Harjoituksen vaikutukset raskauden aikana äidin ja sikiön terveyteen (GESTAFIT)

Kokeellinen: Gestafitos

Tämä on pitkittäistutkimus, joka on jatkoa GESTAtion and FITness (GESTAFIT) -projektille. Päätarkoituksena on arvioida raskaudenaikaisen samanaikaisen liikuntaohjelman (kehitetty GESTAFIT-projektin alla) vaikutusta jälkeläisten kehonkoostumukseen, fyysiseen kuntoon, aivojen rakenteeseen sekä motoriseen, kognitiiviseen ja kielelliseen kehitykseen neljän ikävuoden iässä.

Muut: Harjoituksen interventio

Harjoitusinterventio suoritetaan kahdessa ryhmässä siten, että jokaisessa ryhmässä on 12-13 osallistujaa. Ryhmät harjoittelevat 3 päivää/viikko (60min per harjoitus) 16. raskausviikosta synnytykseen saakka. Harjoitteluinterventioryhmä käy läpi koulutuksen eri vaiheita: a) Oppimisvaihe: johon sisältyy interventiosuunnitelma, tavoitteet, joita haluamme työskennellä, ja kuinka suoritamme sen; b) Liikkeiden oppimisvaihe: teoreettiset ja käytännön harjoitukset, joissa selitetään liikkeitä ja ergonomisia peruskuvioita; ja c) Fyysinen kuntoharjoitteluvaihe: harjoituksia, joiden tarkoituksena on parantaa kuntoa ja painonpudotusta, sekä harjoituksia, joissa keskitytään oikeaan lantion mobilisaatioon synnytystä varten. Intensiteettiä mukautetaan harjoitusohjelman aikana raskausviikon ja jokaisen raskaana olevan henkilön mukaan. syke. Istunnot koostuvat sekatyöstä, joka koostuu piireistä, joissa toteutetaan sekä lihasten että sydän- ja verisuonihoitoa.

Muut: Kontrolliryhmä

Tavallinen hoito, ei liikunta.

Kokeellinen: Istukankoulutus

Tämä on retrospektiivinen tutkimus, jonka tarkoituksena on analysoida GESTAFIT-projektissa mukana olleiden naisten istukoiden tilaa. GESTAFIT-projektissa kehitettiin samanaikaista liikuntaohjelmaa. Tämä tiukka tutkimussuunnitelma antaa meille mahdollisuuden testata keskeisen hypoteesimme, jonka mukaan raskaudenaikainen liikunta tuottaa suurempia parannuksia raskauskomplikaatioihin liittyvissä istukan metabolisissa reiteissä ja on yhteydessä parempiin raskaus- ja vastasyntyneen tuloksiin.

Muut: Harjoituksen interventio

Harjoitusinterventio suoritetaan kahdessa ryhmässä siten, että jokaisessa ryhmässä on 12-13 osallistujaa. Ryhmät harjoittelevat 3 päivää/viikko (60min per harjoitus) 16. raskausviikosta synnytykseen saakka. Harjoitteluinterventioryhmä käy läpi koulutuksen eri vaiheita: a) Oppimisvaihe: johon sisältyy interventiosuunnitelma, tavoitteet, joita haluamme työskennellä, ja kuinka suoritamme sen; b) Liikkeiden oppimisvaihe: teoreettiset ja käytännön harjoitukset, joissa selitetään liikkeitä ja ergonomisia peruskuvioita; ja c) Fyysinen kuntoharjoitteluvaihe: harjoituksia, joiden tarkoituksena on parantaa kuntoa ja painonpudotusta, sekä harjoituksia, joissa keskitytään oikeaan lantion mobilisaatioon synnytystä varten. Intensiteettiä mukautetaan harjoitusohjelman aikana raskausviikon ja jokaisen raskaana olevan henkilön mukaan. syke. Istunnot koostuvat sekatyöstä, joka koostuu piireistä, joissa toteutetaan sekä lihasten että sydän- ja verisuonihoitoa.

Muut: Kontrolliryhmä

Tavallinen hoito, ei liikunta.

Insuliiniherkkyys, joka on johdettu insuliiniresistenssin homeostaattisen mallin arvioinnista (HOMA-IR)

Insuliiniherkkyys johdetaan insuliiniresistenssin homeostaattisen mallin arvioinnista (HOMA-IR), joka lasketaan kaavalla [paastoinsuliini (μIU/mL) x paastoglukoosi (mg/dl)]/405.

