janus delle tirosina chinasi (JAK1, JAK2, JAK3, TYK2). Queste tirosina chinasi non recettoriali svolgono un ruolo significativo in varie vie di trasduzione del segnale che regolano la sopravvivenza cellulare, la proliferazione, la differenziazione e l'apoptosi. La proteina è formata da sette domini. Il dominio JH2 (dominio pseudochinasico, dominio simile alla chinasi) si trova nell'esone 14 e ha un'essenziale funzione di autoregolazione negativa14.
Il meccanismo più comune per l'attivazione di JAK2 nelle neoplasie ematologiche è la mutazione puntiforme in posizione 617 (V617F).
Le conseguenze dell'attivazione di JAK2 sono la trasformazione neoplastica e la proliferazione cellulare anomala in vari tumori maligni15.
- Pertanto, le traslocazioni che coinvolgono il locus JAK2 sono considerate di importanza oncogenica nelle leucemie acute e nelle malattie mielodisplastiche/mieloproliferative.
- I pazienti con questa anomalia presentano un ampio spettro clinico che va dalle malattie ematologiche croniche a quelle acute con aspetto mieloide o linfoide 16.
L'ibridazione fluorescente in situ (FISH) è un tipo di tecnica citogenetica che consente la visualizzazione di sequenze di acido nucleico definite in particolari siti cellulari o cromosomici mediante ibridazione di sequenze di sonde marcate fluorescentmente complementari all'interno di cellule metafasiche o interfasiche intatte.
Le sonde fluorescenti sono acido nucleico marcato con gruppi fluorescenti e possono legarsi a specifiche sequenze di DNA/RNA. La microscopia a fluorescenza può essere utilizzata per scoprire dove la sonda fluorescente è legata ai cromosomi17.
Tipo di studio
Iscrizione (Anticipato)
Criteri di partecipazione
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
- Bambino
- Adulto
- Adulto più anziano
Accetta volontari sani
Sessi ammissibili allo studio
Metodo di campionamento
Popolazione di studio
Descrizione
Criterio di inclusione:
• Sindromi mielodisplastiche: la diagnosi di MDS deve essere confermata da un aspirato midollare e/o da una biopsia: la conta dei blasti deve essere < 20%; i pazienti con qualsiasi punteggio prognostico internazionale (IPSS) sono eleggibili; i pazienti con IPSS basso o intermedio (INT)-1 devono avere una conta piastrinica < 50x10⁹/L e/o una conta assoluta dei neutrofili (ANC) < 50x10⁹/L.
- Leucemia mieloide acuta con displasia multilineare: la diagnosi di AML-TLD deve essere confermata da un aspirato midollare e/o biopsia NOTA: ci deve essere evidenza di blasti >= 20% all'esame dell'aspirato midollare e/o biopsia; L'AML-TLD sarà interpretato per includere i pazienti precedentemente diagnosticati secondo i criteri franco-americano-britannico (FAB) come anemia refrattaria con eccesso di blasti in trasformazione (RAEB-t), così come i pazienti senza storia di disturbo ematologico antecedente che hanno AML che soddisfa i criteri per AML-TLD secondo i criteri dell'Organizzazione mondiale della sanità (OMS); i pazienti con AML-TLD devono avere un numero di globuli bianchi (WBC) =<30x10⁹/L documentato entro 4 settimane prima dell'ingresso nello studio (verranno prese due serie di conteggi a distanza di 2 settimane); i pazienti i cui WBC sono raddoppiati entro questo periodo di tempo ed è maggiore di 20x10⁹/L al momento dello screening non saranno idonei
- I pazienti hanno iniziato la terapia (agenti citotossici e radioterapia ionizzante) da almeno 2 anni.
