Miscele di ossigeno arricchite negli atleti (OXY-SPORT)

I soggetti saranno reclutati tramite bandi pubblici nelle palestre locali e riuniti per illustrare il protocollo. Coloro che desiderano partecipare firmeranno un consenso informato scritto e saranno reclutati. Per essere inseriti, tutti i soggetti saranno sottoposti a screening medico generale per consentire trattamenti iperbarici. Ciò includerà misurazioni di peso, altezza, pressione arteriosa non invasiva e frequenza cardiaca.

Dopo l'inclusione, i soggetti verranno assegnati in modo casuale a tre braccia utilizzando un generatore di numeri elettronico da personale non direttamente coinvolto nell'esperimento:

• Braccio 1 (controllo): nessun intervento.
• Braccio 2 (L-HBO): trattato con ossigeno a 1,45 ATA per 60 min (inclusi i tempi di compressione e decompressione e una pausa aerea di 3 minuti respirando aria);
• Braccio 3 (HBO): trattato con ossigeno a 2,5 ATA per 60 min (inclusi i tempi di compressione e decompressione e una pausa aerea di 3 minuti respirando aria).
• Braccio 4 (30% O2): respirare una miscela di aria con il 30% di ossigeno a pressione atmosferica (1 ATA).
• Braccio 5 (50% O2): respirare una miscela di aria con il 50% di ossigeno a pressione atmosferica (1 ATA).

I soggetti inclusi nel braccio 2, 3, 4, 5 saranno sottoposti a un totale di 20 trattamenti. Seguiranno una dieta personalizzata proporzionata al loro dispendio energetico.

Gli Autori identificheranno 3 punti temporali nel protocollo:

TEMPO 0 (T0): immediatamente dopo l'inclusione, prima di qualsiasi trattamento o esperimento; TEMPO 1 (T1): al termine dei trattamenti HBO; TEMPO 2 (T2): 2 mesi dopo la fine dei trattamenti HBO.

Sulle materie previste verranno svolti i seguenti esami:

• un pannello standardizzato comprendente emocromo completo (CBC), creatinina, azoto ureico nel sangue (BUN), proteina C reattiva e VES verrà eseguito a T0, T1 e T2.
• marcatori di stress ossidativo saranno analizzati su campioni di sangue, urina e saliva. Su campioni di sangue (T0; T1; T2), gli Autori misureranno IL-1 beta, IL-6, TNF-alfa, le specie reattive dell'ossigeno e la capacità antiossidante totale (mediante risonanza paramagnetica), totale (tot) e ridotta (rosso) aminotioli (mediante spettroscopia di fluorescenza), 3-nitrotirosina (3-NT) (mediante saggio immunologico competitivo).

Su campioni di urina (T0; T1; T2), gli Autori valuteranno la perossidazione lipidica misurando la concentrazione di 8-isoprostano (mediante immunodosaggio competitivo), la concentrazione di nitriti e nitrati (NO2/NO3) (mediante colorimetria basata sulla reazione di Griess), la concentrazione di Nitrito inducibile Ossido sintasi (mediante kit ELISA disponibile in commercio), creatinina, neopterina e concentrazioni di acido urico, 8-oh-2-deossiguanosina (mediante saggio immunologico competitivo).

Su campioni di saliva (T0; T1; T2) gli Autori misureranno le specie reattive dell'ossigeno e la capacità antiossidante totale (mediante risonanza paramagnetica) e cortisolo (mediante immunodosaggio competitivo).

• le cellule staminali saranno analizzate su campioni di sangue (a T0, T1, T2) (mediante citometria a flusso).

Verranno prelevati campioni di sangue (circa 6-12 ml) dalle vene degli avambracci (preferibilmente sull'arto non dominante); il plasma e gli eritrociti saranno separati mediante centrifuga a 1000×g per 10 min a 4°C. I campioni di urina saranno raccolti per svuotamento volontario in contenitori sterili. 1 mL di saliva sarà ottenuto mediante dispositivi Salivette (Sarstedt, Nümbrecht, Germania). I soggetti saranno istruiti ad astenersi dal bere, mangiare, fumare, lavarsi i denti e usare il collutorio nei 30 minuti precedenti la raccolta salivare.

Tutti i campioni saranno conservati in più aliquote a -80 °C fino al momento del dosaggio e scongelati solo una volta prima dell'analisi.

Con questa impostazione, l'accecamento di pazienti e ricercatori sarà impossibile a causa delle diverse caratteristiche strutturali. Tuttavia, i valutatori dei risultati saranno all'oscuro dell'assegnazione dei pazienti.