Äidin painonnousu (kg)

Äidin painonnousu määritellään painonmuutokseksi perusmittauksesta viimeiseen mittaukseen

Vastasyntyneiden insuliini-glukoosiindeksi

Vastasyntyneen insuliiniherkkyys arvioidaan glukoosi/insuliini-suhteella.

Systolinen ja diastolinen verenpaine (mmHg)

Systolinen ja diastolinen verenpaine (mmHg) mitataan 5 minuutin levon jälkeen kahdessa eri yhteydessä (2 minuutin välein kokeiden välillä) henkilön istuessa (Omron Health Care Europe B.V. Hoolddorp). Kahden kokeen pienin arvo valitaan analyysiin.

Leposyke (bpm)

Leposyke (bpm) mitataan 5 minuutin levon jälkeen kahdessa eri yhteydessä (2 minuutin välein kokeiden välillä) henkilön istuessa (Omron Health Care Europe B.V. Hoolddorp). Kahden kokeen pienin arvo valitaan analyysiin.

Välimeren ruokavalion pisteet

Välimeren ruokavalion pistemäärää versiossa, joka on mukautettu erityisiin raskaudenaikaisiin Fe-, Ca- ja foolihapon tarpeisiin, käytetään arvioimaan perinteistä välimerellistä ruokavaliota.

Sydän-hengityskunto (Vo2max)

Modifioitu Bruce-protokolla suoritetaan maksimaalisen hapenottokyvyn (VO2max) arvioimiseksi, ja sitä käytetään kardiorespiratorisen kunnon mittana.

Sydän-hengityskunto (metrit 6 minuutin kävelytestissä)

Suoritamme 6 minuutin kävelytestin, joka mittaa maksimimatkan (metreinä), jonka kukin osallistuja voi kävellä 6 minuutissa 45,7 metrin suorakaiteen muotoisella radalla.

Lihasvoima (kg)

Kädensijan lujuustestiä käytetään vahvuuden mittana

Joustavuus (cm)

Joustavuuden mittana käytetään naarmuuntumistestiä

Fyysinen aktiivisuus ja istumiskäyttäytyminen (minuuteissa)

Kiihtyvyysmittauksella arvioidaan objektiivisesti fyysistä aktiivisuutta ja istuma-aikaa. Naisia ​​pyydetään käyttämään kolmiakselista kiihtyvyysanturia (ActiSleep+, Pensacola, Florida, Yhdysvallat) 9 peräkkäisenä päivänä alkaen samasta päivästä, jona he saavat näytön (esim. osallistujat, jotka saavat kiihtyvyysmittarin maanantaina, kuljettavat laitetta seuraavan viikon tiistaihin asti). Osallistujia ohjeistetaan pitämään kiihtyvyysanturia koko päivän (24 tuntia) ranteessa, joka on kiinnitetty joustavalla vyöllä. Kevyen, kohtalaisen ja kohtalaisen voimakkaan intensiteetin PA:n ja istuma-ajan harjoittamisen aika (minuutteina). Tätä kiihtyvyysmittaria on aiemmin käytetty raskauden aikana samanlaisilla menetelmillä kuin tässä protokollassa.

Nukkumiskäyttäytyminen (kiihtyvyysmittauksen avulla)

Uneen liittyvät käyttäytymiset, kuten nukahtaminen, unilatenssi, kokonaisuniaika, heräämisten määrä ja kesto sekä unen tehokkuus lasketaan objektiivisesti käyttämällä triaksiaalista kiihtyvyysmittaria (ActiSleep+, Pensacola, Florida, Yhdysvallat). Tällaisten ActiSleep-kiihtyvyysmittaustietojen data-analyysi suoritetaan sen erityisen ohjelmiston (Actilife) kautta.

Pittsburghin unen laatuindeksi

Sen avulla arvioidaan unen laatua ja häiriöitä 1 kuukauden aikavälillä.

Unettomuusoireiden kyselylomake

Unettomuuden oireiden esiintyminen mitataan Insomnia Symptoms Questionnaire -kyselylomakkeella, joka on validoitu raskaana oleville naisille.

Elämänlaatu (lyhytmuotoinen terveystutkimus 36)

Käytämme lyhytmuotoista terveystutkimusta 36 terveyteen liittyvän elämänlaadun arvioinnissa.

