Mezclas de oxígeno enriquecidas en atletas (OXY-SPORT)

Los sujetos serán reclutados a través de anuncios públicos en los gimnasios locales y reunidos para explicar el protocolo. Quienes deseen participar firmarán un consentimiento informado por escrito y serán reclutados. Para ser incluidos, todos los sujetos se someterán a un examen médico general para permitir tratamientos hiperbáricos. Esto incluirá mediciones de peso, altura, presión arterial no invasiva y frecuencia cardíaca.

Después de la inclusión, los sujetos serán asignados al azar a tres brazos usando un generador de números electrónico por personal que no esté directamente involucrado en el experimento:

• Brazo 1 (control): sin intervención.
• Brazo 2 (L-HBO): tratado con oxígeno a 1,45 ATA durante 60 min (incluidos los tiempos de compresión y descompresión, y una pausa en el aire de 3 minutos respirando aire);
• Brazo 3 (HBO): tratado con oxígeno a 2,5 ATA durante 60 min (incluidos los tiempos de compresión y descompresión, y una pausa en el aire de 3 minutos respirando aire).
• Brazo 4 (30% O2): respirando una mezcla de aire con un 30% de oxígeno a presión atmosférica (1 ATA).
• Brazo 5 (50% O2): respirando una mezcla de aire con 50% de oxígeno a presión atmosférica (1 ATA).

Los sujetos incluidos en los Brazos 2, 3, 4, 5 se someterán a un total de 20 tratamientos. Seguirán una dieta personalizada proporcional a su gasto energético.

Los autores identificarán 3 puntos de tiempo en el protocolo:

TIEMPO 0 (T0): inmediatamente después de la inclusión, antes de cualquier tratamiento o experimento; TIEMPO 1 (T1): al final de los tratamientos de OHB; TIEMPO 2 (T2): 2 meses después de finalizar los tratamientos de OHB.

De las materias incluidas se realizarán los siguientes exámenes:

• se realizará un panel estandarizado que incluye hemograma completo (CBC), creatinina, nitrógeno ureico en sangre (BUN), proteína C reactiva y VES en T0, T1 y T2.
• Los marcadores de estrés oxidativo se analizarán en muestras de sangre, orina y saliva. En muestras de sangre (T0; T1; T2), los autores medirán IL-1 beta, IL-6, TNF-alfa, especies reactivas de oxígeno y capacidad antioxidante total (por resonancia paramagnética), total (tot) y reducida (rojo) aminotioles (por espectroscopia de fluorescencia), 3-nitrotirosina (3-NT) (por inmunoensayo competitivo).

En muestras de orina (T0; T1; T2), los autores evaluarán la peroxidación lipídica midiendo la concentración de 8-isoprostano (mediante inmunoensayo competitivo), concentración de nitrito y nitrato (NO2/NO3) (mediante colorimetría basada en la reacción de Griess), concentración nítrica inducible Óxido sintasa (por kit ELISA disponible comercialmente), concentraciones de creatinina, neopterina y ácido úrico, 8-oh-2-desoxiguanosina (por inmunoensayo competitivo).

En muestras de saliva (T0; T1; T2), los autores medirán las especies reactivas de oxígeno y la capacidad antioxidante total (mediante resonancia paramagnética) y el cortisol (mediante inmunoensayo competitivo).

• las células madre se analizarán en muestras de sangre (en T0, T1, T2) (mediante citometría de flujo).

Se extraerán muestras de sangre (aproximadamente 6-12 ml) de las venas de los antebrazos (preferiblemente del miembro no dominante); el plasma y los eritrocitos se separarán por centrifugación a 1000 × g durante 10 min a 4 °C. Las muestras de orina se recogerán por micción voluntaria en recipientes estériles. Se obtendrá 1 mL de saliva mediante dispositivos Salivette (Sarstedt, Nümbrecht, Alemania). Se indicará a los sujetos que se abstengan de beber, comer, fumar, cepillarse los dientes y usar enjuague bucal en los 30 minutos anteriores a la recolección de saliva.

Todas las muestras se almacenarán en alícuotas múltiples a -80 °C hasta que se analicen y se descongelen solo una vez antes del análisis.

Con esta configuración, el cegamiento de pacientes e investigadores será imposible debido a las diferentes características estructurales. Sin embargo, los evaluadores de resultados estarán cegados a la asignación de pacientes.