Impacto de las terapias antiglicémicas e inmunosupresoras en la netosis en la diabetes y la enfermedad renal (redes - trampas de neutrófilos) (NETs)

2. Pacientes diabéticos (estudio de terapia de DM)

• Tamaño de la muestra: 20 pacientes diabéticos.

  • Grupo 1: 10 pacientes tratados con Forxiga/Jardiance (inhibidores de SGLT2).
  • Grupo 2: 10 pacientes tratados con Ozempic (agonista GLP-1).

• Criterios del paciente:

  o Los pacientes sin embargo a los inhibidores de SGLT2 y los agonistas del receptor GLP-1 para garantizar que los efectos observados sean atribuibles al inicio de estas terapias.

• Colección de muestras:

  • Muestras de suero (6 ml en tubos de separadores de suero).
  • Se recolectarán dos tubos (12 ml en total) por participante en cada punto de tiempo:

Antes de comenzar el tratamiento y a 1, 2, 3, 6 y 12 meses después de iniciar medicamentos.

• Criterios de inclusión:

  • Pacientes diabéticos de 18 años o más (hombres y mujeres).
  • Los pacientes que no han recibido previamente inhibidores de SGLT2 o agonistas del receptor GLP-1.

• Criterios de exclusión:

  • Los pacientes con afecciones que afectan la netosis, incluida la autoinmunidad, las enfermedades hematológicas o oncológicas, o positivos para el VIH o la hepatitis B/C.

Pacientes de enfermedad renal crónica (ERC) (evaluación de la terapia inmunosupresora)

• Tamaño de la muestra: 50 pacientes con ERC con varias etiologías.

• Enfocar:

  o Esta parte del estudio evaluará específicamente la enfermedad renal mediada por inmunomediada, como la vasculitis asociada a ANCA, y los efectos de la terapia inmunosupresora en la netosis.

• Objetivo:

  • Evalúe los marcadores de netosis (por ejemplo, CFDNA, CIT-H3, MPO, NE) antes de iniciar el tratamiento inmunosupresor y a los 1, 2, 3, 6 y 12 meses de terapia.
  • Correlacione la dinámica de la netosis con variables clínicas, incluida la actividad de la enfermedad, la función renal y los marcadores inflamatorios.

• Colección de muestras:

  o Muestras de suero (6 ml en tubos de separadores de suero).

  o Se recolectarán dos tubos (12 ml en total) por participante en cada punto de tiempo: antes de comenzar el tratamiento y a 1, 2, 3, 6 y 12 meses después de iniciar medicamentos.

• Criterios de exclusión:

  • Pacientes con infecciones agudas, enfermedades hematológicas o oncológicas, o positivos para VIH o hepatitis B/C.

Grupo de control

• Tamaño de la muestra: 10 participantes sanos.

• Objetivo:

  o Servir como controles para los estudios diabéticos y de ERC.

• Colección de muestras:
• Se recolectarán dos tubos (12 ml en total) por participante

• Elegibilidad:

  • Individuos sanos sin afecciones médicas subyacentes.

• Marcadores de netosis: la formación neta se evaluará en muestras de sangre de suero en todos los grupos.
• Centrarse en pacientes ingenuos: se hará hincapié en la evaluación de los efectos iniciales de los medicamentos antiglicémicos en pacientes diabéticos y el impacto de la terapia inmunosupresora en pacientes con ERC con enfermedades inmunomediadas.
• Las muestras se recolectarán a intervalos idénticos y se compararán entre los grupos diabéticos y la CKD para evaluar las diferencias en los niveles de netosis a lo largo del tiempo (controles, solo marcadores de red basales) y en respuesta al tratamiento.

Todas las muestras de suero se diluirán 1: 2 y la histona citrulinada H3 (CITH3) se cuantificará utilizando el kit de ELISA de histona Citrullined H3: O.D. (501620; Cayman Chemical, Ann Arbor, EE. UU.).

Las muestras se recolectarán a intervalos idénticos y se compararán entre los grupos diabéticos y la CKD para evaluar las diferencias en los niveles de netosis a lo largo del tiempo (controles, solo marcadores de red basales) y en respuesta al tratamiento.

Todas las muestras de suero se diluirán 1: 2. La medición de MPO se realizará utilizando el kit ELISA de mieloperoxidasa, Ng/ml (501410; Cayman Chemical).

Las muestras se recolectarán a intervalos idénticos y se compararán entre los grupos diabéticos y la CKD para evaluar las diferencias en los niveles de netosis a lo largo del tiempo (controles, solo marcadores de red basales) y en respuesta al tratamiento.

Todas las muestras de suero se diluirán 1: 2, y la medición de NE se realizará utilizando kit de elisa de elastasa de neutrófilos humanos, Ng/ml (AB204730; ABCAM;

Las muestras se recolectarán a intervalos idénticos y se compararán entre los grupos diabéticos y la CKD para evaluar las diferencias en los niveles de netosis a lo largo del tiempo (controles, solo marcadores de red basales) y en respuesta al tratamiento.

Todas las muestras de suero se diluirán 1: 2 y la medición PAD4 se realizará utilizando (kit ELISA PADI4, NG/ml (Elh-Padi4, Raybiotech) de acuerdo con las instrucciones del fabricante

1. Función renal

• La tasa de filtración glomerular estimada (EGFR, ML/min) se medirá utilizando la ecuación de creatinina CKD-EPI).
• Estas medidas monitorearán los cambios en la función renal con el tiempo y se correlacionarán con los marcadores de netosis evaluados antes y durante el tratamiento.

Se medirá la proporción de proteína de orina/ creatinina W (MG/ GR).

o Estas medidas monitorearán los cambios en la función renal a lo largo del tiempo y se correlacionarán con los marcadores de netosis evaluados antes y durante el tratamiento

Eventos cardiovasculares adversos principales (MACE): incluyendo infarto de miocardio, accidente cerebrovascular, insuficiencia cardíaca y muerte cardiovascular (presente/ausente).

• Los análisis anuales evaluarán la aparición de estos eventos en relación con los marcadores de netosis

Mortalidad por todas las causas: los resultados de supervivencia se rastrearán a través de análisis anuales.

• Se dibujarán correlaciones entre los marcadores de netosis y las tasas de mortalidad para comprender su valor predictivo y los efectos del tratamiento. Estos resultados secundarios resaltarán la asociación entre la netosis y los resultados renales y cardiovasculares a largo plazo