Epidemiological Studies-Depression Scale -kyselylomake

Raskauden synnytystä edeltävä masennustaso arvioidaan Epidemiologisten tutkimusten keskuksen - Depressio Scale -kyselylomakkeella, joka on validoitu ja jota käytetään laajasti raskauden aikana.

Tilan piirteen ahdistuneisuusindeksi.

Ahdistustasot arvioidaan State Trait Anxiety -indeksillä.

The Detention of Restless Legs Syndrome -kyselylomake

"Levottomien jalkojen oireyhtymä" määrää suurelta osin monien raskaana olevien elämänlaadun ja liittyy heidän masennuksensa ja unen laatuun. Levottomat jalat - oireyhtymän pidättäminen - kyselylomakkeen espanjankielistä versiota käytetään tämän oireyhtymän esiintymisen ja vakavuuden arvioinnissa .

Oswestryn vammaisuusindeksin pisteet

Alaselän kipua arvioidaan Oswestry Disability Index -pistemäärän espanjankielisellä versiolla

Pain Visual Analogue Scale

Alaselän kivun voimakkuus arvioidaan myös Pain Visual Analogue Scale -asteikolla

6-kohdan naisten seksuaalitoimintojen indeksi

Naisten seksuaalisen toiminnan 6-kohdan indeksiä käytetään sukupuolitoiminnan arvioinnissa. Tämä instrumentti koostuu kuudesta kysymyksestä: halu, kiihottuminen, voitelu, orgasmi, tyytyväisyys ja kipu. Jokainen kysymys voidaan pisteyttää 0–5 ja laskea sitten yhteen kokonaispistemääräksi.

Positiivinen terveys

"Positiivinen terveys" arvioidaan seuraavilla kyselylomakkeilla:

1. Ominaisuuden meta-mielialan asteikko
2. Positiivisten ja negatiivisten vaikutusten aikataulu
3. Tyytyväisyys elämään -asteikko
4. 10 kohdan Connor-Davidsonin kestävyysasteikko

Hematologia

Coulter (Brändi) määrittää erytrosyyttien määrän, hematokriitin, hemoglobiinin, verihiutaleet, leukosyytit ja erytrosyyttien keskimääräisen verisolumäärän.

Lipidiprofiili (äidissä ja napanuoraveressä)

Plasman kokonaiskolesteroli, suuritiheyksinen lipoproteiini ja matalatiheyksinen lipoproteiini kolesteroli ja triglyseridit (kaikki mg/dl) määritetään käyttämällä autoanalysaattoria (Hitachi-Roche p800, F. Hoffmann-La Roche Ltd. Sveitsi)

Glykeeminen profiili (äidin ja napanuoraveressä)

Plasman glukoosi, insuliini ja glykosyloitu hemoglobiini määritetään käyttämällä autoanalysaattoria (Hitachi-Roche p800, F. Hoffmann-La Roche Ltd. Sveitsi)

Plasman kokonaisantioksidanttikapasiteetti (äidin ja napanuoraveressä)

Se mitataan käyttämällä kaupallista sarjaa (spektrofotometria).

Plasman rasvaliukoiset antioksidantit (äidissä ja napanuoraveressä)

Plasman E-vitamiini, retinoli, karoteeni, koentsyymi Q10 ja koentsyymi Q9 mitataan massaspektrometrialla

Antioksidanttientsyymien aktiivisuus (äidin ja napanuoraveressä)

Eritrosiittikalvon katalaasi, glutationiperoksidaasi ja superoksididismutaasientsyymit mitataan spektrofotometrialla.

Karbonyyliproteiinit (äidissä ja napanuoraveressä)

Karbonyyliproteiinien mittaus suoritetaan käyttämällä kaupallista pakkausta (spektrofotometria).

Lipidien oksidatiiviset vauriot (äidissä ja napanuoraveressä)

4-hydroksinonenaalin ja isoprostaanien mittaus virtsassa ja plasmassa sekä hydroperoksidien mittaus plasmassa ja punasolukalvossa kaupallisilla sarjoilla (spektrofotometria ja ELISA)

DNA:n oksidatiivinen vaurio (äidissä ja napanuoraveressä)

8-hydroksiguanosiinin mittaaminen virtsasta ja plasmasta kaupallisilla kitteillä (ELISA).

