PCM1-JAK2 w nowotworach związanych z terapią
Wykrywanie genu fuzyjnego PCM1-JAK2 u pacjentów z zespołem mielodysplastycznym związanym z terapią / pacjentami z ostrą białaczką szpikową
Termin białaczka „związana z terapią” jest opisowy i opiera się na historii narażenia pacjenta na środki cytotoksyczne. Chociaż sugeruje się związek przyczynowy, mechanizm pozostaje do udowodnienia. Uważa się, że nowotwory te są bezpośrednią konsekwencją zdarzeń mutacyjnych wywołanych wcześniejszą terapią. Związane z terapią zespoły mielodysplastyczne / ostra białaczka szpikowa (t-MDS / t-AML) są obecnie uważane za jedną jednostkę, zwaną nowotworami szpiku związanymi z terapią, w oparciu o aktualna klasyfikacja Światowej Organizacji Zdrowia WHO2,. Jest dobrze poznanym zespołem klinicznym występującym jako późne powikłanie po lekach cytotoksycznych i radioterapii jonizującej w leczeniu większości typów nowotworów: chłoniak Hodgkina (HL), chłoniak nieziarniczy (NHL), ostra białaczka limfoblastyczna (ALL), mięsak, oraz rak jajnika i jąder Częstość występowania t-MDS/AML po konwencjonalnej terapii waha się od 0,8% do 6,3% po 20 latach. Mediana czasu do rozwoju t-MDS/AML wynosi od 3 do 5 lat, przy czym ryzyko wyraźnie spada po pierwszej dekadzie. W klasyfikacji WHO wyróżnia się dwa typy t-MDS/AML w zależności od przyczynowej ekspozycji terapeutycznej: czynnik alkilujący typu związanego z promieniowaniem i typu związanego z inhibitorem topoizomerazy II. t-MDS/AML związany z czynnikiem alkilującym zwykle pojawia się 4 do 7 lat po ekspozycji na czynnik mutagenny. Wzajemna translokacja t(8;9) (p22;p24) między krótkim ramieniem chromosomu 8 a długim ramieniem chromosomu 9 to nawracająca nieprawidłowość, która łączy aktywowaną kinazę Janusa 2 (JAK2) z genem 1 ludzkiego autoantygenu okołośrodkowego materiału (PCM1), z pęknięciem i ponownym połączeniem prążków 8p11 i 9q3410. oligomeryzacja, która łączy połączone domeny JAK2, dając konstytutywnie aktywowaną domenę kinazy tyrozynowej JAK2. Najczęstszym mechanizmem aktywacji JAK2 w nowotworach hematologicznych jest mutacja punktowa w pozycji 617 (V617F).
Konsekwencją aktywacji JAK2 jest transformacja nowotworowa i nieprawidłowa proliferacja komórek w różnych nowotworach
- Zatem translokacje obejmujące locus JAK2 są uważane za mające znaczenie onkogenne w ostrych białaczkach i chorobach mielodysplastycznych/mieloproliferacyjnych.
- Pacjenci z tą nieprawidłowością mają szerokie spektrum kliniczne, od przewlekłych do ostrych chorób hematologicznych o wyglądzie mieloidalnym lub limfoidalnym
Przegląd badań
Status
Interwencja / Leczenie
Szczegółowy opis
Termin białaczka „związana z terapią” jest opisowy i opiera się na historii narażenia pacjenta na środki cytotoksyczne. Chociaż sugeruje się związek przyczynowy, mechanizm pozostaje do udowodnienia. Uważa się, że nowotwory te są bezpośrednią konsekwencją zdarzeń mutacyjnych wywołanych wcześniejszą terapią.
Zespoły mielodysplastyczne związane z terapią / ostra białaczka szpikowa (t-MDS / t-AML) są obecnie uważane za jedną jednostkę chorobową, zwaną nowotworami szpikowymi związanymi z terapią, w oparciu o aktualną klasyfikację Światowej Organizacji Zdrowia WHO2. Jest dobrze poznanym zespołem klinicznym występującym jako późne powikłanie po lekach cytotoksycznych i radioterapii jonizującej w leczeniu większości typów nowotworów: chłoniak Hodgkina (HL), chłoniak nieziarniczy (NHL), ostra białaczka limfoblastyczna (ALL), mięsak, oraz raka jajnika i jądra3,4.