Criteri di esclusione:
- altre neoplasie correlate alla terapia diverse dalla sindrome mielodplastica o dalla leucemia mieloide acuta
Piano di studio
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
- Modelli osservazionali: Altro
- Prospettive temporali: Trasversale
Coorti e interventi
Gruppo / Coorte |
Intervento / Trattamento |
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Denovo MDS/AML
Pazienti con neoplasia mieloide de-novo o sindrome mielodisplastica e/o leucemia mieloide acuta che vengono diagnosticati mediante esame emocromocitometrico completo, striscio ematico, aspirato midollare, biopsia midollare, immunofenotipizzazione e biopsia midollare con questi criteri di inclusione • Sindromi mielodisplastiche: la diagnosi di MDS deve essere confermata da un aspirato midollare e/o da una biopsia: la conta dei blasti deve essere < 20%; • Leucemia mieloide acuta con displasia multilineare: la diagnosi di AML-TLD deve essere confermata da un aspirato midollare e/o biopsia NOTA: ci deve essere evidenza di >= 20% di blasti all'esame dell'aspirato midollare e/o biopsia ; |
I campioni vengono disidratati in etanolo (serie 50, 80 e 95% (v/v), esposizione per 3 minuti a 300 µl di etanolo a ciascuna concentrazione) prima dell'ibridazione. I campioni su nastri vengono ibridati per 15 minuti a 55°C utilizzando una camera di incubazione per vetrini a tenuta stagna. In breve, volumi di 500 µl di tampone di ibridazione (0,7 M NaCl, 0,1 M Tris [pH 8,0], 0,1% sodio dodecil solfato, 10 mM EDTA, sonda contenente, preriscaldato a 55 ºC) vengono applicati alla superficie del nastro e alla camera il coperchio è sigillato, creando un ambiente umido ea temperatura controllata all'interno della camera. Dopo 15 minuti, il coperchio viene rimosso e i campioni vengono brevemente risciacquati con tampone di ibridazione privo di sonda, preriscaldato a 55ºC. Le cellule ibridate su nastri vengono controcolorate per 10 minuti al buio con ~ 30 µl di mezzo di montaggio contenente 1,5 µg ml-1 4',6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI). Quindi i nastri vengono montati con un coprioggetto ed esaminati utilizzando un microscopio a fluorescenza. |
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MDS/LMA correlati alla terapia
Rilevamento del gene di fusione PCM1-JAK2 in pazienti con sindrome mielodisplastica correlata alla terapia/pazienti con leucemia mieloide acuta
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I campioni vengono disidratati in etanolo (serie 50, 80 e 95% (v/v), esposizione per 3 minuti a 300 µl di etanolo a ciascuna concentrazione) prima dell'ibridazione. I campioni su nastri vengono ibridati per 15 minuti a 55°C utilizzando una camera di incubazione per vetrini a tenuta stagna. In breve, volumi di 500 µl di tampone di ibridazione (0,7 M NaCl, 0,1 M Tris [pH 8,0], 0,1% sodio dodecil solfato, 10 mM EDTA, sonda contenente, preriscaldato a 55 ºC) vengono applicati alla superficie del nastro e alla camera il coperchio è sigillato, creando un ambiente umido ea temperatura controllata all'interno della camera. Dopo 15 minuti, il coperchio viene rimosso e i campioni vengono brevemente risciacquati con tampone di ibridazione privo di sonda, preriscaldato a 55ºC. Le cellule ibridate su nastri vengono controcolorate per 10 minuti al buio con ~ 30 µl di mezzo di montaggio contenente 1,5 µg ml-1 4',6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI). Quindi i nastri vengono montati con un coprioggetto ed esaminati utilizzando un microscopio a fluorescenza. |
Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
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Rilevamento del gene di fusione PCM1-JAK2
Lasso di tempo: 24 mesi
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Utilizzando campioni freschi di pazienti con neoplasia mieloide per cercare il gene di fusione PCM1-JAK2 nei 2 tipi di neoplasia mieloide correlata a thaerap, studiando la relazione tra PCM1-JAK2 e l'intensità della dose e il tempo di esposizione e studiando la relazione tra PCM1-JAK2 e altri citogenetici anomalie utilizzando la tecnica FISH e
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24 mesi
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Collaboratori e investigatori
Sponsor
Studiare le date dei record
Studia le date principali
Inizio studio (Anticipato)
Completamento primario (Anticipato)
Completamento dello studio (Anticipato)
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
Primo Inserito (Effettivo)
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (Effettivo)
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
Ultimo verificato
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Altri numeri di identificazione dello studio
- PCM1-JAK2 fusion gene
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