Pro- ja anti-inflammatorinen signaali (äidin ja napanuoraveressä)

Jotkut äidin ja napanuoran plasman tulehdusta edistävät ja anti-inflammatoriset sytokiinit (IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-y ja TNF-α, IL-1ra ja TNF Srii α ), joitain adipokiineja (adiponektiini, adipsiini, resistiini, PAI-aktiivinen, insuliini ja leptiini) ja myokiineja (irisiini) mitataan Luminex xMAP -teknologian avulla.

Luun biomarkkerit (äidin ja napanuoraveressä)

Luminex xMAP -tekniikalla mitataan erilaisia ​​luun aineenvaihduntaan liittyviä relevantteja biomarkkereita (ACTH, DKK-1, FGF-23, Osteokalsiini, OPN-Osteopontiini, Osteoprotegeriini, PTH ja SOST).

Lihavuuteen liittyvien proteiinien ilmentyminen (äidissä ja napanuoraveressä)

glukokortikoidireseptori; peroksisomiproliferaatioaktivoitu reseptori (PPAR); beeta-11-hydroksisteroididehydrogenaasi tyyppi I (11βHSD1) ja beeta-11-hydroksisteroididehydrogenaasi tyyppi II (11βHSD2) määritetään äidin ja napanuoran veressä sekä äidin ja vastasyntyneen suun limakalvossa.

Lisäksi on valittu 4 geeniä, jotka osallistuvat voimakkaasti rasvakudoksen sikiön ja postnataaliseen kehitykseen; kaksi on reseptoreita: glukokortikoidireseptori ja PPAR-y, ja kaksi ovat metabolisia entsyymejä: beeta-11-hydroksisteroididehydrogenaasi tyyppi I tai 11βHSD1 ja 11-beeta-hydroksisteroididehydrogenaasi tyyppi II tai 11βHSD2. Erittäin tärkeitä ovat PPAR-y1 ja PPAR-y2, jotka syntyvät samasta geenistä vaihtoehtoisella promoottorikäytöllä ja mRNA:lla. Mittaamme tällaisten proteiinien sekä paraoksonaasi/arylesteraasi 1:n (PON1) pitoisuudet äidin ja napanuoran plasmassa Polymerase Chain Reaction- ja Western Blot -tekniikoilla.

Äidin ja lapsen antropometria ja kehon koostumus (Gestafitos)

Äidin ja lapsen pituus mitataan mittakaavalla (Seca 22, Hamburg). Äidille ja lapselle suoritetaan kattava kehonkoostumuksen analyysi (DXA, Hologic Discovery QDR, Nasdaq). Mittaamme myös painon (Inbody R20, Biospace, Korea) sekä vyötärön ja kaulan ympärysmitat sekä äidillä että lapsella.

Äidin ja lapsen verenpaine ja lepo-syke (Gestafitos)

Systolinen ja diastolinen verenpaine sekä sykkeet mitataan kolme kertaa 5 minuutin lepon jälkeen (Omron Hoolddorp) sekä äidiltä että lapselta.

Äidin ja lapsen ravitsemustila (Gestafitos)

Ruokataajuuskysely ja Välimeren ruokavalion noudattamisen kysely toteutetaan. Ravintolisien käyttöä myös tallennetaan.

Äidin ja lapsen fyysinen aktiivisuus, istumatyylinen käyttäytyminen ja unenlaatu

Arvioimme fyysistä aktiivisuutta, istumaan liittyvää käyttäytymistä ja unenlaatuun liittyviä käyttäytymismuotoja (nukahtamisaika, unen tehokkuus jne.) käyttämällä rannekkeeseen kiinnitettäviä kiihtyvyysmittareita (ActigraphGT3X+, Pensacola, Florida, USA) yhdeksän peräkkäisen päivän ajan. Kiihtyvyysmuutokset tallennetaan 5 sekunnin jaksoina lapsille ja 60 sekunnin jaksoina äideille. Keräämme tietoa kokonaisaktiivisuudesta ja aktiivisuuden intensiteetistä (keskimääräinen fyysisen aktiivisuuden intensiteetti), energiankulutuksesta sekä eri intensiteettitasoilla (matala - istuva, kevyt, kohtalainen, voimakas ja kohtalainen–voimakas) vietetyistä minuuteista päivittäin. Unenlaatua tallennetaan myös käyttämällä erityistä Actisleep-ohjelmistoa.