Charakterystyka nowotworu szpikowego związanego z terapią i czas jego rozwoju po postawieniu pierwotnego rozpoznania zależą od narażenia na określone czynniki oraz dawki skumulowanej i intensywności dawki poprzedzającej terapię cytotoksyczną 5.
Częstość występowania t-MDS/AML po konwencjonalnej terapii wynosi od 0,8% do 6,3% po 20 latach. Mediana czasu do rozwoju t-MDS/AML wynosi od 3 do 5 lat, przy czym ryzyko wyraźnie spada po pierwszej dekadzie 6.
W klasyfikacji WHO wyróżnia się dwa typy t-MDS/AML w zależności od przyczynowej ekspozycji terapeutycznej: typ związany z czynnikiem alkilującym/promieniowaniem oraz typ związany z inhibitorem topoizomerazy II. t-MDS/AML związany z czynnikiem alkilującym zwykle pojawia się 4 do 7 lat po ekspozycji na czynnik mutagenny.
Około dwie trzecie pacjentów ma MDS, a pozostali mają AML z cechami mielodysplastycznymi. Pacjenci często zgłaszają się z cytopenią. Często występuje dysplazja wieloliniowa 7.
W tej klasycznej postaci białaczki związanej z terapią, która następuje po leczeniu środkami alkilującymi i/lub radioterapią, wyniki badań krwi i szpiku kostnego przypominają te obserwowane w pierwotnym MDS, chociaż stopień dysgranulopoezy i dysmegakariocytopoezy jest zwykle większy 8.
W przeciwieństwie do czynnika alkilującego t-MDS/AML, AML wtórna do inhibitorów topoizomerazy II często nie ma poprzedzającej fazy mielodysplastycznej i objawia się jawną ostrą białaczką, często z wyraźnym komponentem monocytarnym. Okres utajenia między rozpoczęciem leczenia inhibitorami topoizomerazy II a wystąpieniem białaczki jest krótki, mediana wynosi od 2 do 3 lat 9.
Wzajemna translokacja t(8;9) (p22;p24) między krótkim ramieniem chromosomu 8 a długim ramieniem chromosomu 9 jest nawracającą nieprawidłowością, która łączy aktywowaną kinazę Janusa 2 (JAK2) z ludzkim autoantygenem okołośrodkowego materiału genu 1 (PCM1) , z przerwaniem i ponownym połączeniem na pasmach 8p11 i 9q341010.
PCM1 koduje duże białko o masie cząsteczkowej 228 kDa, zawierające kilka potencjalnych domen typu coiled-coil w swojej części na końcu aminowym. Białko to jest zlokalizowane w ziarnistościach cytoplazmatycznych określanych jako satelity centriolarne. Ma odgrywać kluczową rolę w składaniu białek centrosomalnych, organizacji mikrotubul i przebiegu cyklu komórkowego11.
Ze względu na fuzję genów PCM1-JAK2, domeny typu coiled-coil PCM1 pośredniczą w oligomeryzacji, która łączy połączone domeny JAK2, w wyniku czego powstaje konstytutywnie aktywowana domena kinazy tyrozynowej JAK212, 13.
JAK2 jest członkiem rodziny kinaz tyrozynowych Janus (JAK1, JAK2, JAK3, TYK2). Te niereceptorowe kinazy tyrozynowe odgrywają znaczącą rolę w różnych szlakach transdukcji sygnału, które regulują przeżycie komórkowe, proliferację, różnicowanie i apoptozę. Białko składa się z siedmiu domen. Domena JH2 (domena pseudokinazowa, domena podobna do kinazy) zlokalizowana jest w eksonie 14 i pełni istotną negatywną funkcję autoregulacyjną14.
Najczęstszym mechanizmem aktywacji JAK2 w nowotworach hematologicznych jest mutacja punktowa w pozycji 617 (V617F).
Konsekwencją aktywacji JAK2 jest transformacja nowotworowa i nieprawidłowa proliferacja komórek w różnych nowotworach złośliwych15.
- Zatem translokacje obejmujące locus JAK2 są uważane za mające znaczenie onkogenne w ostrych białaczkach i chorobach mielodysplastycznych/mieloproliferacyjnych.
- Pacjenci z tą nieprawidłowością mają szerokie spektrum kliniczne, od przewlekłych do ostrych chorób hematologicznych o wyglądzie mieloidalnym lub limfoidalnym 16.
Fluorescencyjna hybrydyzacja in situ (FISH) jest rodzajem techniki cytogenetycznej, która umożliwia wizualizację określonych sekwencji kwasów nukleinowych w określonych miejscach komórkowych lub chromosomalnych poprzez hybrydyzację komplementarnych, znakowanych fluorescencyjnie sekwencji sond w nienaruszonych komórkach metafazy lub interfazy.
Sondy fluorescencyjne są znakowane kwasem nukleinowym grupami fluorescencyjnymi i mogą wiązać się z określonymi sekwencjami DNA/RNA. Mikroskopia fluorescencyjna może być wykorzystana do ustalenia, gdzie sonda fluorescencyjna jest związana z chromosomami17.
Typ studiów
Zapisy (Oczekiwany)
Kryteria uczestnictwa
Kryteria kwalifikacji
Wiek uprawniający do nauki
- Dziecko
- Dorosły
- Starszy dorosły
Akceptuje zdrowych ochotników
Płeć kwalifikująca się do nauki
Metoda próbkowania
Badana populacja
Opis
Kryteria przyjęcia:
• Zespoły mielodysplastyczne: rozpoznanie MDS musi być potwierdzone aspiratem szpiku kostnego i/lub biopsją: liczba blastów musi być < 20%; kwalifikują się pacjenci z jakąkolwiek międzynarodową oceną prognostyczną (IPSS); pacjenci z niskim lub pośrednim (INT)-1 IPSS muszą mieć liczbę płytek krwi < 50x10⁹/l i/lub bezwzględną liczbę neutrofili (ANC) < 50x10⁹/l.
- Ostra białaczka szpikowa z dysplazją wieloliniową: rozpoznanie AML-TLD musi być potwierdzone aspiratem szpiku kostnego i/lub biopsją UWAGA: w przeglądzie aspiratu szpiku kostnego i/lub biopsji musi być dowód >= 20% blastów; AML-TLD będzie interpretowana jako obejmująca pacjentów wcześniej zdiagnozowanych na podstawie kryteriów francusko-amerykańsko-brytyjskich (FAB) jako oporna na leczenie niedokrwistość z nadmiarem blastów w okresie transformacji (RAEB-t), jak również pacjentów bez wcześniejszych zaburzeń hematologicznych w wywiadzie, którzy mają AML, która spełnia kryteria AML-TLD według kryteriów Światowej Organizacji Zdrowia (WHO); pacjenci z AML-TLD muszą mieć udokumentowaną liczbę białych krwinek (WBC) =< 30x10⁹/L w ciągu 4 tygodni przed włączeniem do badania (zostaną wykonane dwa zestawy zliczeń w odstępie 2 tygodni); pacjenci, u których WBC podwoiło się w tym okresie i jest większe niż 20x10⁹/L w czasie badania przesiewowego, nie będą kwalifikować się
- Pacjenci rozpoczęli terapię (leki cytotoksyczne i radioterapia jonizująca) co najmniej 2 lata temu.
Kryteria wyłączenia:
- inne nowotwory związane z terapią inne niż zespół mielodplastyczny lub ostra białaczka szpikowa
Plan studiów
Jak projektuje się badanie?