Lapsen terveyteen liittyvä fyysinen kunto: PREFIT-testistö

Lihasvoimaa, kardiorespiratorista kuntoa, tasapainoa, nopeutta ja motorista koordinaatiota-ketteryyttä arvioidaan käyttämällä seuraavia PREFIT-testistön testejä: 20 metrin sukkulajuoksu, käsivoimamittaus, pituushyppy paikalta, yhden jalan tasapainotesti ja 4x10 metrin sukkulajuoksu. PREFIT-testistö on käyttökelpoinen, luotettava, maksimaalinen ja validi työkalu esikouluiän lasten fyysisen kunnon arviointiin.

Aivorakenne, aivojen verenkierto ja aivotoiminto rakenteellisen ja toiminnallisen magneettikuvauksen (Gestafitos) kautta

MRI-tutkimus suoritetaan Granadan yliopiston aivojen, mielen ja käyttäytymisen tutkimuskeskuksessa (CIMCYC). Tiimin jäsen tohtori Irene Esteban-Cornejo on koordinoint aiemmin rahoitettujen tutkimusten neurokuvausalueita (esim. ACTIVEBRAINS-hanke, satunnaistettu kontrolloitu koe, joka arvioi liikunnan vaikutusta lasten aivoihin). Hän on suorittanut kaksi tutkimusjaksoa Monashin kognitiivisen ja kliinisen neurotieteen instituutissa Australiassa, hänellä on maisterin tutkinto edistyneestä MRI-analyysistä ja hän on kahden ensimmäisen ACTIVEBRAINS-hankkeen aivoartikkelin pääkirjoittaja, molemmat julkaistu arvostetussa Neuroimage-lehdessä. Tohtori Esteban-Cornejo on myös työskennellyt liikunnan ja aivoterveyden johtavien asiantuntijoiden kanssa (Erickson KI, Kramer AF ja Hillman CH) Northeastern Universityssa ja Pittsburghin yliopistossa. Tohtori Erickson ja neurotieteilijä Marina López-Solà kuuluvat myös nykyiseen hanketiimiin.

Kognitio (Gestafitos)

Kolme keskeistä toiminnanohjauksen osa-aluetta arvioidaan:

1. Kognitiivinen inhibiti: Arvioidaan Stroop-testillä, joka sisältää kolme osiota arvioiden häiriötekijöitä tunnistettaessa sanojen musteväriä, kun sanat eivät vastaa niiden merkitystä.

2. Kognitiivinen joustavuus: Arvioidaan kahdella erillisellä testillä:

   Suunnittelun sujuvuustesti: Koostuu kolmesta asteittaisesta osiosta, joissa osallistujat luovat yksilöllisiä suunnitelmia eri sääntöjen mukaisesti 60 sekunnissa, arvioiden joustavuutta, luovuutta ja visuaalisten kuvioiden tuottamista.

   Polun muodostamisen testi: Viisi osiota, jotka arvioivat visuaalista hakunopeutta, tarkkaavaisuutta, henkistä joustavuutta, työmuistia ja motorista toimintaa.

3. Työmuisti: Arvioidaan tietokoneistetulla n-back-tehtävällä (katso MRI-osio), joka arvioi kykyä samanaikaisesti tallentaa ja käsitellä tietoa.
4. Älykkyys: Arvioidaan Kaufmanin lyhyellä älykkyystestillä (KBIT), joka sisältää alitestejä sanalliselle ja ei-sanalliselle älykkyydelle.

Akateeminen suorituskyky (Gestafitos)

1. Woodcock-Muñoz III Akku: Woodcock-Johnson III:n (WJ III) espanjalainen sovitus, joka koostuu 22 alatestistä, joilla arvioidaan kieltä, matematiikkaa ja luonnontieteitä. Valituilla alatestillä arvioidaan matematiikan sujuvuutta, laskentataitoja, ymmärtämistä ja kirjoittamista.
2. Kouluarvosanat: Vanhemmilta pyydetään myös antamaan lapsen kouluarvosanat arvioinnin aikana olevilta lukuvuilta.

Muut motoriset, kognitiiviset ja kielen kehityksen asteikot:

1. Bayley Scales of Infant Development, Third Edition (BSID-III)
2. Wechsler Intelligence Scale for Children
3. BENCI Akku (Tietokoneistettu lasten neuropsykologinen arviointipatteristo)

Geneettiset ja epigeneettiset analyysit (Gestafitos)

Posken limakalvonäytteet kerätään lapsilta analysoitaessa FTO-geenin polymorfismin rs9939609 ja MC4R-geenin polymorfismin rs17782313 ilmentymistä. DNA eristetään syljestä käyttäen Whatmann®-paperitukia ja orgaanisia eristysmenetelmiä, jotka on optimoitu laadun ja määrän suhteen. Näytteet kvantifioidaan NanoDrop 2000 -spektrofotometrillä (ThermoScientific) ja normalisoidaan noin 5 ng/µL:aan ennen genotypiointia TaqMan-probeilla (Applied Biosystems) RealTime ABI PRISM® 7900 HT -laitteella. Epäonnistuneet näytteet amplifioidaan ja sekvensoidaan käyttäen spesifisiä primeja ja analysoidaan 3130 HID Genetic Analyzer -laitteella (Applied Biosystem). DNA ja RNA eristetään käyttäen QIAamp DNA Mini Kit - ja DNeasy Blood & Tissue Kit -sarjoja (Qiagen) ja käsitellään Qiacube-robotilla.

Oksidatiivinen stressi ja antioksidanttinen puolustus (Istukkaharjoittelu)

Rasiliukoisten antioksidanttien (tokoferoli, koentsyymi Q10 ja Q9 sekä retinoli) pitoisuus istukassa analysoidaan HPLC-menetelmällä, ja typpioksidia sekä kokonaisantioksidanttikykyä ABTS-menetelmällä.

• Proteiinien hapettumisvauriot: karbonyyliproteiinit kaupallisilla testaussarjoilla (spektrofotometria).
• Lipidien hapettumisvauriot: 4-hydroksinonenaali ja isoprostaanit kaupallisilla testaussarjoilla (spektrofotometria ja ELISA). DNA:n hapettumisvauriot: 8-hydroksiguanosiiini kaupallisilla testaussarjoilla (ELISA).

Biogeneesin, autofagian, mitokondrioiden fuusio-fissioprosessien merkkiaineiden ilmentyminen (Placentraining)

Mitokondriodynamiikan ja niiden laadunvalvonnan muutokset ovat keskeinen näkökohta havaittujen löydösten selittämisessä.

Siksi Western-blottauksen tai RT-PCR:n avulla mitokondriaaliset prosessit fissio (Drp1, Fis1 ja OPA1), fuusio (Mfn1 ja Mfn2), biogeneesi (PGC1alpha, Tfam, Sirt1, Nrf1, Nrf2) ja autofagia (PARKIN2, PINK1, Beclin-1, ATG8, ATG5, ATG12, VDAC1).

Jäämä- ja ultrajäännösmineraalit (Istukkakoulutus)

Plasenttanäytteiden näiden välttämättömien (Ca, Mg, Mn, Fe, Cu, Zn, Se) tai myrkyllisten alkuaineiden (Hg, V, Cr, As, Cd, Pb, Ni) kokonaispitoisuuden määritys suoritetaan ICP-MS-laitteistolla (Agilent 7500, Agilent Technologies, Tokio, Japani), jossa on Meinhard-tyyppinen sumutin (Glass Expansion, Romainmotier) ja joka on varustettu He-törmäyskennolla.

Genominen ja metylaatio (Placentraining)

Näytteet käsitellään kuten aiemmin "Geenianalyysiosiossa" on kuvattu. Genominen ja metylaatioanalyysi toteutetaan pyrosekvensointimenetelmällä. Tämä kehitetään FTO- ja MC4R-geenien havaitsemiseksi. Plasentoiden genomista DNA:ta eristetään käyttäen DNeasy Blood&Tissue -sarjaa suositellun protokollan mukaisesti (Qiagen N.V, Hi.GE). DNA:n laadun ja määrän tarkistamisen jälkeen FTO- ja MC4R-geenien promoottorit monistetaan ennaltasuunniteltuja PyroMark CpG -testejä käyttäen. Alueen monistaminen näillä alukkeilla mahdollistaa CG-parien metylaatiotilan suoran mittaamisen kyseisellä alueella. Ensin monistamme FTO- ja MC4R-geenien kiinnostavat alueet PCR:llä käyttäen PyroMark PCR -sarjaa (QIAGEN N.V, Hi.GE), joka mahdollistaa metyloituvien CG-nukleotidien merkitsemisen. Reaktiotuotteet (yksi per näyte ja geeni) puhdistetaan ja käytetään sekvensointireaktioon.

Ehdokasgeenien ilmentyminen ja pienimuotoinen RNA-analyysi (Placentraining)

Metabolisten reittien paremman ymmärtämisen vuoksi toteutamme ehdokasgeenien tutkimuksen sekä miRNA:iden määrittämisen, mikä mahdollistaa genotyyppi-ilmaisu-ympäristö-suhteen selvittämisen (Small RNA Sequencing -analyysin avulla).

mRNA- ja miRNA-analyyseissä istukka-RNA saadaan käyttämällä "RNeasy Mini" -kittiä (Qiagen) valmistajan ohjeiden mukaisesti. RNA:n eheys analysoidaan "RNA 6000 Nano chip" -sirulla (Agilent) käyttäen Bionalalyzer 2100 -laitetta (Agilent) ja pitoisuus lasketaan NanoDrop 2000 -laitteella (ThermoFisher Scientific).

Ennalta suunniteltuja TaqMan Gene Expression -testejä (ThermoFisher Scientific) käytetään ehdokasgeenien ilmaisun tutkimiseen: IL6, CXCL8, TNF-alfa, CSF3, BDNF; FTO, MC4R ja KL klotho (KL).

Kohdennettu ja kohdennaamaton metabolomiikka- ja lipidomiikka-analyysi

Kohdennettuja metabolomiikka-analyysejä suoritetaan käyttämällä nestekromatografiaa, joka on yhdistetty massaspektrometriaan. Lipidilajien uutto suoritetaan plasmanäytteistä MTBE:llä. Kymmenen μl uutettua näytettä siirretään UPLC 1290 -laitteeseen (Agilent Technologies, Barcelona, Espanja), joka on varustettu käänteisfaasikolonnilla ja joka on yhdistetty QTOF-massaspektrometriin, malli 6545 (Agilent Technologies, Barcelona, Espanja). Data kerätään positiivisessa ja negatiivisessa elektroruiskutus-tilassa. MassHunter- (Agilent Technologies, Barcelona, Espanja) ja R-ohjelmistoa käytetään datan keräämiseen, uuttamiseen, kohdistamiseen, suodattamiseen ja normalisointiin laadunvalvontamenetelmin. Kohdentamattomia metabolomiikka-analyysejä suoritetaan käyttämällä nestekromatografiaa, joka on yhdistetty massaspektrometriaan. Metaboliiittien uutto suoritetaan plasmanäytteistä metanolilla.

Toksiset aineet (Istutuskoulutus)

Vapaiden bioaktiivisten fenolien pitoisuudet määritetään moniluokkaisella ultra-tehokkaalla nestekromatografialla yhdistettynä tandem-massaspektrometriaan (UHPLC-MS/MS). Seuraavia fenoleja arvioidaan:

bisfenoli A; parabeenit: metyyliparabeeni, etyyliparabeeni, propyyliparabeeni, butyyliparabeeni; bentsofenonit (BzP): BzP-1, BzP-2, BzP-3, BzP-6, BzP-8, 4-hydroksi-BzP. Perfluorialkyyliaineiden pitoisuudet istukassa arvioidaan yhdistämällä suola-avusteinen neste-nesteuutto dispersiiviseen neste-nestemikrouuttoon ja UHPLC-MS/MS:ään. Seuraavia perfluorialkyyliaineita mitataan: PFHxA, PFHpA, PFOA, PFNA, PFDA, PFUnA, PFDoA, PFTrA, PFHxS ja PFOS.

Tulehdus-, tulehdusta estävät, verisuonien muodostus- ja angiogeneesimerkkeimet (Istukankoulutus)

Käytämme Luminex xMAP-teknologiaa (Millipore, Darmstadt, Saksa) -sarjoja arvioimaan istukan Fractalkineä, IL-1α:ta, IL1β:ta, IL-RA:ta, IL-2:ta, IL-6:ta, IL-8:ta, IL-10:ta, IFN-γ:ta, TNF-α:ta, TNF-β:ta, aivoperäistä hermovälittäjäainetta, epidermaalisia kasvutekijää, fibroblastien kasvutekijää 2:ta, granulosyytti-koloniastimuloivaa tekijää, granulosyytti-makrofagikoloniasimuloivaa tekijää, verihiutaleperäistä kasvutekijä-AA:ta, monosyyttikemoatraktanttiproteiini-1:ä, verisuonen endoteelikasvutekijää. Näitä määrittelyitä varten käytämme Human Sepsis Magnetic Bead Panel 3 Multiplex Assay -testiä (tuotenro HTH17MAG-14K).