Szczegóły projektu
- Modele obserwacyjne: Inny
- Perspektywy czasowe: Przekrojowe
Kohorty i interwencje
Grupa / Kohorta |
Interwencja / Leczenie |
|---|---|
|
Denovo MDS/AML
Pacjenci z nowotworem szpikowym de novo albo zespołem mielodysplastycznym i (lub) ostrą białaczką szpikową, które są diagnozowane na podstawie pełnej morfologii krwi, rozmazu krwi, aspiratu szpiku kostnego, biopsji szpiku kostnego, immunofenotypowania i biopsji szpiku kostnego z tymi kryteriami włączenia • Zespoły mielodysplastyczne: rozpoznanie MDS musi być potwierdzone aspiratem szpiku kostnego i/lub biopsją: liczba blastów musi być < 20%; • Ostra białaczka szpikowa z dysplazją wieloliniową: rozpoznanie AML-TLD musi być potwierdzone aspiratem szpiku kostnego i/lub biopsją UWAGA: w przeglądzie aspiratu szpiku kostnego i/lub biopsji musi być dowód >= 20% blastów ; |
Próbki odwadnia się w etanolu (seria 50, 80 i 95% (obj./obj.), ekspozycja przez 3 minuty na 300 ul etanolu w każdym stężeniu) przed hybrydyzacją. Próbki na taśmach hybrydyzowano przez 15 minut w temperaturze 55°C przy użyciu uszczelnionej przed wilgocią komory do inkubacji szkiełek. W skrócie, 500 µl objętości buforu do hybrydyzacji (0,7 M NaCl, 0,1 M Tris [pH 8,0], 0,1% dodecylosiarczan sodu, 10 mM EDTA, zawierający sondę, podgrzany do 55 ºC) nanosi się na powierzchnię taśmy i komorę pokrywa jest uszczelniona, tworząc wilgotne środowisko o kontrolowanej temperaturze w komorze. Po 15 minutach zdejmuje się wieczko i próbki krótko przepłukuje buforem do hybrydyzacji bez sondy, podgrzanym do 55ºC. Zhybrydyzowane komórki na taśmach barwiono kontrastowo przez 10 minut w ciemności ~30 µl pożywki do zatapiania zawierającej 1,5 µg ml-1 4',6-diamidyno-2-fenyloindolu (DAPI). Następnie taśmy mocuje się szkiełkiem nakrywkowym i bada pod mikroskopem fluorescencyjnym. |
|
MDS/AML związane z terapią
Wykrywanie genu fuzyjnego PCM1-JAK2 u pacjentów z zespołem mielodysplastycznym związanym z terapią / pacjenci z ostrą białaczką szpikową
|
Próbki odwadnia się w etanolu (seria 50, 80 i 95% (obj./obj.), ekspozycja przez 3 minuty na 300 ul etanolu w każdym stężeniu) przed hybrydyzacją. Próbki na taśmach hybrydyzowano przez 15 minut w temperaturze 55°C przy użyciu uszczelnionej przed wilgocią komory do inkubacji szkiełek. W skrócie, 500 µl objętości buforu do hybrydyzacji (0,7 M NaCl, 0,1 M Tris [pH 8,0], 0,1% dodecylosiarczan sodu, 10 mM EDTA, zawierający sondę, podgrzany do 55 ºC) nanosi się na powierzchnię taśmy i komorę pokrywa jest uszczelniona, tworząc wilgotne środowisko o kontrolowanej temperaturze w komorze. Po 15 minutach zdejmuje się wieczko i próbki krótko przepłukuje buforem do hybrydyzacji bez sondy, podgrzanym do 55ºC. Zhybrydyzowane komórki na taśmach barwiono kontrastowo przez 10 minut w ciemności ~30 µl pożywki do zatapiania zawierającej 1,5 µg ml-1 4',6-diamidyno-2-fenyloindolu (DAPI). Następnie taśmy mocuje się szkiełkiem nakrywkowym i bada pod mikroskopem fluorescencyjnym. |
Co mierzy badanie?
Podstawowe miary wyniku
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Wykrywanie genu fuzyjnego PCM1-JAK2
Ramy czasowe: 24 miesiące
|
Wykorzystanie świeżej próbki od pacjentów z nowotworem szpikowym do poszukiwania genu fuzyjnego PCM1-JAK2 w 2 typach nowotworu szpikowego spokrewnionego z thaerapem, badanie związku między PCM1-JAK2 a intensywnością dawki i czasem ekspozycji oraz badanie związku między PCM1-JAK2 a innymi cytogenetycznymi nieprawidłowości przy użyciu techniki FISH i
|
24 miesiące
|
Współpracownicy i badacze
Sponsor
Daty zapisu na studia
Główne daty studiów
Rozpoczęcie studiów (Oczekiwany)
Zakończenie podstawowe (Oczekiwany)
Ukończenie studiów (Oczekiwany)
Daty rejestracji na studia
Pierwszy przesłany
Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości
Pierwszy wysłany (Rzeczywisty)
Aktualizacje rekordów badań
Ostatnia wysłana aktualizacja (Rzeczywisty)
Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości
Ostatnia weryfikacja
Więcej informacji
Terminy związane z tym badaniem
Inne numery identyfikacyjne badania
- PCM1-JAK2 fusion gene
Plan dla danych uczestnika indywidualnego (IPD)
Planujesz udostępniać dane poszczególnych uczestników (IPD)?
Informacje o lekach i urządzeniach, dokumenty badawcze
Bada produkt leczniczy regulowany przez amerykańską FDA
Bada produkt urządzenia regulowany przez amerykańską FDA
Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .